人工四倍体鲤鲫成熟卵受精过程的扫描电子显微镜观察

以人工四倍体鲤鲫卵子和普通红鲤精子为材料进行人工受精，在受精后的不同时间以扫描电子显微镜观察卵子对精子的应答反应、受精孔形态、数量与大小以及受精过程等超微结构特征. 结果表明，四倍体卵子动物极的卵壳上仅有一个受精孔,但受精孔区域有5—6个似小山丘状的嵴状结构，而鲤却完全没有这种结构. 研究证实：四倍体鲤鲫成熟卵属单受精孔、单精受精类型，其特异的嵴状形态结构可作为区分普通鲤的标记表型.     

新型三倍体鲫鱼—红鲫(♀)×四倍体鲫鲤(♂)

四倍体鲫鲤与二倍体红鲫交配形成了新型三倍体鲫鱼，该三倍体鲫鱼的体侧扁，近似纺锤形，体色为青灰色，无口须.它们的大部分可量比例性状和可数性状都介于父母本之间，并且一些可量比例性状超出亲本范围，体现出杂种特征.第一年养殖结果表明，把同规格三倍体鲫鱼和二倍体红鲫混养，三倍体鲫鱼生长速度比红鲫快11.11%.性腺观察结果表明三倍体鱼的性腺发育比普通二倍体鱼明显滞后，生殖细胞呈退化现象.与以前用四倍体鲫鲤和日本白鲫交配形成的三倍体湘云鲫相比，三倍体鲫鱼不但保持了生长速度快、不育的特点，而且表现出完全没有口须的鲫鱼类型的特征，这在细胞遗传和鱼类育种方面都具有重要意义.     

异源四倍体鲫鲤Sox9a基因保守区序列的克隆及内含子剪接位点分析

用特异于HMG-box保守区的兼并引物扩增了异源四倍体鲫鲤及其原始亲本(红鲫和鲤鱼)的Sox基因. 异源四倍体鲫鲤的扩增产物共有4条带,大小分别约为200,600,900和 1900?bp,而其原始亲本的扩增产物只有3条带,且在雌雄个体中未发现性别特异扩增带. 回收雄性四倍体鱼600?bp扩增带,经亚克隆及测序分析得到一个新的编码71个氨基酸残基的基因. 该基因与虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)、蟾蜍(Xenopus laevis)、鲤鱼(Cyprinus carpio)等的Sox9基因相似性达97%,据此命名为Atsox9a. 通过计算机分析和RT-PCR方法确定该基因含有内含子,并获得其内含子的序列和剪切位点,此内含子剪切位点在进化上是保守的. Atsox9a对于研究异源四倍体鲫鲤性别决定和分化机制及脊椎动物性别进化具有重要的理论意义.     

用团头鲂精子诱导红鲫雌核发育的研究

用遗传失活的团头鲂（Megalobrama amblycephala）的精子诱导红鲫（Carassius auratus Red Variety）进行雌核发育的研究. 红鲫的卵子经适宜UV剂量灭活处理的团头鲂精子激活后，在0—4℃下冷休克40min抑制第二极体的排出使染色体加倍，获得雌核发育红鲫. 它们的受精率、孵化率及成活率分别为（52.6±3.0）%，（23.6±4.1）%和（15.7±3.4）%，其成活率明显高于用鲤鱼精子诱导红鲫雌核发育的成活率（11.3±2.2）%. 以外形特征、染色体数目及性腺发育程度为依据对雌核发育红鲫与对照杂交鱼进行了区分和鉴定，结果表明，Ⅰ龄鱼的体色为红色，染色体数目为100，性腺发育正常的个体为成功的雌核发育红鲫；而染色体数目为124或148，性腺发育滞后的个体为杂交鱼，其中三倍体鲫鲂是不育的（2年观察证明），而四倍体鲫鲂2年才能达到性成熟. 以鲤鱼的精子作为对照，着重讨论了团头鲂精子作为刺激源的优势，即能提高雌核发育鱼的成活率，并可简化对雌核发育鱼的鉴定，研究证明团头鲂的精子是一种非常有效的诱导鲫鱼进行雌核发育的刺激源.     

