PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因

根据金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的ＰＣＲ技术。利用该方法可从含有肠毒素Ｄ基因的金黄色葡萄球菌中扩增出ＰＣＲ产物。扩增产物具有特异性,长为３１６个碱基对。经限制性核酸内切酶ＨｈＩⅠ酶切证实扩增产物为ＳＥＤ基因片段。     

金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究进展

金黄色葡萄球菌是食品、医院内感染以及化妆品领域重要致病菌之一,建立和发展快速检测方法对于预防和控制该菌引起的疾病具有重要意义.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特征进行了简单介绍,并重点综述了近些年建立的常用金黄色葡萄球菌快速检测方法,分析比较了各检测方法的优缺点.     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况, 针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增, 建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法. 对18个21日龄鸡胚培养、分离, 获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落. 用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增, 证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18). 本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.     

应用聚合酶链反应技术检测库蚊抗性基因的初步研究

根据致库蚊有机磷抗性酯酶Ｂａ基因序列设计了两对引物，应用ＰＣＲ技术对广州部分地区的致倦库蚊ＯＰ抗性基因进行了测定。结果表明引物２、３扩增阳性率比引物１、２为高；实验室株及石牌、晓港、中山医医科大学、中山大学等４个地区自然种群抗性基因的扩增阳性率分别为３８％、２２．５％、２０％、１５％和７．５％。另外发现雄性库蚊出现的阳性率比雌蚊高。     

指示剂法快速检测结核杆菌耐药试验的探讨

结核杆菌快速耐药试验方法学的研究，是结核病细菌学急待解决的问题。国内经典的检测方法都存在着各自的优缺点，而未能改变现行改良罗氏培养耐药试验方法[1]。因此我们探讨用指示剂快速检测结核杆菌耐药试验的方法。1材料与方法1．12％B指示剂1．2含药培养基以舒通培养基为基础，制成液体培养基，经103．43KPa，75％乙醇处理后，15分钟高压灭菌加入药物，然后分装于15mm×10mm小试管中，每管吸1．0ml，其中药物含量：SM：100μg／ml10μg／mlINH：10μg／ml1μg／mlPAS：10μg／ml1μg／ml25μg／ml5μg／mlKM：50μg／ml10μg／mlEM…     

液相芯片快速检测结核耐药基因方法建立

基于Luminex100^TM技术平台,结合多重PCR技术,以5’生物素标记引物为信号指示,在H₉37)RV结核标准株做对照下,对104株结核分枝杆菌分离株的LFP耐药rpoB基因和INH耐药的katG,inhA基因进行检测,并与药敏试验绝对浓度法和测序结果比较.结果表明:液相芯片检出结果与药敏法比较,104株分离株中LFP、INH、多重耐药的检出结果分别为:液态芯片检测73株、50株、48株;药敏检测结果为74株、58株、53株;对比检出率98.6%,86.2%,90.6%.液相基因芯片技术对耐药,耐多药结核的检测,具有特异性高,敏感性强的特点,是检测结核分枝杆菌耐药基因的有效方法,可用于临床检测.     

美洲雁源金黄色葡萄球菌的PCR检测

本试验对从临床病死美洲雁的病料中分离得到的一株致病菌进行了16s rRNA基因片段的扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接构建克隆载体,经PCR和酶切鉴定正确后测序,测序结果与GenBank中已注册菌株的16s rRNA基因序列进行同源性比较,结果与金黄色葡萄球菌的序列同源性达到97%.由此判定感染病鸭的是金黄色葡萄球菌.     

