维药异常黑胆质成熟剂的抗肿瘤作用及其对细胞迁移的影响

探讨维药异常黑胆质成熟剂(ASM)抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞迁移的影响.体外培养人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP 细胞株、人宫颈癌 Hela 细胞株、人胃癌BGC-823细胞株,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法检测不同浓度ASM(1、2.5、5、10、15、20、50mg/mL)对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株4种肿瘤细胞增殖的影响;选择人肝癌Bel-7402细胞株为研究对象,采用细胞划痕运动实验和扫描电镜技术,观察不同浓度ASM对肝癌细胞迁移的影响.MTT检测结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株生长均有一定抑制作用,且在15～20mg/mL作用下最为明显,对不同肿瘤细胞株抑制作用不一;体外细胞划痕运动实验和扫描电镜结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞运动有一定抑制作用.由此推论,ASM对肿瘤细胞增殖和肿瘤细胞迁移有一定抑制作用.     

蛇葡萄素对结肠癌细胞增殖抑制、自噬诱导及自噬对增殖的影响研究

明确蛇葡萄素(Ampelopsin,AMP)对人结肠癌HCT116细胞增殖的抑制,探讨自噬活化及自噬对AMP抑制细胞增殖作用的影响,为AMP临床研究抗肿瘤作用的自噬靶点提供依据.采用CCK-8法检测AMP(0～300μg/m L)作用HCT116细胞后细胞增殖变化,确定AMP的抗肿瘤作用;慢病毒感染法构建HCT116-RFP-GFP-LC3重组细胞株研究自噬标志蛋白LC3的荧光表达,结合蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白LC3I/II和P62的表达确定细胞自噬活化状态;通过抑制剂Baf A1阻断HCT116细胞自噬晚期降解过程,比较AMP组与AMP+Baf A1组间AMP对HCT116细胞增殖的影响明确自噬对细胞增殖的影响.结果表明:AMP(150～300μg/m L)抑制细胞增殖,表明AMP具有抗肿瘤作用;对比空白对照组,AMP(50、75μg/m L)组重组细胞出现LC3荧光点状自噬体,自噬发生率分别为26.72%、19.47%; LC3II蛋白表达上调,P62下调,表明AMP诱导细胞自噬且自噬过程完整;与AMP组比较,加入Baf A1后,LC3II、P62蛋白及自噬点均显著增加,证明自噬晚期过程被阻断,但抑制自噬晚期降解过程对AMP组与AMP+Baf A1组间细胞增殖影响不显著(P0.05),说明在实验浓度范围内,阻断自噬降解过程对细胞增殖无显著影响.结论表明:AMP(0～300μg/m L)能够抑制结肠癌细胞增殖,激活细胞自噬,且自噬晚期降解过程阻断对细胞增殖无显著影响,细胞的增殖抑制可能是通过其他途径实现.     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对鼠腹腔巨噬细胞的增殖作用

巨噬细胞源性泡沫细胞增殖在动脉粥样硬化(As)的形成过程中起重要作用.用形态学、细胞计数、MTT掺人法和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺人实验观察比较了氧化修饰脂蛋白(Ox-LDL,Ox-VLDL)和相应的天然型脂蛋白对培养的鼠腹腔巨噬细胞增殖的影响.结果发现,Ox-LDL和Ox-VLDL均能显著刺激巨噬细胞内DNA合成增加促进细胞增殖(与天然脂蛋白相比,P<0.001),其中Ox-VLDL的作用最为明显(与Ox-LDL相比P<0.05);低浓度的氧化型脂蛋白(蛋白浓度0～5mg/L)促巨噬细胞呈剂量依赖性增殖,浓度为5mg/L时,达到最高峰,随着浓度的进一步增加.促增殖作用逐渐减弱;而天然LDL及VLDL不能促进巨噬细胞增殖.上述结果表明,与Ox-LDL相似,Ox-VLDL促进巨噬细胞增殖可能是其致As的机制之一.     

纳米氧化铁对聚球藻生长及生理代谢的影响

用不同浓度纳米氧化铁(n Fe2O3)作用于聚球藻,并通过对聚球藻对数期的细胞数、叶绿素、总蛋白、总糖和中性脂含量等生理指标的测定,研究了n Fe2O3对聚球藻生理代谢的影响.结果表明,在0.3 mg/L至10 mg/L浓度范围内,n Fe2O3对聚球藻的生长未产生明显抑制或者胁迫的作用,表现为其细胞内的总蛋白、中性脂、总糖含量没有因n Fe2O3的存在而产生显著地变化.同时细胞数和叶绿素含量没有增加的趋势,说明在该浓度下铁元素的增加不会对聚球藻产生生长促进作用.     

