PKA和PKC对HeLa细胞G2/M/G1进程的影响

为了研究ＰＫＡ和ＰＫＣ对ＨｅＬａ细胞Ｇ２→用Ｍ→Ｇ１期进程的影响,用ＰＫＡ和ＰＫＣ抑制剂分别处理同步的Ｇ２期和Ｍ期的ＨｅＬａ细胞后,测定了细胞有丝分裂指数和ＰＫＡ,ＰＫＣ与ＣＤＣ２激酶的活性。     

PI3K等5条信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调节作用研究

为从基因转录水平解析信号通路对NIH3T3细胞周期进程的调控作用,用小鼠基因表达谱芯片Mouse Genome 4 302.0检测信号通路相关基因表达丰度发现,PI3K,STAT3,钙蛋白酶,Rho家族鸟苷酸激酶和VEGF等5条信号通路的105个基因在该细胞的细胞周期中发生有意义的表达变化.分析基因表达变化预示的信号通路作用表明,上述5条信号通路依次促进G1期、G1/S转换期、S期、G2/M转换期和M期进程.结论:上述5条信号通路促进NIH3T3细胞的细胞周期进程.     

肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期细胞蛋白质组表达差异的研究

通过TdR(胸腺嘧啶核苷)调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期全细胞蛋白质组表达的差异,探索参与肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期调控相关的蛋白.以TdR诱导肝癌细胞株HepG2,分别得到同步化的G1期、G2/M期细胞,流式细胞术检测.采用比较蛋白质组学的研究技术(双向电泳、质谱分析)筛选G1期、G2/M期差异表达的蛋白质.结果流式细胞术检测显示TdR诱导后,分别获得(63.62±2.82)%的G2/M期同步化细胞,(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞,通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到21个差异表达的蛋白.其中G2/M期表达,G1期未见表达有10种蛋白;存在三倍以上的差异点11个:2种在G2期表达上调,9种在G1期表达上调.说明TdR阻断法能够获得很好的同步化细胞.质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及到细胞周期调控、DNA结合、转录调控、mRNA剪接、肽链合成起始、折叠以及细胞代谢等方面.     

视黄醇X受体小分子配体衍生物对宫颈癌细胞周期及细胞凋亡的影响

为筛选视黄醇X受体α(RXRα)配体XS-23的衍生物中作用于细胞周期的化合物,通过蛋白免疫印迹检测细胞周期G0/G1期检查点关键负调控因子p21 WAF1/CIP1(简称p21)、细胞M期周期蛋白Cyclin B1的表达水平,从中筛选到两个编号分别为05和06的化合物,可导致人宫颈癌HeLa细胞中p21表达上调和Cyclin B1表达下调.用流式细胞术和siRNA干扰技术检测化合物对细胞周期的影响及其RXRα依赖性,结果显示:化合物05和06可引起G0/G1期细胞比例显著增加,同时G2/M期细胞比例显著下降,且化合物05和06引起p21表达水平上调的作用在一定程度上依赖于RXRα.用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡率,同时检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)切割蛋白水平及其RXRα依赖性,结果表明:化合物05和06均能够引起HeLa细胞凋亡率显著增加,并导致PARP切割且具有一定的RXRα依赖性.进而用计算机模拟的方法对化合物与RXRα进行分子对接,模拟化合物与RXRα可能的结合位点,结果显示化合物05和06可能与RXRα蛋白的helix12、helix3、helix4形成的表面区域结合.综上,筛选出的化合物05和06可能通过与RXRα表面结合,阻滞HeLa细胞周期于G0/G1期,最终诱导HeLa细胞凋亡.     

P15INK4b对人黑色素瘤细胞周期及G1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15INK4b缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15INK4bcDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15INK4b稳定表达细胞模型MLIK6.流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1%和76.8%,而G1期的比例分别为74.3%和76.4%.3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱.进一步探讨P15INK4b对G1/S相关调控基因的影响,发现G1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G1→S全部时间进程中.说明P15INK4b是通过对G1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G1/S进程.     

