NGF诱导PC12细胞神经元样细胞分化

目的:建立PC12细胞的神经元样细胞分化模型,并探讨ERK蛋白在PC12细胞神经元样细胞分化中的可能机制.方法:以10、20、50 g/L的NGF(NGF溶于PBS,培养基中PBS的终浓度不超过2%)培养PC12细胞,应用倒置相差显微镜、显微镜测微尺及流式细胞仪鉴定PC12细胞的分化,以确定NGF使用剂量.运用免疫印迹检测不同浓度、不同作用时间时ERK蛋白在PC12细胞中的表达,并进行统计学分析.结果:随NGF剂量的升高,PC12细胞的体积、最长突起长度和突起数目均会增大或增多。统计学分析证明50 g/L的NFG作用48 h足以诱导PC12细胞的交感神经样改变。尽管ERK总蛋白水平在NFG作用前后无明显改变,但在NFG作用5 min后磷酸化的ERK蛋白水平即显著升高,达到峰值,并持续约1 h.50 g/L的NFG作用于PC12细胞48 h可使细胞发生明显的G1期阻滞.结论:PC12细胞可在NGF作用下出现交感神经样改变,并且细胞的分化程度依赖于NGF的使用剂量和作用时间.在NGF诱导的PC12细胞神经元样分化中ERK蛋白的磷酸化对NGF呈现剂量和时间依赖性,提示ERK蛋白在分化的早期发挥重要作用.     

Cdk5及p35在NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制.方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化PC12细胞,检测其对NGF撤退诱导的凋亡作用影响,向已分化PC12细胞转染真核表达质粒pCMV-p35-IRES-Cdk5,检测过表达CdkS/p35对PC12细胞凋亡的影响.结果:NGF撤退36h会引起已分化PC12细胞出现典型的DNA Ladder凋亡特征,MTT检测结果也显示,NGF撤退对PC12细胞的损伤呈时间依赖性;Roscovitine预处理已分化PC12细胞可以抑制NGF撤退诱导的细胞凋亡率,但不影响Cdk5/p35蛋白表达水平;向已分化PC12细胞中转染真核表达质粒后,能检测到Cdk5/p35蛋白的过表达,并引起PC12细胞出现凋亡样改变.结论:Cdk5及p35的活化与NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡过程密切相关,抑制Cdk5的活化有抑制细胞凋亡保护神经元的作用.     

香芹酚对H2O2诱导神经细胞突触损伤的修复作用

主要探究香芹酚在神经细胞中对于神经突起生长的影响.首先,应用不同浓度H_2O_2处理PC12细胞建立神经细胞损伤模型;其次,将药物CA作用于处理后的PC12细胞,用MTT检测细胞活力、Hoechst33342染色观察细胞凋亡的变化;最后,在光镜下观察CA对于细胞突起的影响.另外,培养神经元细胞用神经生长因子作为阳性对照,进一步研究CA对神经细胞突起生长的影响,发现:浓度400μmol/L H_2O_2能明显地诱导PC12细胞凋亡,增加细胞凋亡率,导致神经突起短缩;而浓度0. 01 mmol/L的CA能明显降低细胞凋亡率,使神经突起延伸,对神经元细胞突起生长也有一定的促进作用.研究结果显示CA可保护神经细胞损伤,降低神经细胞凋亡,促进神经突起的生长.     

镉致PC12细胞的神经毒性

镉是环境中常见的重金属,为了研究镉暴露可能会对神经系统造成的损伤,文章以PC12细胞为模型,观察不同浓度氯化镉暴露对PC12细胞的损伤.实验用0.1、0.5、2.5μmol/L镉处理PC12细胞24 h,MTT比色法检测细胞存活率,并检测0.1、0.5μmol/L镉处理后PC12细胞分化和活性氧变化.MTT结果显示,0...     

琐琐葡萄多糖对PC12细胞损伤的神经保护作用

 体外培养PC12细胞,采用20μmol/L β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用24h诱导细胞损伤,建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究琐琐葡萄多糖(VTP)对PC12细胞损伤的神经保护作用。设立对照组、模型组和VTP保护组(20,40,80μg/mL),CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,20,40,80μg/mL VTP可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。由此推论,VTP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤具有明显的保护作用。     

基于GC-MS研究OPFRs对PC12细胞代谢的影响

基于气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)研究了4种有机磷阻燃剂(organophosphate flame retardants, OPFRs)对神经细胞PC12代谢的影响.首先将PC12细胞分别暴露于4种不同浓度的阻燃剂中,利用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法选出对细胞存活率影响较小的浓度.然后在该浓度下培养细胞并提取代谢物,利用GC-MS对细胞内的代谢物进行非靶向代谢组学分析.接着采用SIMCA软件对定量后的代谢数据进行OPLS-DA分析,找出细胞中受到OPFRs影响的关键代谢物,并利用生物信息学方法分析这些关键代谢物所涉及的重要代谢通路.该研究共鉴定出PC12细胞中的38种小分子代谢物.经过多元统计分析发现4种OPFRs均影响PC12细胞的代谢表型.OPFRs在100μmol/L和1 000μmol/L浓度下,对PC12细胞表现出显著的细胞毒性.其中糖代谢和氨基酸代谢是受影响的主要代谢通路.     

