人血小板多态性抗原HPA-1a/HPA-1b在CHO细胞中的表达及功能研究

为了在体外研究HPA-1抗原的多态性,同时建立一种更简便灵敏的检测抗HPA-1同种(异型)抗体的方法,将含有HPA-1a和HPA-1b的DNA质粒分别转染CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)并获得稳定表达β3HPA-1a和β3HPA-1b的细胞株.流式细胞分析结果表明,CHO细胞结合抗HPA-1a同种(异型)抗体的能力与细胞表面β3整合素表达量直接相关.同时,针对HPA-1a表位的单克隆抗体SZ21仅能抑制CHOβ3HPA-1a细胞的粘附,对CHOβ3HPA-1b细胞却没有影响.抗HPA-1a参照血清能阻断CHOβ3HPA-1a细胞的粘附,但对CHOβ3HPA-1b细胞却影响甚微.结果表明,CHO细胞模型可以成功地用来表达并研究HPA-1a的多态性及其抗原特性,同时可以作为用于临床检测抗HPA-1a同种(异型)抗体的一种替代方法.     

CHO-HPA-1a细胞快速检测人血小板同种(异型)抗体方法的建立

应用蛋白印迹(WB)、悬浮细胞免疫荧光流式细胞分析(SIFT)、单抗分析血小板抗体检测(MAIPA)以及限制性内切酶片段长度分析对新生儿血小板减少患儿母体作基因分型和血清分型比较研究.从两例新生儿血小板减少症患儿母亲的血清中检测到了抗β3抗体.CHO-SIFT方法的敏感性和MAIPA分析相似.和间接免疫荧光或MAIPA分析相比,WB分析法敏感性稍低,可能是SDS使HPA-1a抗原决定簇发生了改变.以较温和条件对CHO细胞进行固定时,不但细胞表面的HPA-1a抗原表位未受影响,而且细胞的保存时间被大大的延长.这些结果表明,作为分型血小板的替代物,固定化的细胞可能更适合于一般妇幼保健门诊对大量血清样品进行筛查.研究结果表明,表达有重组β3整合素的CHO细胞可以用来检测母体血清中的抗HPA-1a同种(异型)抗体.     

β－actin启动子控制的人尿激酶原基因在CHO细胞中的表达

本文将人尿激酶原（ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ基因插入到含β－肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）启动子的表达载体中，通过脂质体转化到中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞内，经筛选得到稳定表达ｐｒｏ－ＵＫ基因的细胞株，用ＥＬＩＳＡ检测到细胞培养液中表达量为２～３ｍｇ／Ｌ。经过抗尿激酶（ＵＫ）的免疫亲和柱初步纯化细胞培养上清后得到表达产物。同时，在培养液中加入佛波酯ＰＭＡ后，发现它对目的基因的表达有促进作用。