应用流式细胞术研究乳腺癌MCF-7细胞周期同步化

目的筛选出适宜的血清及秋水仙碱的作用浓度及时间,使乳腺癌MCF-7细胞分别达到G0/G1和G2/M期同步化。方法采用血清饥饿法诱导MCF-7细胞G0/G1同步化,秋水仙碱诱导细胞G2/M期同步化,流式细胞仪检测细胞各期分布情况。结果处理24 h后,1%血清浓度组G0/G1期细胞分别达到(72. 96±0.84)%,1. 0μg/mL秋水仙碱处理组G2/M期细胞分别占总细胞数(73. 67±1. 77)%。处理36 h后,1%血清浓度及秋水仙碱实验组细胞发生凋亡。结论MCF-7在血清浓度为1%处理24 h后完成G0/G1同步化,在1. 0μg/mL的秋水仙碱处理24 h后完成G2/M期同步化。     

糖皮质激素对原代培养的海马细胞中p44/42的快速非基因组激活作用

用Western blot方法研究了皮质酮(B)对原代培养海马细胞15 min刺激下p44/42的快速激活作用.主要结果有(1)在5～15 min的时间内,皮质酮可以激活p44/42.当激活时间为15 min时,p44/42升得最高,30 min后恢复到正常水平,呈钟形的瞬时激活特点.(2)B激活p44/42的作用,不能被GR阻断剂RU38486所阻断.根据快速、GR受体阻断剂不能阻断两点,基本上可以认为,所观察到的p44/42的激活属于GC的快速非基因组作用.(3)酪氨酸激酶阻断剂Genistein不能阻断,而GDPβs可以阻断此作用,提示GC的这一效应不是通过TRK受体,而是通过G-蛋白耦联受体(GPCR).(4)PKA的阻断剂H89不能阻断,而PKC阻断剂G(o)6976及MEK(即MAPKK)阻断剂PD98059能够阻断这一效应,所以B快速激活p44/42的信号转导通路可能是GC→GPCR→PKC→MEK→p44/42.     

钙调素对肿瘤细胞周期的调节作用

利用钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)研究了钙调素对HeLa细胞周期进程的影响,TFP处理的细胞被阻抑在G_1/S,使S期群体及DNA合成下降,G_2期群体增加.有丝分裂(M)前期细胞减少,中期细胞增加.结果表明钙调素对G_1至S期.G_2至M期和M中期至M后期具有调节作用,钙调素通过细胞周期中上述3个位点对肿瘤细胞增殖进行调节.     

沙蚕活性物质的分离提取及对HeLa细胞的毒性分析

将采集于中国福建海岸的海洋环节动物沙蚕(Nereis virens)冷冻干燥后用不同极性的有机溶剂进行提取,提取物A2经硅胶柱梯度洗脱分离,发现石油醚/乙酸乙酯(体积分数1∶1)的洗脱组分B3有抗肿瘤活性.采用葡聚糖柱Sephadex LH-20对B3进一步等度洗脱分离,发现洗脱的组分C2有较高抗肿瘤活性.采用噻唑蓝(MTT)法测定组分C2对HeLa细胞的毒性,结果显示:该组分具显著的体外抗HeLa细胞活性,其IC50(48 h)达47.30μg·mL-1;AO/EB染色法观察细胞凋亡,结果显示药物处理48 h后细胞明显出现凋亡现象;流式细胞术探讨其抗癌机制,结果提示组分C2可能是通过诱导HeLa细胞发生G0/G1期和(或)S期阻滞而诱导细胞凋亡的.     

