妊娠期母体甲状腺疾病患者 甲状腺功能及免疫指标相关研究

目的探讨妊娠期母体自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者检测血清促甲状腺激素(TSH)、血清游离三碘甲状原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、血清促甲状腺素受体抗体(TRAb)、IL-17(白细胞介素17)的意义.方法应用化学发光免疫分析法(CLIA)检测妊娠早、晚期4组孕妇血清TSH,FT3,FT4,TGAb,TPOAb,TRAb等甲状腺疾病相关指标,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测受试者IL-17的水平.结果入组的4组AITD患者TSH,FT3,FT4水平表现出差异性变化,不同诊断的患者甲状腺功能指标均有显著差别. AITD患者的甲状腺自身抗体TCAb、TPOAb、TRAb和IL-17等指标均出现阳性表达,且甲状腺自身抗体水平在不同的AITD疾病类型中出现不同变化,患者IL-17水平变化早于甲状腺自身抗体出现异常变化具有警示意义.结论妊娠期甲状腺功能相关指标、甲状腺自身抗体及IL-17水平与妊娠期母体AITD的诊断及鉴别密切相关,IL-17早于自身抗体出现异常具有提示作用,临床上可采用这些检测指标在孕期全程进行AITD的筛查及监测.     

局部免疫调节治疗自身免疫性甲状腺疾病临床研究

目的探讨局部免疫调节治疗自身免疫性甲状腺疾病的临床效果.方法选取360例自身免疫性甲状腺疾病患者,采用数字表法将患者随机分为观察组(n=175)和对照组(n=185),对照组给予常规口服药物治疗,观察组给予口服药物+局部免疫调节治疗,观察两组治疗前后甲状腺体积、甲状腺功能、甲状腺自身抗体变化以及复发、不良反应情况.结果观察组治疗后甲状腺右叶和左叶甲状腺体积分别为(5.24±0.60)cm3和(6.32±0.48)cm3,明显低于对照组(P0.05);观察组治疗后游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和促甲状腺激素(TSH)分别为(12.01±0.95),(3.00±0.57)pmol/L和(5.41±0.87)m U/L,明显低于对照组(P0.05);观察组治疗后甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)和甲状腺球蛋白抗体(TGAb)分别为(184.94±22.81)IU/m L和(322.41±50.95)IU/m L,明显低于对照组(P0.05);观察组治疗后1 a复发率和不良反应发生率分别为12.42%和5.14%,明显低于对照组(P0.05).结论局部免疫调节治疗自身免疫性甲状腺疾病有较好的临床效果,值得临床推广应用.     

轮状病毒间接免疫荧光的检测方法

以兔抗SA11多克隆抗体为一抗、 Alexa 488标记的山羊抗兔抗体为二抗, 通过对反应条件的优化建立轮状病毒（RV）检测的间接免疫荧光法（IFA）. 实验结果表明, IFA最佳工作条件为: MA104细胞密度为每孔2×10⁴个, 胰酶活化轮状病毒质量浓度为1 μg/mL, 培养时间为18 h, 一抗最适稀释度为1∶800, 二抗最适稀释度为1∶500.     

五种不规则抗体检测方法的比较研究

比较盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检测受血者血清中不规则抗体的敏感性、特异性。选取解放军总医院门诊及住院输血患者5000例,分别采用盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶抗人球蛋白法对其输血前标本进行抗体筛选,对阳性结果进行抗体鉴定。盐水法未能检出阳性结果;木瓜酶法检出其中的15例,特异率86．7％;试管间接抗人球蛋白法检出了其中的19例,特异率为89．5％;凝聚胺法检出阳性结果18例,特异率100％;全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检出阳性标本22例,特异率90．9％。说明盐水法不适合不规则抗体检测;木瓜酶法检出率低,具有一定局限性;试管间接抗人球蛋白法需要反复洗涤红细胞,费时较多,不便于开展大规模筛查;凝聚胺法简便、快速,但手工操作,不易标准化;全自动微柱凝胶抗人球蛋白法灵敏度高、重复性好、易于标准化,适于临床输血前大批量抗体筛选。     