日本七鳃鳗Lj-RGD3毒素肽的3种单RGD模体突变体的克隆表达及其抑制Lewis细胞活性研究

为了评价Lj-RGD3 3个不同位点RGD模体的存在是否对该蛋白功能具有必要性及影响程度,采用全序列合成的方法合成了3种基于Lj-RGD3的RGD缺失突变体基因,并成功对其进行了pET23b载体的构建及重组蛋白的表达和纯化.将这3种分别保留第1位、第2位、第3位RGD模体的重组蛋白各命名为rLj-113、rLj-114和rLj-115.比较了这3种重组蛋白对Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其是否能引起Lewis肺癌细胞凋亡进行了测定.结果显示,rLj-113、rLj-114和rLj-115对Lewis的增殖半抑制浓度IC_(50)值分别为2.73,2.75,2.53μmol/L,并且以剂量依赖的方式抑制Lewis小鼠肺癌细胞的增殖;突变体蛋白还能抑制以bFGF(basic fibroblast growth factor)为趋化剂的Lewis小鼠肺癌细胞的迁移及侵袭.综上可知,rLj-RGD3蛋白的RGD模体的位置并不影响其在抗Lewis小鼠肺癌细胞的生物活性,而保留单RGD模体的突变体rLj-113、rLj-114、rLj-115仍然具有抑制Lewis小鼠肺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及诱导Lewis细胞凋亡的生物学活性.     

氯化铒和氯化镝对小鼠免疫细胞作用的体外实验

为探讨稀土元素对机体免疫功能的影响,通过噻唑兰(MTT)法研究了氯化铒(ErCl3)和氯化镝(DyCl3)对小鼠免疫细胞的作用.结果表明,浓度为0.001,0.1,1μmol/L的ErCl3抑制小鼠脾细胞的增殖,其他测试浓度下的ErCl3对小鼠脾细胞增殖没有影响.除浓度为0.1μmol/L的DyCl3对小鼠脾细胞增殖没有影响外,其他测试浓度的DyCl3促进小鼠脾细胞的增殖.在测试浓度范围内,ErCl3对小鼠T淋巴细胞增殖的影响表现为:抑制-促进-没有影响-促进;DyCl3均促进小鼠T淋巴细胞的增殖,而且随着作用浓度的增大,其促进作用减弱.ErCl3和DyCl3对小鼠B淋巴细胞的增殖的影响是类似的,浓度为0.001和0.01μmol/L的ErCl3对小鼠B淋巴细胞的增殖没有影响,同样浓度的DyCl3则促进小鼠B淋巴细胞的增殖;升高浓度为0.1μmol/L时,ErCl3和DyCl3均抑制小鼠B淋巴细胞的增殖,进一步升高浓度为1,10μmol/L时,它们都转而促进小鼠B淋巴细胞的增殖.作用时间为4h时,ErCl3和DyCl3均能提高NK细胞的活性,当作用时间延长到8h时,其提高NK细胞的活性的能力减弱,甚至个别浓度转为降低NK细胞的活性.研究结果提示,ErCl3和DyCl3对小鼠免疫细胞的影响与其作用时间、浓度和稀土化合物的种类存在着一定的相关性.     

RGD对人纤维肉瘤细胞HT1080增殖、黏附及转移影响的研究

利用合成的RGD(Arg-Gly-Asp)三肽研究了其抑制人纤维肉瘤细胞HT1080的增殖、黏附及转移作用.采用MTT法检测了不同浓度的RGD对HT1080细胞增殖及黏附纤维粘连蛋白(fibronectin)能力的影响;采用细胞划痕法研究了RGD对HT1080细胞在纤维粘连蛋白中迁移能力的影响.结果表明,合成的RGD能抑制HT1080细胞的增殖,并具有抗肿瘤细胞黏附、抗转移的活性.     

氯化镧和氯化钆对小鼠免疫细胞作用的体外实验

通过MTT法研究了LaCl3和GdCl3对小鼠免疫细胞的作用.结果表明,GdCl3在0.001～10μmol/L浓度内均能促进小鼠脾细胞的增殖,0.001～0.1μmol/L的LaCl3促进小鼠脾细胞的增殖,其他浓度没有影响;除0.1μmol/L浓度外,其他测试浓度下的LaCl3均促进小鼠T淋巴细胞的增殖;0.001μmol/L的GdCl3抑制小鼠T淋巴细胞的增殖,0.01～1μmol/L时对小鼠T淋巴细胞的增殖没有影响,10μmol/L时转而促进小鼠T淋巴细胞的增殖.浓度为0.1μmol/L的LaCl3和GdCl3对小鼠B淋巴细胞的增殖有抑制作用,其他测试浓度下均促进小鼠B淋巴细胞的增殖.作用时间为4 h时,0.001μmol/L的LaCl3对NK细胞的活性没有影响,其他浓度下的LaCl3均能提高NK细胞的活性,0.001～10μmol/L的GdCl3均能提高NK细胞的活性;作用时间为8 h时,0.001和0.01μmol/L的LaCl3显著降低NK细胞的活性,0.1和1μmol/L的LaCl3提高NK细胞的活性,当浓度为10μmol/L时对NK细胞的活性没有影响,1μmol/L的GdCl3降低NK细胞的活性,其他测试浓度均能提高NK细胞的活性.这提示LaCl3和GdCl3对小鼠免疫细胞的影响模式与其作用浓度、作用时间以及稀土元素的种类都是密切相关的.     

牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制

为了研究牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D体外抗肿瘤活性及作用机制,用MTT法检测6.25～100 mg/L 2-hydroxyyunnandaphnine D分别作用于人肝癌细胞(HepG-2)、人乳腺癌细胞(MCF-7)及人宫颈癌细胞(HeLa)后不同时间点的细胞存活并计算细胞增殖抑制率和IC50;FDA/PI双染色荧光显微镜观察细胞死亡情况;分光光度法检测Caspase-3酶活性变化;MTT法检测凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对2-hydroxyyunnandaphnine D抑瘤活性的影响.结果显示:2-hydroxyyunnandaphnine D对3种瘤株均有明显的抑制作用,且具有明显的时效量效关系,其48h的IC50值分别为(1.30±0.09),(7.32±0.10)和(8.41±0.11)mg/L.FDA/PI双染色荧光显微镜观察显示2-hydroxyyunnandaphnine D组中死亡细胞数较正常对照组细胞死亡数量增加,且随着剂量的加大细胞死亡数量增加.MTT法显示凋亡抑制剂Z-VAD-FMK不能阻断2个浓度的2-hydroxyyunnandaphnine D对HepG-2细胞的增殖抑制作用.Caspase-3酶活性测定显示l0,30mg/L 2-hydroxyyunnandaphnine D作用后肿瘤细胞的Caspase-3酶活力单位与正常对照组比较无统计学意义.结果表明:牛耳枫生物碱2-hydroxyyunnandaphnine D在体外具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制并非通过激活Caspase-3途径.     

重组精氨酸脱亚胺酶的表达、纯化及其抗癌活性

克隆了ADI并在大肠杆菌中表达重组蛋白,得到的ADI重组蛋白通过离子交换层析纯化并进一步复性.复性后的重组ADI蛋白经分析与天然ADI蛋白具有相近的分子量(大约46 kD)和相似的酶活性(38 U/mg),可以将L-精氨酸转换成瓜氨酸.在蛋白酶降解实验中,发现重组ADI具有比天然ADI更稳定的抗胰蛋白酶降解活性,重组ADI的半衰期比天然ADI的更长.重组ADI能抑制肿瘤细胞HepG2的生长,同时具有抑制HepG2细胞迁移的作用.     

Increased production of recombinant prourokinase with porous microcarrier cell culture by periodic pressure oscillation in a stirred tank reactor

0 IntroductionIn microbiological fermentation and plant cell cul-ture ,there are manyexamples of applying“periodic oper-ation”to enhance productivity[1-3],although the mecha-nismof this effect remains obscure .In animal cell cul-ture ,applying intermittent hydrostatic pressure could in-crease cell proliferation[4-6]orincrease enzyme activity[7].Process parameters such as temperature , pressure , pH,light intensity and nutrients concentration may be chosentointroduce physical stimuli .Cytopo…     

巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶

对巴斯德毕赤酵母GS115菌株在工业培养基中发酵和分离条件进行了研究。结果表明：将传统工业培养基中碳源和氮源的质量浓度分别降低至35 g/L和5 g/L时,酵母生长期的细胞密度与传统培养基的相差不大,但培养时间可减少4 h,节省了生产成本;维持诱导期间的pH值为4.0对目标蛋白的表达最有利,目标蛋白的表达量占酵母分泌蛋白总量的70％,比原来增加了近30％;分离纯化过程,采用将强阳离子（SPFF）与弱阴离子（DEAE）交换层析柱偶联的分离方法,达到除杂,并浓缩目标蛋白的作用,目标蛋白产量约为50 mg/L;将目标蛋白酶切后,质量酶活性为8.56×10-3 mol/(s•g)。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子诱导Balb/c3T3细胞增殖的实验研究

目的研究不同浓度重组人碱性成纤维细胞因子对Balb/c 3T3细胞增殖活性的影响.方法重组质粒pGEX-bFGF转入到DH5α大肠杆菌体内,增菌培养表达bFGF,亲和层析纯化,制备8种不同药物浓度的bFGF,分别进行诱导Balb/c 3T3细胞增殖实验研究,MTT法检测各组细胞增殖活性.结果 bFGF诱导Balb/c 3T3细胞增殖存在浓度依赖性,最适浓度为4～16μg/L.结论 bFGF具有较好的诱导Balb/c 3T3细胞增殖的能力,为后续研究工作奠定实验基础.     