不同倍性鲫鲤鱼血液及血细胞的比较

对异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫和二倍体红鲫血液指标(红细胞数、血红蛋白值、红细胞脆性、比容)、细胞大小(红细胞及细胞核、白细胞、血栓细胞的长、短径值)及它们的显微结构进行了比较研究,并观察了四倍体鲫鲤血细胞亚显微结构.结果表明:在不同倍性鱼中,四倍体、三倍体、二倍体红细胞在数目、脆性、比容方面随倍性的降低而依次升高;血红蛋白无显著差异;在细胞大小上,四倍体、三倍体、二倍体的红细胞及细胞核、嗜中性粒细胞、单核细胞表现出4∶3∶2的比例关系;在红细胞的形态方面,异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫存在明显差异.同时发现随着倍性的升高红细胞的短径/长径比值减小.在异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫外周血中,均可观察到红细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞,未发现嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞.但三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的嗜中性粒细胞仅有Ⅱ,Ⅲ两种类型,未见含深紫红色颗粒的Ⅰ型嗜中性粒细胞.对不同倍性鱼在血液细胞中出现的共同性和差异性进行了讨论分析.     

异源四倍体鲫鲤成熟性腺和红细胞超微结构观察

用透射电子显微镜观察了繁殖季节异源四倍体鲫鲤成熟精巢、卵巢和血液中红细胞超微结构.成熟精巢由许多小叶组成,小叶内可观察到精原细胞、精子细胞和大量成熟二倍体精子.精原细胞的细胞质内可见核糖体、内质网、线粒体和电子致密物质;支持细胞的细胞质中可见内质网和明显的可能与激素合作有关的颗粒状物质.二倍体精子由头部和尾部组成,头部内充满致密染色质,尾部中央轴丝具有典型"9+2"微管结构.成熟卵巢中Ⅳ和Ⅴ时相卵母细胞外包围着两层滤胞细胞;内层滤胞细胞伸出微绒毛深入透明带和卵黄膜内,并一直延伸到卵细胞的细胞质内.推断微绒毛具有物质和信息交流的功能.Ⅳ时相和Ⅴ时相卵母细胞内的卵黄具有两种形式,一种其外有囊泡包围,另一种外面没有.红细胞中32.43%的细胞核具有独特的哑铃状结构,超微结构显示这种哑铃状结构为细胞核的弯曲变形现象;少数红细胞核有一分为二的分裂现象.红细胞核的这些特征可作为区别四倍体鱼和二倍体鱼的重要标志.在亚显微水平证明四倍体鲫鲤具有正常的成熟精巢和卵巢,它们能够产生正常的二倍体精子和卵子,保证四倍体性能代代相传.     

复合四倍体彭泽鲫雌核发育生殖方式的 胚胎同工酶证据

复合四倍体彭泽鲫是在尖鳍鲤精子刺激的彭泽鲫雌核发育子代中发现的少数特殊个体．本文分别用母本种彭泽鲫和父本种尖鳍鲤的精子与复合四倍体彭泽鲫的卵子受精，得到两种胚胎FP和FS．采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对两种胚胎10个时期的5种同工酶（LDH、MDH、ME、SOD和EST）进行比较分析．结果表明:两种胚胎的5种同工酶表型在谱带上完全一致，不同来源的精子对胚胎的同工酶表型没有影响．表明复合四倍体彭泽鲫可能继承了母本种的雌核发育生殖方式．     

异源四倍体鲫鲤群体的形成及四倍体化在脊椎动物进化中的作用

对雌雄两性能育并形成群体的异源四倍体鲫鲤的染色体数目和组型,DNA含量,红细胞大小,生殖腺和配子,胚胎发育,形成机理,外形等方面进行了较全面描述。四倍体鲫鲤经过九代（F3-F11）的四倍体性的繁殖,已形成了一个数目庞大的遗传性状稳定的群体。该四倍体群体在染色体数目、生殖、外形特征等方面都与它们的原始父母本-二倍体湘江野鲤和红鲫有本质的差别。在遗传特性、稳定传代、生育隔离等方面,异源四倍体鲫鲤群体为形成一个新的四倍体新种奠定了基础。新的四倍体鱼群体的形成对脊椎动物的进化理论和它们在生产上的应用都具有重要的意义。     