104株金黄色葡萄球菌的耐药性检测及分析

总结和分析了兰州市中医医院住院及门诊患者下呼吸道标本分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性,为临床治疗和院感控制提供及时准确的依据。分离培养本院2011年1月至2013年12月共3年患者下呼吸道痰液标本,通过鉴定,将分离出的金黄色葡萄球菌做MRSA的检测,统计分析确定为MRSA的药敏试验结果。鉴定出的104株金黄色葡萄球菌,确定为MRSA的有61株,占58.7%。下呼吸道痰液标本中的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌分离率呈升高趋势,多重耐药日趋严重,增加临床治疗的困难,应高度重视。     

多通道电化学基因传感阵列快速联检AML相关耐药基因的新方法

筛选并制备高特异性 DNA 探针,与纳米粒子标记技术相结合,设计多通道电化学基因传感阵列检测模式,建立灵敏、快速、简便、经济的急性髓系白血病（AML）相关多药耐药基因（MDR1和MRP）检测新方法. 该方法具有较好的特异性、灵敏度和重现性,能够在1.0×10^-14 ~ 1.0×10^-12 mol·L^-1和5.0×10^-14~5.0×10^-12 mol·L^-1范围内,分别实现对AML 相关多药耐药基因序列MDR1和MRP的定量检测. 该方法有望为预测肿瘤治疗效果和临床制定治疗方案提供参考依据.     

耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价

目的评价三种方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性.方法根据NCCLS的判定标准,采用mecA基因PCR扩增法检测临床分离的85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌,并与苯唑西林琼脂稀释法和头孢西丁纸片扩散法进行比较.结果苯唑西林琼脂稀释法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别93.75%(95.35%)、95.24%(54.05%);头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA(MRCNS)的检出率分别为98.43%(95.35%、)、90.48%(64.86%).结论对于MRSA的检测,选用PCR扩增法,该法具有快速、灵敏和特异性强的特点,且纸片法与PCR扩增法检测结果符合率很高;对于MRCNS的检测,通过表型法筛选后,最好能得到mecA基因的确证.     

原位PCR技术在植物学中的应用

随着聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术和分子水平生物技术的发展,综合了原位杂交(Insitu Hybridize,ISH)和PCR双重优点的原位PCR(Insitu polymerase chain reaction,IS-PCR)在越来越多的领域得到应用,或者具有巨大的应用前景。目前关于IS-PCR的报道主要集中在动物学和微生物学等领域,植物学领域较少。现从植物外源基因的检测、基因定位、高分辨率的DNA物理图谱的构建和植物种属关系的鉴定等方面就IS-PCR技术在植物学中的应用进行了综述。     

PCR检测伪狂犬病病毒的研究

用ＰＣＲ的方法，扩增了伪狂犬病病毒ｇｐ５０基因的一段较为保守区。检测了不同ＰＲＶ毒株感染的ＢＨＫ细胞以及接种的家兔，并对ＰＣＲ检测的灵敏性作了初步研究。结果表明，ＰＣＲ法扩增ｇｐ５０基因具有较高特异怀和灵敏性，是检测ＰＲＶ的有效方法。     

多通道电化学基因传感阵列用于同时检测AML相关多药耐药基因的新方法研究

本研究筛选并制备高特异性 DNA 探针,与纳米粒子标记技术相结合,设计多通道电化学基因传感阵列检测模式,建立灵敏、快速、简便、经济的AML相关多药耐药基因(MDR1和MRP)检测新方法。该方法具有较好的特异性、灵敏度和重现性,能够在1.0×10-14 ~ 1.0×10-12 M和5.0×10-14 ~ 5.0×10-12 M范围内,分别实现对AML 相关多药耐药基因序列MDR1和MRP的定量检测。该方法有望为预测肿瘤治疗效果和临床制定治疗方案提供参考依据。     

金黄色葡萄球菌GST-mTSST-1的免疫活性检测方法的研究

通过对影响琼脂扩散反应的多种条件进行优化,建立了检测金黄色葡萄球菌无毒诱变中毒性休克综合征毒素1融合蛋白GST-mTSST-1免疫活性的双向免疫琼脂扩散检测方法．检测的灵敏度可达到120ng／mL．此方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等特点,对具有免疫活性的抗原蛋白的定量检测有一定的参考价值．     

