兔圆小囊中SYP分布的免疫组化和免疫电镜观察

采用免疫组化和免疫电镜细胞化学的方法,对家兔圆小囊组织中的SYP阳性细胞和胞间阳性反应物的光镜和电镜超微结构特点进行了研究。结果显示圆小囊组织中大量分布着SYP阳性表达细胞和胞间阳性突触小泡样结构,这一结果为证明圆小囊作为外周神经免疫内分泌器官提供了形态学证据。     

兔圆小囊淋巴组织中11种脑肠肽类物质免疫组织化学定位观察

采用免疫组化方法,观察P物质、胰高血糖素、胃泌素、胰多肽、生长抑素、促甲状腺素、促肾上腺素皮质激素、降钙素、胰岛素、突触素、血管活性肠肽等11种脑肠肽类物质在兔圆小囊淋巴组织中的分布及定位。研究发现上述物质在兔圆小囊淋巴组织及粘膜内均有分布,但在淋巴组织中上述物质阳性细胞的数量及分布部位各不相同。其中降钙素、胰岛素2种物质,在粘膜下淋巴组织中分布很少,只可偶见阳性细胞;突触素阳性细胞稍多于上述2种物质;P物质、胃泌素、生长抑素、血管活性肠肽阳性细胞较多,尤其是在圆顶上部淋巴组织和淋巴滤泡中均大量散在分布;促肾上腺素、生长激素、促甲状腺素阳性细胞也比较多,主要分布在淋巴滤泡部位,圆顶上部淋巴组织虽然也存在阳性细胞,但数量明显少于淋巴滤泡部位;胰多肽主要分布在圆顶上部的淋巴组织中,淋巴滤泡处较少。     

兔圆小囊淋巴组织中神经内分泌细胞

为了确定兔圆小囊淋巴组织中神经内分泌细胞的存在,采用NSE、S-100蛋白、P物质、突触素及5-羟色胺单克隆抗体对其进行了免疫组织化学观察及超微结构观察。结果显示：圆小囊淋巴组织中各区均含有NSE、S—100蛋白、P物质、突触素及5-羟色胺免疫组织化学反应阳性细胞。这些细胞散在或成团分布,其形态、大小及分布部位与嗜银细胞一致。电镜观察发现,在所观察的各例圆小囊样品中,淋巴组织中均见到含有分泌颗粒的细胞。这些细胞单个散在或成团分布于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞等之间;分泌颗粒成簇分布于胞浆内,它们形态不一,大小不等,直径约100—600nm,有的细胞内颗粒含有明显的核芯和晕轮。根据上述特点。认为这些细胞应归属于弥散神经内分泌系统(DNES)。     

不同细菌刺激下离体圆小囊中ecNOS信号的动态变化

揭示了在细菌刺激下在肠道黏膜免疫中的作用。用圆小囊离体培养大肠杆菌O78金黄色葡萄球菌、沙门氏杆菌和巴氏杆菌作为刺激物,观察在细菌刺激后不同时间间隔下,圆小囊的黏膜部、黏膜下淋巴组织的圆顶部和滤泡部ecNOS含量的变化情况。结果:在四种细菌刺激下,圆小囊中ecNOS的表达量均有变化,但是在统计学上的差异并不明显(P>0.05)。可以提示,在对抗感染过程中,ecNOS的表达量和造成感染的细菌抗原物质本身的性质没有直接关系。但是,各个实验组之间非统计学上的细微差别还是存在的,这可能与圆小囊器官在处理不同抗原物质上还存在一些差异有关。即使同种细菌在整个实验区间内,圆小囊不同部位的ecNOS表达量也有一些差别。提示由于不同细菌表面的抗原表位的不同,可能对圆小囊产生了不同的分子水平的刺激形式,从而产生了多种多样的变化形式和趋势。     

兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒及禽流感病毒血清抗体水平影响的研究

选择90只1日龄星杂蛋鸡随机分为两组,实验组在7、14、21、28、35、42、49日龄时分别胸肌注射无菌处理过的兔圆小囊抗菌肽0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.5、0.5mg,对照组同时分别注射相同体积的灭菌生理盐水。常规免疫后,分别于第7、14、21、28、35、42、56日龄采血分离血清,实验组及对照组均随机抽取10只鸡的血清进行血凝抑制实验(HI),分别测定NDV和AIV血清抗体的血凝抑制效价。结果显示:实验组NDV和AIV血清抗体水平均明显高于对照组(P<0.01)。表明兔圆小囊抗菌肽可显著提高鸡新城疫弱毒苗及禽流感灭活苗的抗体水平。     

回心草对兔动脉粥样硬化和心肌组织CD34、VEGFR2表达的影响

目的:建立兔实验性动脉粥样硬化和心肌梗死双模型,观察回心草提取液对兔动脉粥样硬化斑块和缺血心肌血管新生的影响.方法:选择30只家兔,随机分为3组,普通饲料对照组(对照组)10只,高脂饲料组(高脂组)10只,回心草干预组(干预组)10只,共喂养9周.第9周末,采用开胸结扎兔冠状动脉左前降支(LAD)的方法建立兔急性心肌梗死模型.实验终点,测定血液生化指标,对血管及心脏组织行病理学检查,免疫组化染色测定心肌组织CD34及VEGFR2阳性反应强度.结果:高脂组、干预组与对照组比较,TC、TG、LDL-C明显升高,具有极显著性差异(P0.01);干预组与高脂组比较,TC、TG和CPK明显下降(P0.01),LDL-C下降(P0.05).高脂组与对照组病理评分比较,差异有极显著差异(P0.01);干预组的病理评分较对照组高,较高脂组低(P0.05).高脂组心肌组织CD34和VEGFR2阳性组织相对灰度值均明显高于对照组(P0.01);干预组VEGFR2及CD34表达水平较对照组高、较高脂组低(P0.05).结论:高脂饲料喂养和开胸结扎兔冠状动脉LAD的方法可成功建立家兔动脉粥样硬化和急性心肌梗死双模型;回心草提取液减轻了动脉粥样硬化和心肌缺血坏死,抑制了心肌组织CD34和VEGFR2的表达.     

“兔瘟”疫苗免疫家兔蚓突免疫细胞的对比观察

“兔瘟”是近年来在我国广泛流行的一种高度致死性的急性传染病,给养兔业造成了巨大的损失。为探求家兔对“兔瘟”的特异免疫机理,笔者应用常规酸性非特异性醋酶(ANAE)染色法分别对临床健康、“兔瘟”免疫和患“兔瘟”死亡的成年家兔蚓突免疫细胞进行了对比性观察,现将结果报告如下: 材料与方法 1、健康家兔:选取体重2000—3000克的青紫兰家兔,经“兔瘟”HI测定阴性,隔离饲养观察5天,确认临床健康的10只。 2、免疫家兔:用本校研制的10％“兔瘟”组织脏器灭活疫苗免疫19～21天,经“兔     

PCNA基因在小鼠睾丸发育过程中的表达研究

为探讨PCNA基因在小鼠睾丸生后发育全过程中的表达规律,以16组出生后不同发育时期的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,在其石蜡组织切片上进行PCNA蛋白的免疫组化检测及PCNA基因的DNA-mRNA原位杂交检测.结果发现:PCNA蛋白仅在精原细胞及初级精母细胞中表达,其表达峰值出现在小鼠生后第11天;PCNA基因在初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞以及少数精原细胞中均有表达,其中初级精母细胞中的表达信号相对强烈.上述结果表明,PCNA基因参与了小鼠睾丸发育过程中精原细胞及初级精母细胞的DNA复制过程,其mRNA表达和蛋白质表达存在着一定差异.     