大蒜多糖抗氧化活性及其对PC12细胞增殖的影响

目的: 检测大蒜多糖对大鼠嗜铬瘤细胞株(pheochromocytoma cells, PC12)增殖的影响和对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.方法:应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测大蒜多糖对细胞增殖的影响;建立H2O2致PC12细胞损伤模型,于倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内和细胞培养上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果:大蒜多糖各剂量组均能显著提高正常PC12细胞的存活数,大蒜多糖各剂量组均能有效对抗由25 μmol/L H2O2引起的细胞存活率下降和细胞凋亡,可明显改善细胞形态的衰变,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,提高SOD活性.结论: 大蒜多糖促进正常PC12细胞增殖;且对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关.     

姜黄素对ActD/TNF-α协同诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察放线菌素D (ActD)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)的协同损伤作用,探讨中药单体姜黄素对这种损伤的保护作用及机制.方法:采用MTr法确定实验药物的最佳浓度;LDH法检测PC12细胞的损伤;倒置显微镜观察细胞形态变化;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性.结果:ActD/TNF-t可致PC12细胞的生存力下降(P＜0.05);细胞培养液中LDH的活性升高(P＜0.05);PC12数量减少,体积缩小,突起变短;可致PC12细胞内caspase-3的活化增强(P＜0.05).浓度为5μmol/L姜黄素可阻止ActD/TNF-α所致的细胞的生存力下降(P＜0.05);抑制ActD/TNF-α引起的细胞培养液中LDH的活性升高(P＜0.05);拮抗ActD/TNF-α引起的细胞数量减少,体积变小,突起减少变短;抑制ActD/TNF-α引起的PC12细胞内caspase-3的活化(P＜0.05).结论:姜黄素可以拮抗ActD/TNF-α协同作用引起的PC12细胞损伤,其机制可能与抑制caspase-3的活化有关.     

化学低氧诱导剂二氯化钴对PC12细胞自噬的影响

文章研究化学性低氧诱导剂二氯化钴(CoCl_2)对PC12细胞自噬的影响。体外培养PC12细胞,用不同浓度CoCl_2处理PC12细胞24 h。首先通过MTT实验选取后续的CoCl_2处理浓度,用荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)实验检测不同浓度CoCl_2处理PC12细胞24 h后细胞内HIF-1α基因表达水平。用Western Blot方法检测CoCl_2处理后自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果表明,400、800μmol/L CoCl_2处理PC12细胞24 h不仅能显著降低细胞存活率,并且能显著提高HIF-1α基因表达,即表明用CoCl_2造模确实可以模拟细胞体外缺氧。此外,800μmol/L CoCl_2处理组的Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量出现显著降低,表明CoCl_2处理抑制了细胞自噬,并且该种抑制是呈时间依赖的。研究结果表明,CoCl_2引起的化学性缺氧会损伤PC12细胞,并且会抑制细胞正常的自噬,该异常的自噬可能参与了CoCl_2致PC12细胞的损伤。     

酒精对PC12细胞凋亡的诱导作用

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及其与线粒体凋亡途径的关系.结果显示,采用50、100、200、400和800mmol/L浓度的酒精处理去血清培养的PC12细胞24h后,细胞存活率分别是单纯去血清培养细胞存活率的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%,呈浓度依赖性,与对照组比较差异显著(P0.05).Hoechst 33342/PI染色法观察到典型凋亡现象,如核型固缩、染色质凝集等.DNA琼脂糖凝胶电泳可见100~400mmol/L浓度酒精处理组呈现凋亡细胞典型梯状DNA.酒精能使PC12细胞线粒体膜电位下降并呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞凋亡过程中,凋亡关键蛋白Caspase-3、Caspase-9表达量升高.上述结果表明,酒精能够诱导PC12细胞凋亡,诱导作用随浓度升高而增强且酒精诱导PC12细胞凋亡与线粒体凋亡途径有关.     

谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的研究

采用MTT方法观察一定浓度的谷氨酸对PC12细胞活性的影响，结合凝胶电泳和荧光显微镜观察细胞有无DNA断裂和凋亡形态学改变。结果发现谷氨酸确有兴奋毒作用，细胞死亡机制主要为凋亡。     

神经毒素MPP+诱发PC12细胞凋亡的实验研究

采用细胞体外培养、噻唑蓝(MTT)比色法、荧光染色技术、透射电镜、流式细胞技术结合的方法,研究了神经毒素MPP 对PC12细胞增殖和凋亡的影响,为进一步研究药物的神经保护作用提供实验模型.结果表明,MPP 对PC12细胞的诱导凋亡作用呈时间和剂量相关性.0.20mM的MPP 作用于PC12细胞48h后,细胞的存活率降低为60%,细胞核发生凝集和断裂,超微结构发生了一系列的变化,呈现出明显的凋亡特征.流式细胞技术的Annexin v-FTTC和PI双染法显示,活细胞占20.2%,晚期凋亡/坏死细胞占51%,早期凋亡细胞占6.75%.提示,MPP 能够诱导PC12细胞凋亡,是研究神经保护作用药物很好的体外实验模型.     