污泥深度脱水对四环素耐药菌和耐药基因的去除特性

研究了四环素耐药菌和四环素抗性基因在污泥深度脱水中的去除特性,分别采用稀释平板涂布法和荧光定量PCR对污泥深度脱水前后四环素耐药菌和4种四环素抗性基因(tetA、tetB、tetM和tetX)进行了测定,分析了污泥脱水前后这些污染物的去除特性.结果表明:污泥深度脱水前后四环素耐药菌和四环素耐药基因均被检出,经污泥深度处理工艺处理后,四环素耐药菌和所测定的四环素耐药基因均得到一定去除,tetA、tetB和tetM的去除率均达到80%以上.论文结果可为耐药菌和耐药基因的污染控制提供参考.     

我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查、耐药性及其肠毒素基因检测

调查了2011—2016年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析。收集全国39个城市699份市售食用菌,利用定性和定量检测方法,检出金黄色葡萄球菌阳性样品33份,平均污染率4.72%,污染水平9.75MPN/g。24种抗生素的药敏结果显示,分离株耐药情况严重,对利奈唑胺、利福平敏感,对氨苄西林等22种抗生素都产生不同程度的耐药。7株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。运用聚合酶链式反应法对分离的39株金黄色葡萄球菌进行了18种肠毒素基因检测,约60%分离株携带4~6种肠毒素基因,携带率最高的肠毒素基因是sei,其次是sem、seg、seq、sec、seb、sen。本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险,相关分离株具毒性潜力,且耐药性严重,应引起重视。     

肠球菌临床耐药性分析及耐药基因vanM在屎肠球菌中的检测

目的了解肠球菌临床分离株耐药性及vanM基因在屎肠球菌的分布情况,为临床合理用药及探讨耐药机制提供依据.方法采用VITEK60全自动微生物分析仪对肠球菌进行鉴定及药敏试验,按NCCLS/CLSI标准判断并统计分析结果;PCR法检测耐万古霉素、替考拉宁菌株中的耐药基因vanM,并对阳性基因进行测序,分析耐药基因与耐药性的关系.结果临床分离肠球菌共506株,其中屎肠球菌277株,粪肠球菌229株.尿液标本来源比例最高,为167株（33%）;粪便标本114株（22.5%）;痰液标本78株（15.4%）;胆汁标本57株（11.3%）;脓液标本54株（10.7%）;其他来源36株（7.1%）.药敏结果显示：肠球菌对大部分临床抗菌药高度耐药,屎肠球菌对β-内酰胺类抗菌药物（氨苄西林）、喹诺酮类（左氧氟沙星）、糖肽类（万古霉素、替考拉宁）的耐药率明显高于粪肠球菌（P〈0.05）.vanM基因在耐万古霉素菌株中的检出率为100%,耐替考拉宁菌株检出率为90%.结论屎肠球菌可引起临床各类感染,屎肠球菌对大多数抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌,且呈多重耐药趋势.vanM基因可能在糖肽类药物万古霉素、替考拉宁耐药机制中发挥重要作用.     

免疫磁珠检测食品中金黄色葡萄球菌的研究

通过对金黄色葡萄球菌免疫磁珠添加量、免疫磁珠与菌液最佳反应时间、免疫磁珠分离金黄色葡萄球菌的敏感性试验、特异性试验的研究,确定了金黄色葡萄球菌抗体添加量50μg/m L、免疫磁珠添加量100μL,免疫磁珠与菌液最佳作用时间为30 min,免疫磁珠法检测灵敏度底限为10-9,相应的细菌浓度为14 cfu/m L.本试验制备的免疫磁珠灵敏性强,特异性高,大大节省了检测时间和费用.因此研究食品中金黄色葡萄球菌快速、准确检测方法以预防和控制食品安全事件的发生,具有重要的现实意义.     

双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.