两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

胆酸钠多克隆抗体的制备及其快速检测方法研究

目的:探索用胶体金免疫层析法快速检测胆酸钠含量。方法:用碳二亚胺法合成的免疫抗原胆酸钠-BSA,免疫新西兰白兔,制备抗胆酸钠多克隆抗体。用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定特异性抗体效价。制备胆酸钠—OVA抗原—胶体金复合物,组装检测试纸。结果:胆酸钠抗体的效价为1∶80 000,建立的胶体金快速测定法对胆酸钠的检测限为12μg/mL。结论:试纸条法是快速检测胆汁酸含量的有效方式,在临床检测方面具有广阔的运用前景。     

夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）及其表面刺突糖蛋白受体结合域（receptor-binding domain,RBD）的ELISA试剂盒.该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体，其中检测抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）偶联，通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.另外，对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.结果表明，双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1∶160 000和1∶320 000，试剂盒的定量检测下限为31 ng/mL.经验证，组装的试剂盒精密度为0.71%～1.59%，平均准确度为96.53%，与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.试剂盒各项参数均符合《中国药典》（三部）2020版标准，表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.     

双抗体夹心ELISA法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法.方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3 μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1:20 000稀释.用建立的ELISA方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测.     

根霉Rhizopus sp.TC1产酶条件的研究

根据要因实验原则,选择影响因子较大的因素进行实验,初步研究了根霉Rhizopussp.TC1的产酶条件.经实验确定优化产酶条件为:稻草∶麸皮=1∶1;固液比=1∶3;接种量9 mL种子液/100 g湿基;温度28℃,在此条件下发酵96 h,FPA和CMC酶活分别达到17.8 IU/g、187.0 IU/g,较优化前的12.3 IU/g、131.6 IU/g分别提高了45%和42%.     

噬菌体抗体库的构建

噬菌体抗体库技术是近年来非常活跃的一个研究领域,本文主要讨论噬菌体抗体库构建中一些关键的问题。     

基因工程抗体研究进展及其临床应用

基因工程抗体是继多克隆抗体和单克隆抗体之后的第三代抗体.近年来随着生物工程技术的发展,许多基因工程抗体陆续问世,本文详细介绍了基因工程抗体的研究进展,概述了基因工程抗体在临床方面的明显优势和应用潜力.     

噬菌体抗体库的构建

噬菌体抗体库技术是近年来非常活跃的一个研究领域．本文主要讨论噬菌体抗体库构建中一些关键的问题．     

基因工程抗体与制备技术的研究及应用

介绍了天然抗体的分子结构,对基因工程抗体的发展过程进行了回顾,陈述了各种基因工程抗体的设计思路、方法的特点,并在此基础上分析了当前基因工程抗体在临床上的应用前景。     

Effects of interlinker sequences on the biological properties of bispecific single-chain antibodies

Single-chain bispecific antibody (scBsAb) is one of the promising genetic engineering antibody formats for clinical application. But the effects of interlinker sequenees on the biological properties of bispecific single-chain antibodies have not been studied in detail. Three interlinker sequences were designed and synthesized, and denominatedas Fc, HSA, 205C‘, respectively. Universal vectors with these different interlinker sequences for scBsAb expression in E.coli were constructed. A model scBsAb based on a reshaped single-chain antibody (scFv) against human CD3 and a scFv directed against human ovarian carcinoma were generated and expressed in E. coli. The results of SDS-PAGE and Western blot showed that the different interlinker sequences did not affect the expression level of scBsAb. However, as demonstrated by ELISA and pharmacokinetics studies performed in mice, scBsAbs with different interlinker sequenees had difference in the antigen-binding activities and terminal haw-life time (T1/2β) in vivo, the interlinker HSA could remarkably prolong the retention time of scBsAb in blood. These results indicated that the peptide sequence of intertinker could affect important biological properties of scBsAb, such as antigen-binding properties and stability in vivo. So, selection of an appropriate interlinker sequence is very important for scBsAb construction. Optimal interlinker can bring scBsAb biological properties more suitable for clinical application.     

