利用大孔树脂从啤酒废酵母中分离谷胱甘肽

利用大孔树脂D001分离纯化还原型谷胱甘肽,其最佳试验条件为：pH值4.5、浓度为0.02 mol/L的磷酸缓冲液平衡,pH值7.5、浓度为0.02 mol/L的磷酸缓冲液洗脱,洗脱流速为2.0 mL/min.此法所得到的粗品颜色为白色,经高效液相色谱分析,其GSH质量分数为28.47%,平均收率为71.6%.     

抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

【摘要】目的 制备抗人FXYD3单克隆抗体（McAb）并鉴定其生物学特性。方法 以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA 、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3 McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。结果 筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHHPGETPPLITPGSA获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11?08 L / mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结论 成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。     

利用离子交换法分离草酸青霉发酵液中的三峡肽素

三峡肽素是草酸青霉(Penicillum oxalicum)发酵液中的一种线性五肽,对柑橘类水果的采后致腐菌有强烈的抑制作用,是一种潜在的水果保鲜剂.实验室主要通过发酵液醇沉淀、旋蒸浓缩、液相制备等方法进行小规模分离.为了提高三峡肽素的大规模分离能力,利用732强酸性苯乙烯阳离子交换树脂和D201大孔强碱性阴离子交换树脂对其进行了分离,探索了分离条件,优化了工艺参数,并分析了分离收率.结果表明：离子交换法可有效分离三峡肽素,阳离子交换树脂的最佳上样pH值为3.2,洗脱pH值为9,洗脱盐氯化钠的浓度为0.5 mol/L,收率可达88.42%,且色素和残糖含量较低.阴离子型树脂的收率略高,可达92.92%,其最佳分离条件为上样pH值为10,洗脱pH值为4,洗脱盐浓度为0.1 mol/L,但是去色素和残糖的能力及脱盐效率要弱于阳离子型树脂.     

雌三醇单克隆抗体的制备与表征

活化雌三醇(E3)C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备得E3的完全抗原.利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生等过程,最后获得了E3的单克隆抗体.对纯化的单克隆抗体的性质进行表征,结果表明:抗体的效价为6.0×10-10mol/L,抗体属于IgG1型,分子量为168000u ,单克隆抗体与固定化抗原亲和常数为4.7×107L/mol.     

福莫特罗单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

本实验采用重氮化法成功合成了FMT人工免疫抗原FMT-BSA和检测抗原FMTOVA,并用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗FMT的单克隆抗体(FMT mAb),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,融合后筛选出1D8、3E6共2株分泌抗FMT小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,采用间接ELISA法测定的腹水效价1:5.12×105,在0.1μg/L～8.1μg/L的范围内,线性回归方程为y=-0.422x+0.507(R2=0.978),IC50为1.04μg/L,对FMT具有较高的敏感性,亚型为IgG1,亲和常数K(FMT-3E6)=7.24×108 L/mol,与沙丁胺醇、西马特罗等β-激动剂类似物的交叉反应率CR(%)均小于0.1%,特异性良好,为FMT残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。     

青枯雷尔氏菌HPLC分析中色谱分离条件的研究

研究了在青枯雷尔氏菌的高效离子交换色谱(HPLC)分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响.建立了在室温下分离青枯雷尔氏菌的最佳色谱条件:采用Toyopearl SuperQ-650C强阴离子交换树脂、0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液(pH 8.0)、洗脱盐浓度为1 mol/L NaCl、洗脱梯度0~75%/30 min、流速1 mL/min.在该色谱条件下,可获得良好分离的3个青枯雷尔氏菌色谱峰.     

芋花叶病毒检测试剂盒的研制

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,DMV)CP基因的菌株,通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔,获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清.硫酸铵沉淀初步提取IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶3 100的一抗,将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成DMV检测试剂盒.用研制的检测试剂盒对芋、魔芋和马蹄莲叶片样品的间接ELISA检测表明,DMV在田间普遍发生,并确定研制的试剂盒完全可用于DMV检测.     

