流式细胞仪检测技术在食源性致病菌检测中的应用

流式细胞术是一种灵敏度高,耗时短,程序简便的定量细胞分析分选方法,广泛应用于微生物检测、环境监测、临床医学等领域,尤其在微生物检测中表现突出.流式细胞术正逐步应用于食源性致病菌的检测,研究并介绍了流式细胞术在几种食源性致病菌检测中的应用,该方法具有广阔的发展前景.     

流式细胞术在植物细胞检测中的主要问题及对策

流式细胞仪(FACs)是对细胞进行自动分析和分选的装置。由于其应用范围广、灵敏度高、检测速度快,近年来,FACs在植物中的运用日益广泛,如植物细胞倍体分析、植物细胞C值研究、植物染色体分析和分选等方面。由于植物的细胞特性,与动物细胞相比,其在样品前处理及上机检测中都显示出多样性与复杂性。在实践的基础上总结了每个实验环节出现和存在的问题,并提出了相应的解决方案,以期为流式细胞术在植物尤其是木本植物细胞中的检测提供参考。     

基于CRISPR/Cas9技术建立敲除Plac9基因的人胚肾细胞株

目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术和流式细胞术相结合,获得可编辑Plac9基因敲除的人胚肾细胞株(293T).方法:根据Plac9外显子设计了4个sgRNAs(S1,S2,S3,S4),分别将其与PX458载体连接,构建了PX458-S1(S2/S3/S4)载体.通过转染试剂lipo2000将表达载体分别转染至293T细胞中,并以流式细胞术对带绿色荧光蛋白标记的细胞进行单细胞分选,分选后的细胞培养一段时间后,用基因组测序和错配酶酶切进行筛选.从筛选好的细胞中提取蛋白,进行Western Blot检测敲除效率.结果:采用CRISPR/Cas9和流式细胞术结合技术成功构建了Plac9蛋白表达缺失的人胚肾细胞株.结论:该方法简便快捷、效率高,可广泛地用于编辑各种细胞和细胞功能研究.     

分离培养适用于染色体分选的新生小鼠皮肤成纤维细胞

采用酶消化法分离培养新生小鼠皮肤成纤维细胞(mouse skin fibroblasts,MSFs).通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flow cytometry,FCM),深入探讨不同培养基和血清浓度对MSFs增殖率和同步化效率的影响.结果表明:酶消化法能快速获取大量健康、高活力的MSFs;在杜氏培养液(DMEM)传代培养条件下,P2代MSFs具有高增殖率和有丝分裂指数;地美可辛工作浓度为0.05μg/mL时,阻断同步化获取M期MSFs的效率最佳.研究结果为流式细胞术分选染色体提供实验材料和研究基础.     

废旧塑料薄膜混合物风选参数研究

针对废旧塑料薄膜的特性,对气流场中塑料颗粒进行受力分析,得到了塑料混合物的运动规律,建立了其在气流场中水平和竖直位移运动方程;运用MATLAB工具研究了风速气流倾角参数对运动轨迹的影响,确定了塑料混合物分选的最佳风速为10m/s,最佳气流倾角为10°,为塑料复合分选中的振动分选奠定了基础.     

3种蓑藓属(Macromitrium)植物DNA C-值测定——兼论苔藓DNA C-值研究的生物学意义

分别以小立碗藓(Physcomitrella patens)和水稻(日本晴亚种)(Oryza sativa spp.japonica)为标样,用流式细胞术分别测定了中华蓑藓(Macromirium cavaleriei)、钝叶蓑藓(M.japonicum)和缺齿蓑藓(M.gymnostomum)3种藓类植物的DNA C-值,由此建立了应用流式细胞术测定蓑藓属植物DNA C-值的方法,讨论了影响藓类植物DNA C-值测定结果的因素.最后讨论了苔藓植物DNA C-值变异式样、系统发育和分类学意义,以及今后有关藓类植物DNA C-值研究中值得关注的几个方向.     