具有天然雌核发育特性的人工复合三倍体锂鱼

报道了人工诱导的复合三倍体锂鱼的雌性个体的卵细胞可以发育成熟，且具有天然雌核发育特性，人工复合三倍体鲤鱼的雌核发育后仍具有３套完整的亲本染色体，形态不发生分离。     

水稻仙粳杂种四倍体的人工诱导

以一种极端类型粳亚种的二倍体杂种为材料，杂种幼穗的愈伤组织用秋水仙碱处理获得四倍体植株，幼穗在含不同浓度的2，4－D和KT的培养基上愈作组织的诱导率不同，2，4－D为2．0mg/L，KT为1．0mg/L，愈伤组织和诱导率最高，达55．6％，秋水仙碱在500mg／L的浓度加倍效果最高，达40％，同时比较分蘖斯秧苗和萌发种子的诱导率，仍以愈伤组织和加倍效果最好。     

复合四倍体彭泽鲫胚胎发育的研究

分别用复合四倍体彭泽鲫的母本种彭泽鲫和父本种尖鳍鲤的精子与复合四倍体彭泽鲫的卵子授精,在Nikon体视显微镜下对它们的胚胎发育过程进行连续观察.描述了23个发育时期的主要形态特征,观察了不同水温条件对胚胎发育速率的影响,比较了复合四倍体彭泽鲫与异育彭泽鲫胚胎发育过程的异同.发现二者在受精卵的大小、受精后皮质颗粒、肌节对数、眼晶体形成时间、积温等方面都存在差异,复合四倍体彭泽鲫比异育彭泽鲫的胚胎发育历时要少.在上述研究的基础上,发现来自母本种和父本种的两种不同精子与复合四倍体彭泽鲫的卵子授精,得到的胚胎在发育过程中未表现出明显差异,暗示复合四倍体彭泽鲫的卵子在应答母本种和父本种精子时表现出相同的生殖方式,即雌核发育生殖方式.本研究的结果和结论与在人工复合四倍体异育银鲫中观察到的现象存在显著差异.     

水稻籼粳杂种四倍体的人工诱导

以一种极端类型籼粳亚种的二倍体杂种为材料,杂种幼穗的愈伤组织用秋水仙碱处理获得四倍体植株.幼穗在含不同浓度的2,4-D和KT的培养基上愈伤组织的诱导率不同,2,4-D为2.0mgL,KT为1.0mg/L,愈伤组织的诱导率最高,达55.6%.秋水仙碱在500mg/L的浓度加倍效果最高,达40%.同时比较分蘖期秧苗和萌发种子的诱导率,仍以愈伤组织的加倍效果最好.     

雌核发育高背鲫成熟分裂前期的细胞学研究

雌核发育的高背鲫，成熟分裂前期共经历了细线期、偶线期、凝线期、粗线期和双线期５个发育阶段，显示出第一次减数分裂的基本特征．但也存在一些差异，表现在偶线期染色体可能没有正常配对，进入粗线期在等长上全面发生了分离，以致双线期没有交叉和二价体灯刷染色体形成．这些差异是前期的一种改变，是雌核发育高背鲫由第一减数分裂前期演变成没有同源染色体分离，而只有一次姐妹染色体分开的一种己有的成熟分裂机制     

洞庭青鲫和洞庭青鲫(?)×兴国红鲤(?)杂交F1代的RAPD分析

以鱼的尾鳍为材料,采用苯酚-氯仿法提取鱼的基因组DNA.对提取的结果进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳方法的鉴定,筛选出浓度、纯度好的DNA样品进行进一步的RAPD扩增.采用上海生化工程有限公司的80个引物对洞庭青鲫和洞庭青鲫(?)×兴国红鲤(?)杂交F1代(简称"杂交鱼")进行RAPD分析,筛选出9个引物对洞庭青鲫和杂交鱼进行了遗传多样性分析,这9个引物共检出洞庭青鲫89个位点、杂交鱼82个位点.其中多态性位点数:洞庭青鲫76个,杂交鱼71个分别占其总位点数的85.39%、86.58%.据RAPD data analyzer 1.3v.exe ＜RAPD data analyzer v1.3.xls>数据分析程序计算,洞庭青鲫平均遗传相似度为0.653 7;杂交鱼的平均遗传相似度为0.621 8;两种群间的为0.550 5.上述两项指标的初步分析表明,这两种鱼具有较为丰富的遗传多样性.     