兔抗SARS冠状病毒IgG的纯化及鉴定

目的：制备高纯度的兔抗SARS冠状病毒的IgG。方法：采用辛酸-硫酸铵沉淀进行初纯,以及DEAE离子交换层析精纯IgG,利用SDS-PAGE对纯化后的IgG纯度进行测定,利用间接ELISA、病毒中和滴定对IgG进行效价测定。结果：纯化后的IgG相对纯度达到90％以上,ELISA检测效价为1：4800,病毒中和效价为1：640。结论：利用上述纯化工艺能获得高纯度的兔抗SAILS冠状病毒IgG,同时抗体活性损失较小。     

人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得抗人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG-β)单克隆抗体,以hCG为免疫原,经细胞融合和有限稀释后,得到4株分泌抗hCG-β单克隆抗体(McAb)细胞株.酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明,所得抗体均为IgG1,κ型,其腹水效价均可达10-6.     

飞船搭载菌株的阿维菌素B1a组分分析

阿维链霉菌HY1进行飞船搭载后,筛选得到了24株高产且遗传性状稳定的菌株,它们的总效价比出发菌株HY1提高24%以上,最高的达到了83%.同时,用HPLC法筛选B1a化学效价较高菌株,最终得到菌株2株,其中菌株HY365的总效价为5 924.7 mg/L,它的B1a化学效价为3 894.8 mg/L,占总效价的比例达到65.74%;HY516的B1a化学效价为3 151.9 mg/L,占总效价的59.90%.     

超细氧化镁的直接沉淀法制备及其表征

通过正交实验法,研究了直接沉淀法合成超细氧化镁的诸因素对粒径和收率的影响,得到了最佳的工艺条件：反应物MgCl2浓度为1.2 mol/L,NH3·H2O浓度为0.2 mol/L,反应温度为45 ℃,反应配比MgCl2∶NH3·H2O为1∶10,表面活性剂量1.5‰,反应时间为25 min.用X-射线衍射、红外光谱、扫描电镜和粒度分析等对最佳条件下制得的MgO进行了表征.结果表明：该法得到的氧化镁分散性好、收率较高（60%）、平均粒径小（330 nm左右）且粒度分布均匀.     

猪肉盐溶蛋白提取条件的优化研究

为提高猪肉盐溶蛋白的提取率,分别对NaCl溶液浓度、MgCl2溶液浓度、NaH2PO4添加量和pH值4个因素进行单因素实验和正交试验.利用考马斯亮蓝法测定猪肉盐溶液中的蛋白含量.按L9(3)4正交表进行正交试验,利用SPSS16.0软件进行正交分析,结果表明,猪肉盐溶蛋白的优化提取条件为:NaCl溶液浓度0.8 mol/L,MgCl2溶液浓度0.04 mol/L,NaH2PO4添加量4 g/kg,pH值7.0.     

Taguchi法优化Bacillus amyloliquefaciens fmb50产surfactin工业发酵培养基

采用田口方法（Taguchi method）对影响surfactin生产的各因素进行筛选,并对显著因子的水平进行优化后得出最佳配比。统计分析结果表明：玉米粉、硝酸铵和O₄^3-对其产量影响显著。获得高产工业发酵培养基的配方为：玉米粉35g/L,硝酸铵为15g/L,尿素6g/L,O₄^3- 20mmol/L,Mn²⁺ 0.5mmol/L,Mg²⁺ 0.1mmol/L,Cu²⁺ 12.8μmol/L,Fe²⁺ 1μmol/L,Ca²⁺ 0.5μmol/L。此培养基surfactin产量达2294.28mg/L,较原有Landy培养基产量提高15%,生产成本降低40%,为实现surfactin的工业化生产提供了基础。     

钼酸铵溶液镁盐沉淀法除砷的热力学分析

湿法处理镍钼矿所得钼酸铵溶液砷含量较高.针对镁盐沉淀法除砷的工艺,进行热力学分析.根据同时平衡原理和质量守恒定律,进而绘制在25℃时Mg-NH4-As-H2O系热力学平衡图,并考察工艺参数对除砷的影响.研究结果表明:溶液中总氨浓度的升高及镁盐用量增大,平衡时砷含量降低.当钼酸铵溶液中[N]r=5mol/L,[As]r=0.1mol/L,[Mg]T=0.12mol/L时,整个pH范围存在4个平衡固相的稳定区即MgHAsO4稳定区(4.0＜pH＜6.0),MgNH4AsO4稳定区(6.0＜pH＜9.5),MgNH4AsO4和Mg(OH)2稳定区(9.5＜pH＜11.7)及Mg(OH)2稳定区(pH＞11.7):当溶液pH为9时,砷质量浓度可除至2×10-6g/L,溶液中残留镁浓度为0.02mol/L.     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

