乳糖酶水解乳清合成低聚半乳糖

利用乳糖酶转移半乳糖苷的作用 ,以高浓度的乳清为原料 ,研究了温度、p H、乳糖浓度、酶浓度及反应时间对 GOS(低聚半乳糖 )合成的影响。通过实验发现 ,温度、p H、反应时间对 GOS合成影响不明显。酶浓度和乳糖初始浓度对产生有一定的影响。在优化条件下 ,GOS占总糖的 2 3.9%。     

碳苷型半乳糖甘油单脂类似物的合成

以五乙酰基保护的D-半乳糖为初始物,经立体选择性烯丙基化、碱性高锰酸钾氧化、选择性酯化及水合肼脱保护,以简便有效的方法,合成了一类新型碳苷半乳糖甘油单脂天然产物类似物——1-O-酰基-2-羟基-3-α-D-吡喃半乳糖基丙脂。     

门冬氨酸（537）—β—半乳糖苷酶的纯化

本文用硫酸铵分部沉淀,DEAE-BioGel A柱层析及FPLC Superose 12纯化了定位突变的E.Coli门冬氨酸(537)-β-半乳糖苷酶,总纯化倍数为167,酶活力回收55％,经Phast-Gel电泳鉴定为均一制剂,它的分子量及分子形式皆同天然E.Coli β-半乳糖苷酶。     

半乳糖-聚乙二醇-聚-L-赖氨酸共聚物的制备与分析

 将相对分子质量为4 000的聚乙二醇中活性较弱的羟基转化为氨基,利用乳糖分子中含有半缩醛结构,可与双端氨基聚乙二醇（AT-PEG）分子中的伯氨基形成Schiff 碱,然后在氰基硼氢化钠作用下选择性还原为稳定的C-N 单键,使半乳糖连接在PEG的一个氨基上,合成半乳糖-单端氨基聚乙二醇（Gal-PEG-NH₂）,以Gal-PEG-NH₂为大分子引发剂,引发N^ε-苄氧羰基-L- 赖氨酸-N-羧酸酐［Lys(Z) NCA］开环聚合制备一系列半乳-糖-聚乙二醇-聚-L-赖氨酸（PLL-PEG-Gal）嵌段共聚物,通过调节Lys(Z) NCA和 Gal-PEG-NH₂的摩尔比例（［A］/［I］）可控制聚合物的相对分子质量。利用IR、¹³C-NMR、UV等方法进行共聚物结构分析,并对其接糖率进行了分析。结果表明,乳糖与双端氨基聚乙二醇反应生成的带有一侧氨基的聚乙二醇能引发Lys(Z) NCA 聚合生成Gal-PEG-PLL,其中半乳糖的接入率为8.3%。随着［A］/［I］的增加,共聚物的相对分子质量变大。     

嗜热芽孢杆菌β—半乳糖苷酸发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酸的条件,应用均匀设计优化发酵培养基组成,结果为：服糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ＰＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍｉｎ和１０％接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酸酶活力达１３．２Ｕ／ｍＬ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

转糖基β-半乳糖苷酶产生菌筛选和鉴定及酶催化生成低聚半乳糖

通过水解活性和转糖基活性筛选, 从实验室97株保存菌种中获得1株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,克隆并序列分析了该菌株16SrDNA基因片断,GenBank收录号为DQ267829. 综合其形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析结果, 将其鉴定为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）2-37-4-1. 确定了该菌株β-半乳糖苷酶产酶培养基的碳源为乳糖1%,氮源为蛋白胨0.5%和酵母膏0.5%,培养条件为37℃摇床培养18?h;碳源实验证明,该菌株β 半乳糖苷酶产生为乳糖诱导型.利用薄层层析技术研究了pH值、乳糖底物浓度、反应温度和反应时间对该菌株β-半乳糖苷酶以乳糖为底物转糖基合成低聚半乳糖的影响, 确定最适反应条件为pH7.5、50mmol/L（磷酸缓冲液）配制的40%乳糖溶液, 55℃反应24h.转糖基反应产物高压液相色谱分析其组成为低聚半乳糖25.68%, 双糖（包括乳糖和转移二糖）33.02%, 葡萄糖26.37%和半乳糖14.92%.     