高密度培养大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm的优化条件

利用Bioengeering 3．7L自控式发酵罐,以分批培养和补料分批培养相结合的培养技术,高密度培养重组大肠杆菌TB1／pMAL-hOCIFm,生产重组人破骨细胞形成抑制因子成熟肽(recombinant human osteoclastogenesis inhibitory factor mature peptide,rhOCIFm)。通过对碳、氮源补加方式以及溶解氧等参数的控制,使工程菌E．coliTB1／pMAL-hOCIFm的发酵菌体OD600达到57．8,rhOCIFm与MBP融合蛋白(hOCIFm-MBP)的含量达到3．2g／L。本研究为工业化生产rhOCIFm奠定了基础。     

乳铁蛋白对口腔癌细胞中VEGF和bFGF表达的影响

目的探讨乳铁蛋白对口腔癌细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响.方法选用人口腔鳞癌细胞系CAL-27,分为0.006,0.013,0.025,0.050 g/L重组人乳铁蛋白实验组和空白对照组.应用RT-PCR法检测VEGF和b FGF mRNA表达水平;应用Western Blot法检测VEGF和b FGF蛋白表达水平.结果 CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF mRNA均随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF和b FGF mRNA表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).CAL-27口腔癌细胞VEGF和b FGF蛋白产物随着乳铁蛋白浓度增加表达量逐渐减少;0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGF,b FGF蛋白表达量明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论乳铁蛋白可有效抑制口腔癌细胞系CAL-27细胞中VEGF,b FGF的转录和表达,进而抑制血管生成,可作为乳铁蛋白抗口腔癌的机制之一.     

新西兰兔血气和部分血液生理生化参数的测定

目的建立新西兰兔血气等生理参数,为医学实验研究提供数据。方法在麻醉状态下采取股动脉抗凝血,应用血气分析仪进行血气和部分血液生理生化指标的测定;通过股动脉插管测量血压。结果总二氧化碳(TCO2):19.9 mmol/L～37.1 mmol/L;红细胞压积(HCT):28.1%～42.9%PCV;血红蛋白(Hb):9.6 g/dL～14.6g/dL;pH:7.40～7.52;二氧化碳分压(PCO2):28.3 mmHg～49.1 mmHg;氧分压(PO2):53.4 mmHg～91.0 mmHg;碳酸氢根离子(HCO 3-):19.00 mmol/L～35.8 mmol/L;碱剩余(BE):-6.38 mmol/L～13.3 mmol/L;血氧饱和度(sO2):90.0%～99.0%;iCa:1.59 mmol/L～1.71 mmol/L;Na+:125.3 mmol/L～151.9 mmol/L;K+:1.77 mmol/L～4.55 mmol/L;平均动脉压(MABP):77.5 mmHg～128.5mmHg。结论新西兰兔的血气和部分血液生理生化参数与人和其他实验动物有较大差异。     

丹参酮ⅡA促内皮细胞增殖作用研究

目的:观察活血化瘀类中药丹参的活性成分—丹参酮ⅡA对内皮细胞增殖的影响、及其适宜作用浓度和时间,并初步探讨其作用机制。方法:不同浓度丹参酮ⅡA作用于人脐静脉内皮细胞系(HUV-EC-C)不同时间,利用SRB方法测得其吸光度值(OD),以确定各组内皮细胞增殖情况,并筛选适宜浓度和适宜时间点。结果:丹参酮ⅡA具有显著的促人脐静脉内皮细胞(HUV-EC-C)增殖效应,其中终浓度6 mg/L干预48 h效应最为显著。结论:丹参酮ⅡA能够显著促进内皮细胞增殖,提示其具有促血管生成作用。     

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用,并分析相关机制.方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株,应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平.结果流式细胞术结果显示:与对照组比较,pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖,并使细胞周期发生改变,多数细胞抑制在G0/G1期,细胞凋亡率增加明显;通过RT-PCR电泳结果证实:pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达,同时激活caspase-3.结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖,并促进其凋亡,其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关.     

Chaetoglobosins E诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用机制研究

为探究Chaetoglobosins E(ChE)对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,体外培养人乳腺癌MCF-7细胞、人膀胱癌T-24细胞、人黑色素瘤C8161细胞、人白血病U937细胞,用不同浓度的ChE分别作用于4种细胞24 h或48 h,MTT法检测4种肿瘤细胞的增殖情况;为进一步研究其作用机制,Hoechst 3334...