土壤中有效钾的快速提取研究

比较了Mehlich3法、1mol/L NH4Ac法、2mol/L冷HNO3法、0.05mol/L HCl 0.0125mol/L H2SO4法等四种土壤有效钾的快速提取方法。对土壤中有效钾的提取率而言,1mol/L NH4Ac法与Mehlich3法基本一致,0.05mol/L HCl 0.0125mol/L H2SO4法则偏低,而2mol/L冷HNO3法则偏高。综合分析认为1mol/LNH4Ac法是比较方便可行。进一步优化了1mol/L NH4Ac法的实验条件。在最佳实验条件下,测定了五个实际土样,所得结果满意;标准加入法回收试验表明,加入回收率为93.8%~96.9%,相对标准偏差为2.6%.     

酿酒酵母SC408转化3-甲硫基丙醇条件的研究

研究了一株产3-甲硫基丙醇的产香酵母菌Saccharomyces cerevisiae SC408的培养基组分和转化条件.均匀试验设计优化后的培养基组分为:氨基酸4.0 g/L、KH2PO48.0 g/L、K2HPO46.0g/L、MgCl20.01 g/L、FeCl20.02 g/L、ZnSO40.03 g/L、酵母膏0.8 g/L、葡萄糖30.0 g/L和NaCl 2.0g/L;接种量和培养条件对3-甲硫基丙醇产生一定影响,在摇床培养30℃,转速200 r/min,SC408发酵132 h,其3-甲硫基丙醇产量达到1.6 g/L,氨基酸的摩尔转化率约为72%.     

兔抗小鼠IgG-HRP酶标抗体的制备及应用

制备并纯化小鼠腹水IgG,鉴定IgG纯度;免疫新西兰大白兔制备兔抗小鼠IgG的抗血清并纯化血清IgG;用改良过碘酸钠法制备兔抗小鼠IgG酶标抗体,对其进行鉴定,并与市场上的同类产品对比。结果,纯化的小鼠腹水IgG,其纯度约为80%—90%;免疫新西兰大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价在1：32以上;用改良过碘酸钠法制备酶标兔抗小鼠IgG酶标结合物与市场同类产品相比质量优良,特异性较强,亲和力较好,并在较长时间内效价稳定。结果表明,制备的小鼠IgG抗血清和酶标抗体,适合于小鼠的血清学检测体系的建立。     

络合滴定法测定钛酸钡中的钡和钛

本文用络合滴定法对钛酸钡中的钡和钛分别进行了测定。样品用盐酸溶解后,首先加入稀硫酸沉淀钡为硫酸钡,而后把其溶于EDTA-碱性溶液中,用Mg~(2+)滴定过量的EDTA,可求出钡的含量;把沉淀出钡后的滤液调pH到5.5,加入过量EDTA,以二甲酚橙为指示剂,用硝酸铅溶液返滴过量EDTA,可求得钛的含量。该法与传统测试方法相比,有快速、简便、准确的特点。     

蛇足石杉的组织培养初探

针对蛇足石杉资源分散,资源更新周期长,难以大规模开采的情况,初步探讨了蛇足石杉的组织培养技术.以蛇足石杉茎尖为外植体,分别在1/2MS+0.05 μmol/L IBA+1.4 μmol/L KT+2 mg/L谷氨酰胺、MS+0.05 μmol/L IBA+1.4 μmol/L KT+2 mg/L谷氨酰胺、1/2MS+2 mg/L谷氨酰胺/无激素、MS+2 mg/L谷氨酰胺/无激素等4种培养基中培养.结果显示:较为适宜的初代培养基为2号培养基,即MS+0.05 μmol/L IBA+1.4μ mol/L KT+2 mg/L谷氨酰胺.在组织培养工作中,污染问题比较严重,本实验中,采用了以下2种方法对外植体进行消毒：（1）70%酒精浸泡1 min→5% NaOCl浸泡1 min→7%H₂O₂浸泡10 min;（2）0.1%升汞液灭菌3’ →无菌水冲洗5次.结果显示第2种方法比较理想.