鸭传染性浆膜炎灭活疫苗保存期试验

选用白油佐剂、蜂胶佐剂和鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)灭活菌液制成RA油乳剂灭活疫苗和蜂胶灭活疫苗,分别保存3个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月,免疫雏鸭,探讨不同佐剂和保存期对免疫效果的影响。结果表明:2种佐剂疫苗均有保护力,但油乳剂灭活疫苗免疫效果比蜂胶灭活疫苗好,其保护率可达100%。疫苗保存期试验证明,油乳剂灭活疫苗在4°C冰箱可保存9个月以上。     

三联疫苗对大黄鱼常见细菌性疾病免疫保护的实验研究

采用0.5%福尔马林4℃灭活和65℃热灭活2种不同的方法制备三联疫苗作为抗原,以多次腹腔注射或浸泡的方式免疫大黄鱼,通过测定受免大黄鱼血清中抗体凝集效价变化并进行攻毒实验以评估保护效果.结果表明:以福尔马林灭活疫苗注射免疫途径效果最佳,其血清抗体效价平均达1536,攻毒后1周内免疫保护率为88.9%;热灭活疫苗注射免疫途径效果也比较明显,其血清抗体效价平均达1024,攻毒后1周内免疫保护率为76.6%;福尔马林和热灭活疫苗浸泡免疫大黄鱼也有一定效果,免疫保护率分别为55.7%和44.6%.     

鳖用四价细菌灭活疫苗免疫防治应用研究

将分离自中华鳖主要细菌性疾病如肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株不同血清型的温和气单胞菌,用3.5%福尔马林溶液处理24 h灭活并添加蜂胶作为佐剂,制成总含菌量为6×109CFU/mL的四价菌苗。同时制备了针对中华鳖IgM的单克隆抗体3H3,并建立了由单抗3H3介导的三抗体夹心ELISA（TAS-ELISA）方法对四价菌苗的免疫效果进行评价。将研制的四价菌苗小批量免疫健康中华鳖,分别于免疫前及免疫后的100 d内,随机采集3只免疫组和1只对照组的中华鳖血清,利用所建立的TAS-ELISA测定血清中抗体ELISA效价。将免疫50 d的中华鳖分成4组,分别用4株病原菌以5LD5（09×106CFU/mL）进行攻毒,并用上述制备的四价疫苗进行免疫预防试验。结果显示：当中华鳖免疫后40 d,血清中抗体ELISA效价最高,为1：（1.28×104）;中华鳖免疫后50 d,其免疫保护率均达到100%,同时对照组死亡率为100%。结果表明：以蜂胶为佐剂的鳖用四价细菌灭活疫苗所开展的免疫预防试验取得了良好的免疫效果,能有效地预防养殖鳖类主要病害的发生。     

粤北地区鸡致病性大肠杆菌蜂胶佐剂疫苗的免疫试验

从粤北地区分离到的鸡致病性大肠杆菌中选择6株优势致病性大肠杆菌菌株做为制苗菌种，制备制苗菌液，按相同比例混合灭活，加蜂胶乙醇浸液为佐剂制备多价菌苗．安全试验结果证实，该灭活菌苗对20日龄肉仔鸡安全，试验鸡元不良反应；在5～10℃保存12个月，疫苗物理性状稳定．免疫效力试验结果：疫苗保护率为100％；接种20日龄雏鸡O．5ml／只，血凝试验检测结果为接种多价蜂胶灭活疫苗的试验鸡在免疫后第二周可检测出抗体，抗体滴度均数为3．10log2；免疫后第四周达到最高峰，抗体滴度均数为3．60log2；免疫后第五周抗体滴度开始下降，抗体滴度均数为2．10log2，但抗体滴度仍高于对照组（1．25log2）．在大肠杆菌感染鸡场进行的多批区域试验结果表明，该多价灭活疫苗安全，具有良好的保护作用．     

纳米铝佐剂诱导鸡提前产生抗AIVH9体液免疫应答

接种灭活油佐剂疫苗是目前国内防控禽流感主要的措施,为有效防控禽流感的流行发挥了重要的作用,但灭活苗首次接种后需要较长时间抗体才能达到有效保护水平.纳米颗粒具有独特的生物学特性,作为疫苗佐剂能引起机体强烈的免疫应答.本研究用纳米铝颗粒作为AIV H9的佐剂,结果显示,小鸡产生有效免疫保护抗体时间较常规油佐剂疫苗提前4天且无副反应,但抗体峰值和持续时间均低于油佐剂疫苗.氢氧化铝纳米颗粒作为佐剂可能对禽流感等重大传染病的紧急预防接种具有潜在的应用价值.     