丁酸钠对M期同步及非同步的HeLa细胞早G_1期阻断的可逆性

本文采用早熟染色体凝集(PCC)和~3H-TdR显微自显影技术,观察丁酸钠对同步及非同步的HeLa细胞早G_1期阻断的可逆性及其可逆的进程。实验发现丁酸钠对HeLa细胞早G_1期阻断完全是可逆的,且这种可逆是在洗去丁酸钠后立即产生,丁酸钠对HeLa细胞早G_1期阻断的时间点发生在细胞进入S期前的9.5h;发现早G_1期阻断后的恢复必须再经过中、晚G_1期然后才能进入S期.     

Caveolin-1 Re-Expression Reverses G_0/G_1 Arrest in Caveolin-1 Knockout Mesangial Cells

Flow cytometry,BrdU incorporation,and western blotting were used to investigate whether caveolin-1(Cav-1) is involved in cell cycle progression of renal glomerular mesangial cells.Wide type mesangial cells re-entered the cell cycle after 22 h incubation with 20% fetal bovine serum(FBS) and Cav-1 knockout cells remained in G0/G1 phase after 48 h,which indicated that Cav-1 knockout mesangial cells were G0/G1 arrest.The protein level of cyclin D1 significantly increased after incubation with 20% FBS for 6 h in wide type mesangial cells,and 12 h in Cav-1 knockout cells.It suggested that cyclin D1 upregulation was delayed in knockout mesangial cells.Cav-1 re-expression in Cav-1 knockout mesangial cells increased the ratio of S phase from 4.8% to 15.26%,and decreased the ratio of G0/G1 phase from 90.96% to 77.84%,which implied that Cav-1 re-expression can reverse cell cycle arrest.It concludes that Cav-1 may promote the proliferation of mesangial cells.     

带有止步和负顾客到达的MX/(G1,G2)/1单重休假排队系统

对一个带有止步和负顾客到达的MX/(G1,G2)/1单重休假排队系统进行了研究,服务台可以同时提供两种服务供顾客选择,每名顾客在接受服务前可以选择其中的一种服务.在系统处于忙期或假期时,批量到达的正顾客以概率1-b(0≤b≤1)止步(不进入系统).负顾客抵消队首正在接受服务的正顾客.利用补充变量法,得到了系统的一些重要...     

G_(40)(Q)和G_(77)(Q)都不是K_2Q的子群

首先通过对丢番图方程的研究,给出了Gn(Q)是K2Q子群时所需满足的条件,然后利用这些结论证明了G40(Q)和G77(Q)都不是K2Q的子群,从而部分证明了Browkin的一个猜想.     

关于g＿λ－独立集列的一个注记

文［１］引入了ｇ＿λ－独立类的定义，并在－１＜λ≤０的条件下证明了关于ｇ＿λ－独立集列的Ｂｏｆｅｌ－Ｃａｎｔｅｌｉ引理，本文在－１＜λ的条件下证明了上述引理，进一步，讨论了拓广形式的Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ０－１律等问题，从而推广了［１］的主要结果。     

本原复反射群G_(27)的表出

在有限复反射群的所有表出构成的集合上,时俭益定义了一个同余关系,并给出了群G_(12),G_(24),G_(25),G_(26)的所有不同余的本质表出．本文给出了群G_(27)的所有不同余的本质表出．     

G2型单代数群的Frobenius核的单模扩张群

本文获得了Ｇ的Ｆｒｏｂｅｎｉｕｓ核Ｇ的单模扩张群（Ｌ（μ），Ｌ（λ）），λ，μ∈Ｘ＿１（Ｔ），它们仅有六种可能性即或Ｌ（１，０）［１］     

齿轮图G_(2n+1)的协调性

所谓齿轮图 G_(2n+1)是将轮图 W_(n+1)轮缘的每一条边上再加上一个点所得到的图,在本文中我们证明了齿轮图G_2n+1是协调图。     

特征2李代数G_2变形的导子代数

作者利用特征 2代数闭域上G2 的变形V3G ,V6 G和V7G的阶化给出它们的导子代数和极小p-包络 ,分别给出了它们的一个最小生成元集。