半乳糖寡糖的生物活性

对利用固定化β－半乳糖苷酶连续合成的半乳糖寡糖进行了有关生物活性的研究。通过双歧杆蓖培养实验和动物试验证实了半乳糖寡糖具有高效，专一地促进双歧杆菌生长，改善动物肠道内菌群分布，促进钙的吸收，提高食物的转化率，降低血清胆固醇含量及盲肠内ｐＨ等生物活性。     

固定化酶催化合成半乳糖寡糖

以壳聚糖固定化米曲霉β－半乳糖苷酶，连续催化合成半乳糖寡糖（ＧＯＳ），在填充床固定化酶反应器中，研究底物浓度、ｐＨ，反应温度和停留时间对ＧＯＳ连续合成的影响，最佳反应条件为：底物浓度４００ｇ／Ｌ，反应温度５０℃，ｐＨ５．８，停留时间３５ｍｉｎ，产物的最高得率为６２％。     

半乳糖氧化酶的生物电化学特性

采用循环伏安法对半乳糖氧化酶(GAO)进行了生物电化学特性的研究。实验结果表明,由于半乳糖氧化酶的酶活性中心深埋在酶内部,所以该酶在铂电极上的直接电化学行为较难观察到,而二茂铁甲醇作为介体能明显地改善酶活性中心的电子传递,加快电子传递速率。且测定了半乳糖氧化酶与二茂铁甲醇之间的反应速度常数Ks为1.2×10~5L·mol~(-1)·s~(-1)。     

熊猫豆β—D—半乳糖苷酶的基本性质研究

经硫酸铵分级分离,DEAE－cellulose 52,CM-cellulose 52和Sephacryl S 100HR凝胶过滤层析方法从熊猫豆黄化苗中获得了一种β－D－半乳糖苷酶,活性收率为8．0％,纯化倍数为245。经PAGE显示单一蛋白着色带,用IEF－PAGE测定其PI为4．1。SES－PAGE显示2条蛋白着色带,其相应分子量分别为40kD和29kD.Sephadex G200层析法测得表观分子量为68kD,以ONPG和PNPG为底物测得该酶的表观Km分别为3.02mmol/L和0．33mmol/L。最适pH为4．2,最适温度为52℃。以乳糖为底物测得表观Km为43mmol/L.HgCI2,DTNB,NEMI,半乳糖和乳糖对酶表现出不同的抑制作用。对某些金属离子和化学修饰剂对酶活性的影响也进行了探讨。     

半乳糖化棕榈酰壳聚糖的制备

目的：制备新型的壳聚糖衍生物——半乳糖化棕榈酰壳聚糖。方法：以壳聚糖为原料,甲磺酸条件下与棕榈酰氯反应得两亲性棕榈酰壳聚糖,然后通过与活化乳糖酸反应制备半乳糖化棕榈酰壳聚糖,并应用FT-IR、H1-NMR对其结构进行表征,通过芘荧光探针法测定其临界胶束浓度。结果：半乳糖化棕榈酰壳聚糖的FT-IR及H1-NMR图谱均出现了棕榈酰基的特征峰,且棕榈酰基的取代度为1.8,其临界胶束浓度为8.96μg/mL。结论：制备了新型的半乳糖化棕榈酰壳聚糖,其具有较好的溶解性能和较低的临界胶束浓度,有望作为难溶性药物的主动靶向纳米聚合物胶束载体。     

葡聚糖凝胶过滤层析分离低聚半乳糖

采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25柱对低聚半乳糖混合物进行了分离提纯,确定了适宜的洗脱流速和温度。结果表明,操作温度70℃,洗脱流速20mL/h,凝胶柱90cm×1cm,当进料量由1mL增至10mL,低聚半乳糖（GOS,三糖及三糖以上的低聚糖组分）的产量提高了4.62倍,整个洗脱过程只需4.1h,可以有效地去除葡萄糖,得到纯度为85.03%的含少量乳糖的GOS混合物。此混合物经过二次上柱后,分离效果明显优于一次上柱,得到的GOS质量分数达89.39%。     

发酵乳杆菌β-半乳糖苷酶转糖基活性研究

从传统发酵乳制品中筛选到1株转糖基活性较高的乳杆菌,经16S rDNA菌种鉴定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum, EU621851）K4。以乳糖为底物,研究β-半乳糖苷酶粗酶液在不同pH、乳糖浓度、反应温度和时间的转糖基活性。结果表明在pH 5.5、乳糖20%、温度50℃条件下反应48h,转糖基活性最高,能生成多种低聚半乳糖。研究发现在低乳糖含量（5%）和pH 5～7范围内都具有明显的转糖基活性。用牛奶为原料进行转糖基能力测定,结果该酶既能降低牛乳中的乳糖含量,又能生成低聚半乳糖。因此,菌株Lb. fermentum K4在乳制品发酵中具有潜在的应用价值。     