利用CRISPR/Cas9技术构建GLUT4基因敲减的A549细胞系

目的:为探究GLUT4基因在肺癌细胞中的功能及影响.方法:在GLUT4外显子上设计了4个sgRNAs(S1、S2、S3、S4),分别与PX458载体连接形成重组表达载体后,借助转染试剂lipo3000将表达载体转入生长态势良好的A549细胞中,再利用流式细胞仪分选技术对转入重组载体发出绿色荧光的细胞进行单细胞分选.利用基因组测序筛选突变株,提取突变株的RNA和蛋白,进行Real-time PCR及Western Blot检测敲减效率,并利用激光共聚焦显微术检测突变株葡萄糖摄取量的变化.结果:突变株细胞在mRNA及蛋白水平均表现出GLUT4基因敲减效果,并在葡萄糖摄取上表现出明显的降低趋势.结论:利用CRISPR/Cas9系统成功建立了GLUT4基因敲减A549细胞系.     

电动汽车锂离子动力电池分选方法研究

为了改善电动汽车电池组的不一致性,提高电池组的可用功率和容量利用率,以电池的不一致性机理分析为基础,分别对电池进行了传统分选、主因子分选和总因子分选.单体试验计算结果表明,总因子分选方法是最优的.接着在总因子分选结果的基础上运用模糊C均值聚类算法对电池进行了动态特性分选,试验结果表明:此分选方法能有效地改善电池组的不一致性.     

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响张利华，李方勇，王耀发（华东师范大学河口海岸国家重点实验室上海２０００６２）流式细胞术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是７０年代末发展起来的一种快速高效的单细胞分析及分选的新技术。它在细胞生物学上的一个...     

基于绝对节点坐标的废塑料薄膜振动特性研究

将废塑料薄膜进行分选回收是目前高效节能的垃圾处理方式,废旧塑料薄膜的振动特性会直接影响分选的精度.基于绝对节点坐标法对废塑料薄膜进行了振动特性分析,基于薄板单元模型理论提出了一种三维柔性薄膜单元模型,引入Neo-Hookean本构模型求解单元的质量矩阵和刚度矩阵,建立废塑料薄膜动力学方程表达式.利用MATLAB软件对薄...     

基于平面变换的雷达脉冲信号分选算法

通过平面变换技术将雷达脉冲映射成平面矩阵,在分析周期信号在平面矩阵中重复特性的基础上,提出了一种周期性雷达信号分选的新方法--矩阵匹配法.针对以前搜索算法门限确定困难以及当信号密集且周期性信号数最较少时无法分选的缺点,该算法采用通过检索相似度序列的方法,实现自动分析最小显示周期并完成分选工作.仿真表明陔方法对周期信号具有很高的分选准确度,对PRI随机抖动雷达也具有一定分选能力.该算法检索速度快、计算简单且易于实现,具有广泛的工程应用前景.     

α-Galcer对小鼠NKT细胞超微结构的影响

本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇(α-Galeer)诱导下,小鼠NKT细胞超微结构的改变.分离小鼠脾脏单个核细胞,MTY法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性,流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞,并用透射电镜观察NKT细胞超微结构.研究发现在24 h,50-100 ng/mL的α-Galcer作用下,实验组NKT细胞的增殖活性显著高于对照组(P<0.05).流式细胞术结果显示实验组活化NKT细胞百分率明显高于对照组(P<0.05).电子显微镜观察显示,活化的NKT细胞呈典型细胞活化改变,凋亡的NKT细胞,核固缩,致密形成新月小体,核膜破裂,凋亡小体形成.说明α-Galcer可促使小鼠NKT细胞活化,且活化的NKT细胞产生大量分泌小泡.     