对大鼠PC12细胞用于定量测定神经生长因子活性两种方案的评价

建株的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤ＰＣ１２细胞，在神经生长因子ＮＧＦ的作用下，会长出神经突起。这一现象被用于神经生长因子的活性测定。但就定量测定而言、目前已 方法，方案，包括判定阳性细胞的标准，均有一定差异，而我国也尚未建立起对这一重要的 活性的标准测定法。     

Neuronal growth inhibitory factor inhibits pheochromo-cytoma PC12 in vitro

Neuronal growth inhibitory factor (GIF),named Metaliothioneins-Ⅲ (MT-Ⅲ), is the first protein validated to be capable of inhibiting the growth of neurons in nervous system. We have detected the effects of recombinant GIF on the growth of neuroblastoma SY5Y and pheochromocytoma PC12 by the MTT (Thiazolyl blue) reduction assay. Recombinant GIF inhibited PC12 in vitro; the inhibitory rate was about 25% when GIF was at 100 mg/L; and the inhibitory rate was about 50% when GIF was at 300 mg/L. It is shown that PC12 could serve as a proper model for detecting neuronal growth inhibitory activity of GIF. Recombinant GIF did not inhibit neuroblastoma SY5Y in vitro, a common model of neuroma; it is also shown that GIF could not inhibit neuromata extensively. The reason for GIF inhibiting PC12 may be that PC12 have some properties of cholinergic neuron. It must play an important role in discovering the mechanism of GIF's neuronal growth inhibitory activity.``     

Neuronal growth inhibitory factor inhibits pheochromocytoma PC12 in vitro

Neuronal growth inhibitory factor (GIF), named Metallothioneins-Ⅲ (MT-Ⅲ), is the first protein validated to be capable of inhibiting the growth of neurons in nervous system. We have detected the effects of recombinant GIF on the growth of neuroblastoma SY5Y and pheochromocytoma PC12 by the MTT (Thiazolyl blue) reduction assay. Recombinant GIF inhibited PC12 in vitro; the inhibitory rate was about 25% when GIF was at 100 mg/L; and the inhibitory rate was about 50% when GIF was at 300 mg/L. It is shown that PC12 could serve as a proper model for detecting neuronal growth inhibitory activity of GIF. Recombinant GIF did not inhibit neuroblastoma SY5Y in vitro, a common model of neuroma; it is also shown that GIF could not inhibit neuromata extensively. The reason for GIF inhibiting PC12 may be that PC12 have some properties of cholinergic neuron. It must play an important role in discovering the mechanism of GIF’s neuronal growth inhibitory activity.     

Inhibition of growth factor-induced differentiation of PC12 cells by microinjection of antibody to ras p21

The protein products (p21) of the ras cellular proto-oncogenes are thought to transduce membrane signals necessary for the induction of cell division. However, there is uncertainty as to the precise role of ras p21 in mediating ligand-membrane receptor signals leading to cell differentiation. Treatment of rat phaeochromocytoma cells (PC12) with nerve growth factor (NGF) results in the induction of a number of phenotypic characteristics of sympathetic neurones, including cessation of cell division and outgrowth of neuronal processes (neurites). Here we report that microinjection of antibody to ras p21 into PC12 cells inhibited neurite formation and resulted in temporary regression of partially extended neurites, an effect which was observed up to 36 h after initiation of NGF treatment. Neurite formation induced by cyclic AMP was unaffected by injection of anti-p21 antibody. These results indicate that p21 is involved in the initiation phase of NGF-induced neurite formation in PC12 cells and has a role in hormone-mediated cellular responses distinct from cell proliferation.     

Effect of nerve regeneration factor on differentiation of PC12 cells and its signaling pathway

The effects of nerve regeneration factor (NRF) on neuronal differentiation of PC12 cells and its signaling pathway are investigated by morphological observation and immunofluorescent cytochemical method, and the activity of ERK1/2 in NRF-treated PC12 cells in absence of serum is also studied by immuno-coprecipitation and Western blot analysis. The MEK1/2-specific inhibitor U0126, the broad-spectrum protein kinase C (PKC) inhibitor G?6983 and tyrosine protein kinase (TPK) inhibitor genistein were used to determine the roles of the activation of ERK1/2 by NRF and the involvement of certain kinds of PKC or TPK receptor in this activation process. The results show that U0126 and G?6983 inhibit the activation of ERK1/2 by NRF to different extents, while genistein has no effect on it, demonstrating that NRF remarkably induces neuronal differentiation of PC12 cells through activating ERK1/2 in a dose-dependent and time-dependent manner.     

PC/ATX 中断控制系统使用性能的探究

通过使用不同的中断请求线进行中断或中断嵌套服务的操作实验，结果表明：IRQ2仍可作为独立有效的中断请求线使用；空闲的IRQ10、IRQ12和IRQ15都是外部中断源可选用的有效中断请求线。本实验结果为合理、有效地应用PC／ATX系统的中断控制资源提供了可靠的实验依据。