环境低氧对高原鼢鼠和高原鼠兔肝脏组织VEGF_(xxx)的表达和微血管密度的影响

为了进一步阐明高原鼢鼠和高原鼠兔对低氧环境的适应机制,应用分子生物学和免疫组化技术研究低氧环境对高原鼢鼠和高原鼠兔肝脏组织中VEGFxxx剪切体的组成、VEGFxxx剪切体mRNA表达水平以及微血管密度的影响。研究结果表明,低海拔(3 200 m)和高海拔(4 200 m)的高原鼢鼠肝脏组织中VEGF188,VEGF164,VEGF144和VEGF120都有表达,而低海拔的高原鼠兔肝脏组织中表现为VEGF189,VEGF165和VEGF121,高海拔的高原鼠兔肝脏组织中只有VEGF189和VEGF165有表达。随着海拔的升高,高原鼢鼠肝脏组织中VEGF188,VEGF164和VEGF120的表达水平和高原鼠兔肝脏组织中VEGF189和VEGF165的表达水平都没有显著性差异,但是在高海拔的高原鼠兔肝脏组织中VEGF121几乎不表达。随着海拔的升高,高原鼢鼠和高原鼠兔肝脏组织中VEGFxxx剪切体mRNA表达水平没有显著性变化,但是微血管密度有所升高,提示低氧增强VEGF mRNA的稳定性。无论是高海拔环境,还是低海拔环境,高原鼢鼠肝脏组织中VEGF188,VEGF164和VEGF120表达水平和微血管密度都高于高原鼠兔,这表明低氧可以上调VEGFxxx的表达,从而促进组织微血管的生长。     

热原检查用家兔正常体温的统计分析

目的　分析热原检查用家兔正常体温的动态变化。方法　按照有关规程对热原检查用家兔进行体温测定 ,并采用生物统计方法进行统计分析。结果　热原检查用家兔一年中正常体温 5— 7月份与 2— 4月份存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ;二次用兔的正常体温平均值明显高于新兔的正常体温平均值 ,二者温差为 0 0 7℃ ,且存在显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　热原检查用家兔正常体温随时间和使用状态而有所变化     

小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用

阿糖胞苷是白血病的重要药物,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病,并取得了一定的疗效,但其作用机制尚未完全阐明,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关.文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara-C(10-8M)对HL-60细胞周期和细胞凋亡的影响,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P53蛋白和p53mRNA、bcl-2mRNA表达水平的改变,以探讨bcl-2和p53基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的关系.结果表明:小剂量Ara-C能诱导HL-60细胞凋亡,其分子机制可能与P53蛋白、p53mRNA表达增加和bcl-2mRNA表达降低有关.     

Increased levels of myelin basic protein transcripts in virus-induced demyelination

In multiple sclerosis, a demyelinating disease of young adults, there is a paucity of myelin repair in the central nervous system (CNS) which is necessary for the restoration of fast saltatory conduction in axons. Consequently, this relapsing disease often causes marked disability. In similar diseases of small rodents, however, remyelination can be quite extensive, as in the demyelinating disease caused by the A59 strain of mouse hepatitis virus (MHV-A59), a coronavirus of mice. To investigate when and where oligodendrocytes are first triggered to repair CNS myelin in such disease, we have used a complementary DNA probe specific for one major myelin protein gene, myelin basic protein (MBP), which hybridizes with the four forms of MBP messenger RNA in rodents. Using Northern blot and in situ hybridization techniques, we previously found that MBP mRNA is first detected at about 5 days after birth, peaks at 18 days and progressively decreases to 25% of the peak levels in the adult. We now report that in spinal cord sections of adult animals with active demyelination and inflammatory cells, in situ hybridization reveals a dramatic increase in probe binding to MBP-specific mRNA at 2-3 weeks after virus inoculation and before remyelination can be detected by morphological methods. This increase of MBP-specific mRNA is found at the edge of the demyelinating area and extends into surrounding areas of normal-appearing white matter. Thus, in situ hybridization with myelin-specific probes appears to be a useful method for detecting the timing, intensity and location of myelin protein gene reactivation preceding remyelination. This method could be used to elucidate whether such a reactivation occurs in multiple sclerosis brain tissue. Our results suggest that in mice, glial cells react to a demyelinating process with widespread MBP mRNA synthesis which may be triggered by a diffusible factor released in the demyelinated areas.     

