热休克反应负调节小鼠巨噬细胞IL-18的表达

热休克反应(HSR)是机体或细胞保护自身免受一系列有害刺激的自我保护性反应, 近年来的研究表明它还参与了细胞因子的表达调节. IL-18是调节免疫反应的一个重要的细胞因子. 研究了小鼠巨噬细胞(RAW264.7)中HSR对脂多糖(LPS)诱导的IL-18表达的效应, 结果表明, HSR强烈抑制了LPS引起的IL-18的mRNA的转录和蛋白分泌. 进一步对这一下调效应机制的研究表明, 在热休克细胞中, 介导IL-18表达的转录因子AP-1与IL-18启动子区域(-1120 ~ -1083)的DNA序列结合活性明显下降, AP-1上游激酶JNK的磷酸化水平也显著降低. 上述这些研究结果提示, HSR对IL-18表达的下调效应与JNK/AP-1信号通路的抑制密切相关.     

IL-2增强小鼠T细胞APEX基因的表达

T淋巴细胞增殖和分化是非常复杂的过程,它受许多细胞外因子的调节。这些因子包括抗原、生长因子和细胞表面分子等等,IL-2是一个重要的细胞因子。IL-2与IL2R结合而介导了一个信号传导级联反应,维持细胞存活,导致细胞增殖与分化。在这个过程中,IL-2除了刺激一些共同的转录因子基因的表达,如c-fos,c-jun,c-myc等;也因细胞而异地激活了IL-2     

人重组内皮细胞衍生IL-8在大肠杆菌中高效表达

白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)是一种趋化因子,对中性粒细胞、T细胞有很强的趋化作用,并能活化中性粒细胞,因而IL-8在免疫调节和炎症过程中起着重要的作用。我们利用基因工程技术在大肠杆菌中表达出有生物活性的IL-8融合蛋白。     

小鼠眼角膜上皮细胞中IL-1Β对Fas配体的表达调控研究

Fas配体(Fas Ligand, FasL)在多种不同的上皮细胞中均见表达, 在炎症反应中诱导Fas阳性免疫细胞凋亡以保护组织. 为了研究眼角膜炎症反应过程与Fas配体之间的关系, 本研究检测了在眼角膜上皮细胞中IL-1β对FasL的表达翻译水平以及细胞毒性的影响, 明确了在眼角膜上皮细胞中IL-1β抑制FasL的表达以及蛋白翻译, FasL的启动子活性受到IL-1β作用浓度的影响, 两者呈相关性表现, 发现IL-1β阻断由FasL诱导Fas阳性细胞对于眼角膜上皮细胞的细胞毒性作用. 这些结果表明, 眼角膜上皮细胞FasL受IL-1β的调控.     

SHP-1是IL-4诱导的IL-4R在脾脏细胞中表达所必需的

为了探索包含SH-2功能域的蛋白酪氨酸磷酸酶(SH-2-containing protein tyrosine phosphatase 1, SHP-1)在IL-4诱导的IL-4受体(IL-4 receptor, IL-4R)表达中的作用, 用Na₃VO₄处理野生型(wild type, WT)实验小鼠的脾脏细胞以及用IL-4刺激可育Motheaten小鼠(viable motheaten mice, me^v/me^v)的脾脏细胞, 并检测IL-4Rα mRNA的表达. 我们发现IL-4诱导的IL-4Ra mRNA表达在经Na₃VO₄处理后野生型小鼠的脾脏细胞以及用IL-4刺激的mev/mev小鼠的脾脏细胞中降低了. 结果表明, IL-4诱导的IL-4Rα mRNA表达的降低是由于IL-4R的低水平表达导致的STAT6信号转导缺陷. 实验进一步证实, 在me^v/me^v)小鼠的脾脏细胞中IL-4Rα蛋白表达的降低是由于细胞组成的改变. 在me^v/me^v) 小鼠脾脏组织中, 表达相对高水平IL-4R的CD4⁺, CD8⁺和CD19⁺的细胞比例显著下降, 相反表达低水平IL-4R的Mac-1⁺和Gr-1⁺细胞比例明显升高. 尽管IL-4R蛋白表达是明显下降的, 但在同窝对照小鼠(+/-)和me^v/me^v)小鼠的脾脏细胞中IL-4Ra mRNA的表达未发现明显的差异. 在B细胞、T细胞和巨噬细胞中也没有显著差异. 这提示在巨噬细胞中IL-4R表达细胞类型特异性下调是通过转录后水平的调控来实现的. 研究结果提示, 在脾脏细胞中SHP-1对于IL-4诱导的IL-4R表达是必需的, 并且通过影响血细胞生成而间接地调控相应的功能.     