人工养殖鲈鲤肌肉生化成分分析

利用生化方法对人工养殖鲈鲤的肌肉营养成分进行分析,并对其营养品质进行评价.结果表明:人工养殖鲈鲤肌肉的水分比例为78.10,,粗蛋白质量分数为19.40,,粗脂肪质量分数为1.18,,灰分质量分数为1.03,,无氮浸出物为0.29,.氨基酸组成分析显示,人工养殖鲈鲤肌肉干样中含有17种氨基酸(色氨酸未测),总量为73.02,,其中必需氨基酸的总量为29.37,,占氨基酸总量的40.22,;必需氨基酸的AAS和CS分值显示人工养殖鲈鲤肌肉氨基酸组成均衡,必需氨基酸指数为69.47,高于多数经济鱼类;鲜味氨基酸的总量为27.29,,其中谷氨酸的质量分数最高.脂肪酸组成分析显示,人工养殖鲈鲤肌肉中主要含有12种脂肪酸,其中包括4种饱和脂肪酸,5种单不饱和脂肪酸和3种多不饱和脂肪酸.人工养殖鲈鲤肌肉中矿物质以P的质量分数最高,并富含Zn,Fe,Se,Cu等微量元素.维生素中以VE和烟酸最为丰富.与野生鲈鲤相比,人工养殖鲈鲤的营养品质偏低;但和其他几种经济鱼类相比,人工养殖鲈鲤的营养品质仍然相对较高.大规模养殖鲈鲤具有巨大的市场潜力,并有良好的经济效益和社会效益.     

鲤、鲫鱼对交流电刺激的反应特性

本文研究了鲤、鲫两种淡水底层鱼对交流电刺激的感电、麻醉、击昏反应及断电后的苏醒过程。结果表明:鲤、鲫鱼电击前感电阈值分别为1.66 V/m、2.63 V/m,电击后感电阈值明显提高,分别达到2.49 V/m、3.56 V/m。鲫鱼电击前浙增组感电阈值极显著地大于浙减组,但电击后这种差异消失。鲤、鲫鱼击昏阈值均极显著地大于麻醉阈值,前者分别为25.18 V/m、29.01 V/m,后者分别为16.27 V/m、19.04 V/m,两种情况下鱼所表现的行为特征也完全不同.鱼对交流电的反应可分成四个阶段:感电、定向、麻醉和击昏反应。受电击昏的鲤、鲫鱼在断电后的苏醒过程有所不同,但均具有阶段性。     

洞庭青鲫和洞庭青鲫(♀)×兴国红鲤()杂交F_1代的RAPD分析

以鱼的尾鳍为材料,采用苯酚—氯仿法提取鱼的基因组DNA.对提取的结果进行紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳方法的鉴定,筛选出浓度、纯度好的DNA样品进行进一步的RAPD扩增.采用上海生化工程有限公司的80个引物对洞庭青鲫和洞庭青鲫(♀)×兴国红鲤(♂)杂交F1代(简称“杂交鱼”)进行RAPD分析,筛选出9个引物对洞庭青鲫和杂交鱼进行了遗传多样性分析,这9个引物共检出洞庭青鲫89个位点、杂交鱼82个位点.其中多态性位点数:洞庭青鲫76个,杂交鱼71个分别占其总位点数的85.39%、86.58%.据RAPDdataanalyzer1.3v.exe数据分析程序计算,洞庭青鲫平均遗传相似度为0.6537;杂交鱼的平均遗传相似度为0.6218;两种群间的为0.5505.上述两项指标的初步分析表明,这两种鱼具有较为丰富的遗传多样性.