用番茄半乳糖苷酶使红细胞B型向O型的转化

用纯番茄α－Ｄ－半乳糖苷酶，作用于Ｂ型红细胞及其影泡和水溶性血型物质，均能使它们的Ｂ抗原转化为Ｈ抗原专一性，定量地释放出Ｄ－半乳糖，表明Ｂ型红细胞的血型抗原均匀分布于细胞膜外表面，且全部能被酶转化，番茄α－Ｄ－半乳糖苷酶能将人Ｂ型红细胞转换成Ｏ型红细胞。探索了酶转化完整Ｂ型红细胞的条件，通过对转化前后红细胞渗透脆性，膜乙酰胆碱酯酶活性、高铁血红蛋白浓度、三磷酸腺苷及２，３－二磷酸甘油酸含量的测定，     

一个新的脂水两性的胆甾半乳糖苷的设计与合成

设计并合成了一个新的脂水两性胆甾半乳糖苷偶联物T,该化合物可用作脂质体配体,提高阳离子脂质体的肝靶向性.目标化合物T的合成方法如下：以胆甾烯对甲苯磺酸酯1为起始原料,与己二醇作用后得醇2,2经甲烷磺酰化、碘代制得碘代物4,4随后与2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-巯基-β-D吡喃半乳糖[ST5HZ]5成硫醚得到糖苷6,[STBZ]再经甲醇钠处理,脱去乙酰基制得目标物T,合成的目标化合物及中间体均经1HNMR、IR和MS确证结构.     

产转糖基β半乳糖苷酶菌株F3的鉴定 产酶条件及转糖基活性研究

菌株F3从土壤中筛选得到,具有产生转糖基β-半乳糖苷酶(β-galactosidase) 的特性。根据形态观察及18S rDNA序列分析,菌株F3被鉴定为扩张青霉(Penicillum expansum)。通过单因子试验和正交试验,对菌株F3产生转糖基β-半乳糖苷酶的培养基组成及发酵条件进行了优化。优化后的培养基组成为葡萄糖2%、酵母粉1%、蛋白胨1.5%、氯化钠0.3%。在初始pH 6.0,28?℃培养40?h时,其产酶量为2?245.2?U/L, 比优化前提高约3倍。菌株F3产生的转糖基β 半乳糖苷酶以pH 4.5缓冲液配制的30%乳糖为底物,50?℃反应24?h,低聚半乳糖产量为30.6%,其中80%以上为三糖。
     

短双歧杆菌（Bifidobacterium breve 203）α—D—半乳糖？…

研究发现２５株所试肠道细菌中只有６株双歧杆菌可以利用棉子糖良好生长,并且在棉子糖的诱导下产生α－Ｄ－半乳糖苷酶。９种不同糖中,Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒ－ｉｕｍｂｒｅｖｅ２０３可以利用葡萄糖,半乳糖、果糖、麦芽、糖乳糖、蜜二糖、棉子糖良好生长,但只有蜜二糖和棉子糖诱导Ｄ半乳糖苷酶的产生。１０ｍｍｏｌ／Ｌdisplay structure     

生物活性物质--低聚半乳糖

介绍了生物活性物质-低聚半乳糖的生理功能及生产方法,并对其在食品工业的应用与发展前景进行了展望.     

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板，经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase，PG)基因全长cDNA，将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG．此cDNA长1183bp，包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架，与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99．3％，相应的氨基酸的同源性为98．5％．     

熊果酸的4-氯半乳糖衍生物的合成

以a-D-三乙酰基-1-溴-4-氯半乳糖为原料,经Koenigs-Knorr反应、酯化反应,得到3-O-β-D-三乙酰基-4'-氯半乳糖熊果酸乙酯(UA2)、3-羟基-28-O-β-D-三乙酰基-4"-氯半乳糖熊果酸酯(UA5)和3-O-β-D-三乙酰基-4'-氯半乳糖熊果酸-28-O-β-D-三乙酰基-4"-氯半乳糖酯(UA8);研究了熊果酸衍生物脱乙酰基的条件,实验表明.在稀盐酸条件下得到4-氯半乳糖的2位保留乙酰摹的产物,在固体氢氧化钠条件下得到全脱乙酰基的产物;共合成了9个熊果酸的4-氯半乳糖衍生物,所有目标化合物均为新化合物,其结构经NMR得以确认.