高山被孢霉高产ARA的原生质体融合子筛选

利用原生质体融合技术,对两株单一优良性状差异显著的高山被孢霉菌株F24和G12进行原生质体融合,再采用双灭活或流式细胞分选法筛选优良性状相结合的高产菌株,对双亲菌株原生质体的制备、融合和再生的相关条件进行了研究,并对双灭活和流式细胞分选的具体方法进行了研究.经研究发现,采用培养16 h的高山被孢霉菌丝于混合酶液(蜗牛酶15.0 mg·m L~(-1)、纤维素酶6.0 mg·m L~(-1)、溶菌酶0.5 mg·m L~(-1)和几丁质酶0.2 mg·m L~(-1))中30℃酶解4 h为原生质体制备的最佳条件.并探究得出两种融合子筛选方法的最佳方案,成功筛选出融合子,进一步再生培养验证ARA产量,最终挑选出一株ARA产量达6.32 g·L~(-1)的高产菌株.以前尚未发现此方法在高山被孢霉上的应用,为高山被孢霉育种提供了一种有效的手段.     

图书推介

正流式细胞术杜立颖,冯仁青编著。北京大学出版社,2014年1月第1版,定价:58.00元。流式细胞术是现代生物学和医学的常用技术,一经发明就被逐渐应用到细胞生物学、免疫学、发育生物学、生理学、植物学、分子生物学等基础研究,医学的临床诊断和治疗,以及农林畜牧养殖、药品检验、食品检验、环境检测等领域。作者结合10多年流式经验,注重理论和实际、基础和应用相结合,重点介绍流式细胞术的原理、技术及方法,及时跟踪展现了其最新成果和发展趋势。书中列举了大量有代表性的应用实例,详细描述了其操作过程、实验结果及详尽的     

液固流化床粗煤泥分选机理与应用研究

粗煤泥分选问题成为影响精煤产率提高的主要瓶颈.液固流化床分选机的分选原理能够吻合粗煤泥本身的粒度范围窄、需要低密度分选的特点,是一种结构简单、分选效果较好的新技术.本文分析了我国粗煤泥分选的现状及存在的问题,指出TBS干扰床分选机处理粗煤泥的优势.阐述了颗粒特性、流体性质等对分选效果的影响,提出了在试验过程中加大对上升...     

应用流式细胞分选技术分离人外周血原代单核细胞

巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,具有免疫调节、抗感染和抗肿瘤等重要功能。快速、有效地分离得到高纯度的人外周血单核细胞,是研究巨噬细胞功能的前提。本文利用细胞大小及胞内颗粒度属性对单核细胞与其他白细胞组分进行区分,通过流式细胞分选,获得了较高纯度单核细胞。单核细胞表面标志物CD14染色分析显示,该方法对单核细胞的分选效率达85%以上。进一步实验证明,分选得到的单核细胞能够在体外正常分化为巨噬细胞。     

气流式超微粉碎条件对板栗超微粉粒度影响

应用气流式粉碎机制备超微板栗粉,激光衍射粒度分析仪测定其粒度,根据设计单因素试验确定了工质压力、分选频率、进料速度三因素为影响板栗超微粉粒度的主要因素.采用三因素二次回归正交旋转组合试验设计,研究和建立了板栗超微粉粒度随工质压力、分选频率、进料速度变化的标准回归模型,确定了板栗气流式超微粉碎最佳工艺:进料粒度为0.10...     

主动脉动气流分选机理及流场模拟

通过分析不同雷诺数流型下颗粒运动阻力系数的差异,考虑主动脉动气流流场中颗粒运动所受到的附加质量力作用,分别得出斯托克斯和牛顿2种流体的颗粒在主动脉动气流场运动的动力学方程.对直径和密度不同,但空气动力学特性相同的等沉球形颗粒,进行动力学方程的计算机数值模拟,并优化动力学模型参数.在此基础上,应用颗粒高速动态分析系统对示踪颗粒的运动规律进行分析,研究主动脉动气流分选优于传统气流分选的机理.研究结果表明,数值模拟与示踪颗粒的实验室分选试验结果具有很好的一致性,低密度颗粒速度幅值与均值相对误差小于8%,高密度颗粒速度幅值与均值相对误差小于5%.     

旋转磁流体分选法中的伯努利方程研究

立足于旋转磁流体的非磁性矿物分选法,从磁流体微元体模型受力状态出发,对旋转磁流体运动状态进行了分析,以流体力学、铁磁流体力学、离心力学等理论基础为手段,建立旋转磁流体伯努利方程,为旋转磁流体分选法的理论完善和工业应用提供支持.