用cDNA表达阵谱比较鼻咽癌与正常鼻咽组织的基因表达谱差异

Atlas~（TM）cDNA Expression array Ⅰ是Clontech公司1997年4月推出的第1张商品化大规模核酸阵谱,包括588个严格选择的处于严密转录调控、在不同生物过程中起关键作用的人类基因cDNA序列,分6个功能区（A,B,C,D,E,F）点阵于1张尼龙膜上。我们用其做了人胚鼻咽、成人鼻咽和鼻咽癌组织的基因表达谱,比较其差异。材料包括胚胎鼻咽2例,成人慢性鼻咽炎活检组织11例及鼻咽癌活检组织17例。提取总RNA,纯化Poly A RNA,合成放射性标记cDNA探针,与阵谱杂交及放射自显影。结果见图1与表1。     

抑制表达谷氨酰胺合成酶基因对水稻氮代谢和生长发育的影响

从明恢63平衡化cDNA文库中获得水稻GS2基因的cDNA克隆, 通过基因克隆和农杆菌介导的水稻遗传转化方法将GS2基因导入中花11进行超量表达. 对获得的转基因植株进行生长表型和基因表达、生理生化指标测定与分析. 结果显示, T₁代转基因植株由于GS2的抑制表达出现黄化现象, 生长受到限制; 叶片叶绿素含量与GS2基因的表达量紧密相关; 植株中大多数氮代谢、叶绿素合成和光呼吸途径中相关基因表达量上升; 而植株的氮代谢水平下降, 包括GS活性、水溶性蛋白和氨基酸含量.     

猪的主要组织相容性复合体表达谱分析

为了全面地了解SLA在各组织的表达情况, 深入理解SLA的功能, 利用“家猪基因组计划”中得到的大量EST, 构建了丹麦长白猪51种组织的SLA表达谱, 并进行了若干组织的不同发育阶段以及丹麦长白猪和中国二花脸猪SLA表达水平的比较. 在确定该方法可靠的同时, 发现经典的抗原呈递基因高表达于免疫组织和消化道的中段; 类似于HLA-C, SLAⅠa类基因SLA-3的表达丰度和组织表达模式明显不同于SLA-1和SLA-2. 在进行品系间比较时发现, 除空肠外, 二花脸猪的其他组织抗原呈递基因的表达水平均高于丹麦长白猪. 前者的MHC基因在多种组织(包括免疫系统、肾上腺等)的高表达可能是二花脸猪高抗逆性的基础之一, 而后者的MHC基因在空肠(上皮细胞)的高表达可能是丹麦长白猪高生长速度、高饲料回报率的一个基础.     

在植物中表达农用医用动物基因

在植物中表达农用医用动物基因是必要的，也是十分有意义的。本文对动物基因在植物中的整合、转录和表达作了回顾，并提出了一些自己的看法。     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因克隆及其原核表达载体构建、表达

通过ＰＣＲ方法克隆出大肠杆菌株Ｈ－３０的胞嘧啶脱氨酶基因，并将其起始密码子ＧＴＧ突变为ＡＴＧ，构建了ＣＤ基因的原核重组表达载体ＰＢＶ２２０－ＣＤ，通过测定胞嘧啶脱氨酶活性筛选出ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０ＣＤ－１１５－氟胸嘧啶对ＣＤ活性克隆有杀灭毒性，ＤＮＡ序列分析显示ＣＤ高表达活性克隆Ｈ－３０－ＣＤ－１１较基因文库中所报道的ＣＤ基因存在１６个位点碱基改变，引起肽链中氨基酸改变的位点有５人。     