Monoclonal Anti-CD4 Antibody MT310 Binds HIV-1 gp120 Binding Site on CD4

IntroductionHuman immunodeficiency virus type1 ( HIV- 1 ) ,after binding by the envelope protein gp1 2 0 to itscellular receptor CD4,enters susceptible cellsthrough p H- independent fusion[1,2 ] . The sitewhich HIV- 1 gp1 2 0 binds is located in the firstdomain on the CD4molecule[3 5] .The anti- CD4m Ab Leu3a recognizes the gp1 2 0 binding site onCD4[6] and the anti- CD4m Ab MT31 0 stronglyinhibits HIV- 1 infection of CD4+ T cells,while theanti- CD4 m Ab MT1 5 1 weakly inhibitsinf…     

鸡禽流感母源抗体的消长规律及其免疫效果研究

为探讨科学的鸡禽流感免疫程序,对1～28日龄的土杂肉鸡和罗曼蛋鸡进行禽流感母源抗体检测,以及对雏鸡接种禽流感油乳剂疫苗后的HI抗体水平变化进行了监测。结果表明,两种雏鸡的母源抗体水平在1日龄时均达最高值,然后逐渐下降;肉鸡11日龄后H5、H9抗体滴度分别降低到4.2log2和4.3log2以下;蛋鸡28日龄后H5、H9...     

57例不规则抗体干扰ABO血型鉴定分析

通过研究干扰血型鉴定的不规则抗体的特异性及类型,为正确的进行血型鉴定提供实验参考依据。2013年7月至2014年7月对22 558例患者进行血型及不规则抗体筛查检测,对因不规则抗体干扰血型鉴定患者进行抗体鉴定,明确抗体特异性及类型,并选择与抗体对应抗原阴性的红细胞制备反定型细胞进行血型鉴定,以排除干扰明确血型。结果:发现57名患者因MNS、Rh、Lewis、Duffy、P血型系统产生的不规则抗体干扰血型鉴定,其中抗-M最多,共37例,占64.91%,其次为抗-E和抗-e相关抗体,均为5例,分别占8.77%;抗-Lea3例,占5.26%;Ig G与Ig M类混合抗体37例,单纯Ig G类抗体14例,单纯Ig M类抗体6例。研究结果表明,Ig M和Ig G类不规则抗体均可干扰血型鉴定,以Ig M类为主。     

猪瘟母源抗体消长规律的测定和免疫效果观察试验

本试验测定了6窝母猪免疫后产小猪0、1、7、14、21、28、35、42日龄猪瘟母源抗体消长情况和28～35日龄首免及二免后免疫效果观察。结果:未吃初乳的0日龄仔猪无母源抗体,1日龄仔猪母源抗体滴度达到高峰,以后逐渐降低;猪瘟母源抗体对1～28日龄的仔猪有保护,少部分仔猪在35日龄还有保护。28～35日龄首免后21日达到73.3%免疫保护,28日则达到93.3%;首免后1个月加强免疫一次,其较高的免疫抗体水平可以维持到二免后4个月,到5个月还能产生免疫保护,免疫合格率为73.3%,但6个月后免疫合格率降至46.7%;因此建议生产实际中,商品猪进行两次免疫即可,种猪以后每6个月免疫一次。     

基于公共信息资源的p185抗体人源化设计

通过计算机辅助分子设计的手段，综合序列分析和结构分析的结果对抗体的结构完成了计算机模拟，并对其进行了人源化的模建和改造，从而建立了一套快速可行的抗体人源化设计方案。对一株抗p185^neu/Her-2单克隆抗体进行了克隆测序，并采用此方案进行了人源化设计。此设计方案完全使用可公共访问的生物信息学工具和数据库，具有良好的实用性和推广价值。