鸡油乳剂苗乳化工艺的探讨

以H9亚型的禽流感毒株和新城疫病毒（ND）为种毒，接种9—11日龄鸡胚，制备疫苗用抗原，O．1％的甲醛灭活后．以司班-80和吐温-80作为乳化剂，10号白油为佐剂，制成油乳剂苗。油乳剂苗的免疫效力高低直接与它的性质有关，品质优良的油乳剂苗是物理性能稳定，颗粒均匀，黏度低，抗原不析出，不分层，呈乳白色。剂型为油包水（W／O）的油乳剂苗较粘稠，在机体内不易分散，佐剂活性好，在免疫鸡机体内产生持续刺激淋巴组织的效果，在乳化W/O剂型的油乳剂苗的过程中，乳化效果与乳化方法、佐剂的加工有一定的关系。当油佐剂的温度为45—50℃时的乳化效果好．所制备的油乳剂苗免疫5—8日龄的白羽肉鸡，抗体效价可达1：32以上，免疫效果好。     

"鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的研究与产业化"项目简介

公司"鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的研究与产业化"项目研究以新城疫病毒和禽流感H9亚型病毒为材料,感染鸡胚液经甲醛灭活后保留其免疫原性,以一定比例与油佐剂混合乳化,研制成一种能够"一针防两病"的新型疫苗.其间针对疫苗生产过程中的各个环节进行研究,解决了联苗技术,成功将鸡新城疫病毒与禽流感H9亚型病毒联合,而且达到并超过了单苗的防治效果,属国内领先技术;研究出新配方,解决了油乳剂灭活苗致注射部位变绿的行业难题,同时大大降低了疫苗粘度,使注射更轻松.采用浓缩技术,抗原含量是普通苗的2-3倍,使免疫后14天即可产生保护力;免疫保护率比普通苗更高,解决了普通疫苗免疫效果不确实的问题;采用进口佐剂和先进的乳化工艺,使得抗体保护持续时间比普通苗更长.     

不同动物血清补体对大肠杆菌的杀灭效果

探索不同动物血清补体对大肠杆菌的杀灭效果可以为开发利用补体作为新型疫苗佐剂提供理论依据。将培养活化的O78大肠杆菌用甲醛灭活,以蜂胶为佐剂制备大肠杆菌颗粒性疫苗,用其免疫11日龄海蓝褐蛋用公雏,制备大肠杆菌抗血清;将大肠杆菌抗血清灭活补体,与已知数量的大肠杆菌反应,形成抗原抗体复合物,然后加入不同动物的新鲜血清,细菌计数,观察不同动物血清补体对大肠杆菌的清除能力;微量板法测定不同动物血清补体总活性。结果表明,抗体与细菌抗原结合后,对细菌的杀灭作用较小,动物体内的补体,是细菌性疫苗发挥免疫效果的关键物质;哺乳动物血清中的补体对细菌的清除能力高于鸡,在哺乳动物中,豚鼠的血清补体对大肠杆菌的清除能力最高。     

海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

用野外分离的海豚链球菌(Streptococcus iniae)海水菌株HD-1和淡水菌株TBY-1制备成含1×1010cfu/mL的灭活疫苗,以0.1 mL/尾的剂量对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)进行腹腔注射,免疫2次,测定免疫后1周、3周和5周免疫鱼血清中抗海豚链球菌的抗体滴度和相应菌株攻毒后的相对保护率,以评价海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫保护性.结果显示免疫鱼血清中抗体凝集效价在免疫后第3周和第5周呈显著性升高,且两种疫苗免疫血清存在明显的交叉凝集反应,说明HD-1和TBY-1抗原具有交叉免疫原性.在免疫后第4周,利用8倍半数致死量浓度(LD50)的海豚链球菌强毒菌株进行攻毒试验,结果显示:HD-1和TBY-1免疫组的死亡率分别为5%和0%,相对保护率分别为93.8%和100%;未经免疫的阴性对照组的死亡率分别为77.5%和62.5%.     

猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)免疫攻毒保护试验

口蹄疫是一种由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物,如牛、羊、猪、骆驼、鹿等共患的急性、热性、高度接触性和可以借助空气传播的传染病。口蹄疫疫苗是防治口蹄疫的发生、流行最主要的武器之一。猪O型口蹄疫灭活疫苗系用猪源强毒接种BHK-21或IBRS-2细胞单层,收获细胞毒液,经二乙烯亚胺(BEI)灭活,与油佐剂混合乳化制成。本研究选用3批猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)进行免疫攻毒保护试验,即疫苗免疫效力检验。实验结果表明,用O/MYA98/BY/2010株攻毒,3批疫苗每头份疫苗分别含有10.32、10.81、11.84 PD50,3批疫苗1头份免疫动物LPB-E抗体效价≥1︰64的均在80.0%以上。可以看出,猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)对我国目前流行的猪O型口蹄疫MYA98流行毒株具有良好的免疫保护效果。     

中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗的研制及免疫效果

为通过免疫防治途径控制嗜水气单胞菌引起的多种中华鳖疾病,采用复乳化-溶剂挥发法制备缓释微球疫苗,通过灌胃方式免疫中华鳖(体质量150～200 g),每只灌胃0.05 g或0.1g,微球含灭活菌约为6.75×1010/g.免疫应答反应结果显示,缓释微球疫苗体外释放可持续近40 d,血清抗体效价、白细胞吞噬率、白细胞吞噬指数及淋巴细胞转化率最高分别可达512,71.25％,1.51和77.25％.结果表明:中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗可以达到注射灭活菌液疫苗的水平,且持续性略优于注射免疫.通过灌胃方式(0.1 g/只)、注射方式分别对中华鳖进行免疫,研究攻毒后的免疫保护率,结果显示注射免疫组和微球疫苗免疫组的免疫保护率均为85％.免疫应答实验和攻毒实验结果分别证明了中华鳖口服缓释微球疫苗免疫的持续性和有效性.     

复方中草药添加剂对银香鸡生长性能及免疫功能的影响

选用黄芪、党参、当归、枸杞子、刺五加、山楂和甘草7种补益类中草药作饲料添加剂,添加到银香雏鸡日粮中进行饲养试验,以研究复方中草药添加剂对银香鸡生长性能和免疫机能的影响。试验各组基础日粮相同,试验组添加1%中草药,抗生素对照组添加50mg/kg杆菌肽梓,空白对照组只是基础日粮。试验测定试验鸡体重、增重及免疫器官相对重,于3周龄时接种新城疫疫苗检测血清抗新城疫抗体效价评价中草药添加剂的免疫促进作用。结果表明,6周龄试验组鸡体重和增重与抗生素对照组体重和增重相比差异不显著(P0.05),与空白对照组体重和增重相比差异显著(P0.05),复方中草药添加剂与抗生素具有同样的促生长作用;试验组脾脏和法氏囊相对重,血清抗新城疫抗体效价都显著高于对照组,复方中草药饲料添加剂对银香鸡有免疫促进作用。     

灭活嗜水气单胞菌菌苗免疫巴西彩龟研究

选择对巴西彩龟毒力最强的嗜水气单胞菌菌株(98037),扩大培养制成灭活福尔马林菌苗,分别对巴西彩龟进行注射和浸泡实验.经过对吞噬细胞吞噬活性、血清抗体效价的检测和攻毒实验,结果表明,受免疫组各项指标均明显高于对照组,免疫保护力达到81%以上,其中浸泡组各项指标略低于注射组.     

GnRH-a抗原的制备及不同剂量免疫的效果研究

目的:探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a)对动物免疫去势的效果和作用机理.方法:以EDC.HCL为偶合剂,将GnRH-a与BSA连接为复合物,再加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂;给16只兔子分三组注射不同剂量的抗原,用间接ELISA法测定GnRH抗体效价.结果:制备的GnRH-a抗原为乳白色均匀悬液,物理化学性状稳定良好,安全可靠,无任何不良反应;以50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL剂量的抗原乳剂分别对3个实验组动物进行免疫接种,各组动物均在免疫后两周内检测到GnRH-a抗体,并第4周左右达到高峰,ELISA效价分别为1∶800、1∶1600和1∶1600,说明100μg/mL、150μg/mL剂量的抗原产生的抗体效价致相同,故实践可用100μg/mL的剂量.但抗体达到高峰后持续时间短,下降很快.结论:GnRH-a抗原具有良好的免疫原性,为了延续抗体的高峰水平,有必要加强免疫.     

杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白的重组表达及其免疫保护效果研究

为探究杀鲑气单胞菌溶血素和菌毛蛋白能否作为亚单位疫苗候选抗原,本研究针对前期分离的杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.masoucida, ASM),利用原核表达系统对其进行重组表达,免疫虹鳟后检测其免疫保护效果与诱导的免疫应答特征。Western-blotting结果显示,虹鳟抗灭活ASM血清可与2种重组蛋白发生阳性反应,说明其具有较好的免疫原性。免疫保护实验结果显示,重组溶血素、重组菌毛蛋白及两者混合物免疫对虹鳟的相对免疫保护率(Relative Percentage Survival, RPS)分别为64.6%、37.5%和75.0%;ELISA检测发现,重组溶血素和重组菌毛蛋白单独免疫以及两者混合免疫均能有效诱导虹鳟产生抗各抗原的特异性抗体,在免疫2周后特异性抗体水平均显著高于对照组(P0.05),其中混合免疫组虹鳟血清中抗重组溶血素抗体水平显著高于重组溶血素单独免疫组,但其诱导产生的抗重组菌毛蛋白抗体水平与重组菌毛蛋白单独免疫组无显著性差异;荧光定量PCR检测结果显示,3个免疫组中IL-6、IL-8、TCR及CD4基因的表达水平均显著高于PBS对照组,其中重组溶血素与重组菌毛蛋白共免疫组中IL-6、CD4、MHC-Ⅱ及IgM基因表达水平显著高于其他免疫组。研究结果表明,重组溶血素对虹鳟具有较好的免疫保护效果,且提示重组菌毛蛋白具有开发成为佐剂分子的潜在价值,该结果可为杀鲑气单胞菌亚单位疫苗的研制及应用提供了重要参考。     

人A组轮状病毒结构蛋白VP7原核表达及其卵黄抗体效价的研究

为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7。将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21(DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达。通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋。用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY。进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性。结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1:100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒。     

重组IL-5质粒pVAX1-mIL-5增强卵透明带DNA避孕疫苗黏膜免疫效能

目的:探讨利用白细胞介素5作为DNA疫苗佐剂增强黏膜免疫反应,提高卵透明带DNA避孕疫苗抗生育效能的可行性。方法:用pVAX1-m IL-5和卵透明带避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒口服免疫雌性小鼠,共设3组,每组6只。A组单独用50μg pVAX1-pZP3α免疫;B组用疫苗加等量的pVAX1-m IL-5质粒为佐剂共免疫;C组为空白对照组。每组动物接受3次免疫(第0、3、6周)。采用ELISA法检测小鼠血清及阴道冲洗液中抗pZP3 IgA抗体。第10周雌雄交配,统计雌鼠怀孕情况;第16周取双侧卵巢作石蜡连续切片,光镜观察卵巢病理学变化。结果:B组全部小鼠血清抗体呈阳性反应,A组只有3只小鼠血清抗体呈阳性反应,且B组小鼠的抗体滴度水平均高于A组小鼠;抗生育率B组小鼠为100%,A组小鼠为50%,C组小鼠为0%,2检验分析结果表明各组间的差异有统计学意义,抗生育效能与交配时抗pZP3 IgA抗体的强度有关;卵巢切片的组织病理学观察结果表明,有抗生育效能的小鼠卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组及无抗生育效能的小鼠卵巢结构无差异。结论:利用重组质粒pVAX1-m IL-5与卵...     

兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒及禽流感病毒血清抗体水平影响的研究

选择90只1日龄星杂蛋鸡随机分为两组,实验组在7、14、21、28、35、42、49日龄时分别胸肌注射无菌处理过的兔圆小囊抗菌肽0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.5、0.5mg,对照组同时分别注射相同体积的灭菌生理盐水。常规免疫后,分别于第7、14、21、28、35、42、56日龄采血分离血清,实验组及对照组均随机抽取10只鸡的血清进行血凝抑制实验(HI),分别测定NDV和AIV血清抗体的血凝抑制效价。结果显示:实验组NDV和AIV血清抗体水平均明显高于对照组(P<0.01)。表明兔圆小囊抗菌肽可显著提高鸡新城疫弱毒苗及禽流感灭活苗的抗体水平。