人神经营养素-3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

将人NT 3基因插入 pPAK9中后与Bsu36Ⅰ酶切的Bac6昆虫杆状病毒基因组DNA共转染sf2 1细胞 ,以空斑法分离重组病毒 .狭缝杂交、细胞免疫化学染色和背根节无血清培养证明NT_3整合入Bac6DNA中 ,表达并分泌至胞外 .2 0 0mL培养上清经CMSepharoseFastFlow纯化得到 2 0 0 μgNT_3纯品 ,其最大生物效应浓度为 4ng/mL .     

人基因组中表达序列的分离

迅速分离和鉴定大片段基因组DNA中的表达序列,可加速人类疾病相关基因的克隆和人类基因转录图的构建.本文对几种常用的分离表达序列的方法,就其可行性、应用前景和面临的问题展开讨论.     

高粱叶绿体psbD基因的克隆及其高效表达

近年来光合作用基因工程的研究进展十分迅速,许多重要的编码光合作用反应中心的蛋白质及酶的基因,已在多种植物叶绿体基因组及核基因组上定位并测定了其碱基序列,杉浦昌弘等先后完成了烟草、水稻等高等植物叶绿体基因组全序列分析,但是C_4植物除玉米外,叶绿体基因的研究较少,高粱是主要的C_4植物,其叶绿体光系统基因的研究国内外均     

端粒酶高表达对Bcl-2的负调节使用

端粒酶和Bcl-2均对调控细胞凋亡有重要作用,端粒酶的活化及Bcl-2的表达失调还与肿瘤的形成密切相关。端粒酶与Bcl-2之间的确切联系目前仍不清楚。研究活化的端粒酶对Bcl-2表达的影响,首先发现在端粒酶阳性的肿瘤细胞或转化细胞中,Bcl-2的表达明显低于端粒酶阴性或活性低的细胞。进而,在外源性端粒酶催化亚基基因转化的成纤维细胞中,重新表达端粒酶的同时,Bcl-2的表达受到明显的抑制。进一步提示,端粒酶表达与Bcl-2的表达存在某种内在联系,前者的高表达可能对Bcl-2的表达起负调节作用。     

病毒V-myc表达质粒的构建

在当今的癌基因研究中,研究癌组织中有关癌基因产物已成为探讨肿瘤发病机制、癌基因的激活及把癌基因的激活程度与肿瘤发展的临床表现及愈后联系起来的一个重要的不可缺少的研究手段。目前已知myc-基因家族的扩增涉及到多种组织学类型不同的恶性肿瘤并与恶性程度相关。如C-myc基因扩增的肿瘤有急性早幼粒细胞性白血病、恶性淋巴瘤、结肠癌、     

瑞氏木霉过量表达重组蛋白的机制、表达调控及应用研究进展

丝状真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)具有很强的分泌纤维素酶的能力.近年来,利用基因工程的手段对瑞氏木霉进行遗传改造,构建高效表达载体,产生具有新性状的重组菌株,用以过量表达同源和异源蛋白的研究取得了新的进展.本文就在瑞氏木霉分泌重组蛋白的机理、表达调控及应用等研究方面的分子生物学最新进展作一综述.     

转化生长因子-β mRNA在某些白血病细胞中的表达

转化生长因子-β(TGF-β)的双向调节作用为人瞩目,被列为自分泌生长抑制因子(Autocrine growth inhibitor)的候选者。现已在乳腺癌细胞获得证据,但在白血病及其它肿瘤尚未证实。近年来,外源性TGF-β对正常和白血病造血细胞调节作用已有较多报道,并高度怀疑TGF-β起自分泌生长抑制因子作用。本研究旨在取得TGF-β作为白血病细胞自分泌生长抑制因子的实验依据,遂选取已发现有自分泌生长抑制因子的615小鼠白血