"两次打击"急性肺损伤大鼠肺组织NF-kB p65 mRNA的表达

目的观察用油酸(OA)和脂多糖(LPS)两次打击急性肺损伤大鼠肺组织核因子———kB(NF_kB)p65 mRNA表达量的变化,探讨转录调节因子NF_kB p65与急性肺损伤的关系。方法用OA(0.2mL/kg)和LPS(2mg/kg)两次打击,建立两次打击急性肺损伤(ALI)模型,进行ALI大鼠血液白细胞(WBC)分类计数和肺指数测定、肺组织病理学检查,采用原位杂交检测肺组织中NF_kB p65 mRNA的表达。结果两次打击后的ALI大鼠血液中WBC和肺指数显著升高,WBC分类呈现淋巴细胞比率降低而中性粒细胞比例增高的变化,呈典型的急性炎症表现,肺脏病理改变严重。原位杂交检测显示,ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达明显增强。结论在ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达量增强,参与了急性肺损伤的发病作用。     

家兔蓝斑复合核注射P物质对血压和心率的影响

目的 :探讨P物质在蓝斑复合核对心血管活动的影响。方法 :实验在 35只麻醉、制动、人工呼吸的家兔上进行。结果 :将SP微量注入蓝斑复合核 ,家兔血压明显升高 ,心率加快 ;于蓝斑复合核区内微量注射P物质抗血清 ,使血压降低 ,心率减慢。结论 :SP在蓝斑复合核具有兴奋心血管活动的效应 ,内源性SP可能通过兴奋蓝斑复合核区神经元参与心血管活动的调节     

Microscopic and ultramicroscopic localizations and quantitative analysis of 5-HT receptors in human placentas

The localizations of 5-hydroxytryptamine receptor (5-HTR) at light and electron microscopic levels and its quantitative analysis in human placentas were studied by using immunohistochemistry and in situ hybridization. Both syncytiotrophoblast and cytotrophoblast in placental villi and fetal white blood cells in villose capillary cavity showed 5-HT receptor immunoreactivity, with 5-HT 1A receptor mRNA hybridized signal detected in cytoplasm. But the stromal cells and capillary endothelium in placental villi showed 5-HT receptor immunoreactivity in cytoplasm, without 5_HT\-1A receptor mRNA hybridized signal detected. This suggested that two layers of trophoblast cells may produce 5-HT 1 and 5-HT 2 receptors, that the stromal cells and capillary endothelium in placental villi may only produce 5-HT 2 receptor. By immunohistochemistry at electron microscopic level, the small flattened vesicles and large dense cored vesicle within trophoblast cells showed 5-HT receptor immunoreactivity. This suggested that it may be the result of 5-HT receptors internalization and transportion. Using a quantitative immunohistochemical method, the contents of 5-HT receptor in placenta were higher during the 6th week of gestation, and decreased in 7th and 8th, reoccurred the second peak in the 9th, reduced gradually during the 10th, 20th and 40th of the gestation period. These changes paralleled the contents of 5-HT in the authors' studies, reflecting that 5-HT may be one of the most important bioactive substances in placental self-regulation.     

Cloning and characterization of 37 kDa laminin receptor precursor in pearl oyster, Pinctada fucata

A 1063 bp cDNA clone encoding a putative 37 kDa laminin receptor precursor (37 kDa LRP) is isolated from the mantle tissue of pearl oyster, Pinctadafucata. The amino acid sequence predicted from the cDNA sequence is 301 residues long, with a calculated molecular mass of 33.5 kDa. RT-PCR analysis shows that 37 kDa LRP mRNA is especially highly expressed in the mantle while widely expressed in several tissues. In situ hybridization analysis reveals that 37 kDa LRP is expressed in the outer epithelial cells of the mantle edge, suggesting its involvement in cell proliferation and secretion in P. Fucata. The identification and characterization of 37 kDa LRP in the pearl oyster will help us to further understand the signal transduction in the processes of mantle epithelial cell proliferation and tissue formation.