家蚕促咽侧体素受体基因克隆及发育表达

文章克隆得到家蚕(Bombyx mori)神经肽促咽侧体素受体基因(Allatotropin receptor,BommoATR),开放阅读框全长为1 254 bp,编码416个氨基酸.Bommo-ATR氨基酸序列的二级结构预测为7次穿膜蛋白,符合GPCR家族成员的典型特征.实时荧光定量PCR结果表明,家蚕脑-咽下神经节复合体中的ATR mRNA在5龄幼虫期表达量最高,其次为蛹后期,蛹前期和成虫阶段表达量最低.其中5龄幼虫第2天表达量最高,1～5 d持续维持较高的表达水平,这可能与保幼激素的合成有关.     

脂联素受体与2型糖尿病

脂联素（Adiponectin）是脂肪组织分泌的一种脂肪细胞因子,具有增加脂肪酸氧化、提高葡萄糖摄取量、改善胰岛素抵抗、调控血管内皮的炎症反应等作用。正常人血浆中脂联素浓度与体质量指数（BMI）、腰臀比、空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯、尿酸和瘦素呈负相关。脂联素还与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病和心血管疾病密切相关。     

牡荆素与DNA相互作用的机理研究

应用荧光探针、紫外光谱技术和黏度法研究了牡荆素和DNA分子间的相互作用.研究结果表明,在pH为7.4的Tris-HCl缓冲体系中,牡荆素可将盐酸小檗碱从DNA双螺旋中挤出,导致其荧光猝灭.根据热力学参数确定了牡荆素与DNA主要以氢键或范德华作用力结合,25℃和40℃两个不同温度下下牡荆素与DNA之间的结合常数分别为1.156×105和1.885×104 L·mol-1,结合位点数分别为1.3363和1.0615;黏度实验进一步证明牡荆素是以嵌入结合的方式与DNA结合.     

VDAC3与ABA受体蛋白相互作用的验证以及初步研究

酵母双杂交技术在拟南芥cDNA文库中筛选得到了与ABA受体蛋白RCAR1,RCAR3均有相互作用的蛋白质VDAC3,并已获得VDAC3基因的全长.VDAC3蛋白包含有3个结构域,分别为Porin3结构域,DUF3442结构域和SEG片段,现根据结构域分布,将VDAC3截短为包含DUF3442的VDAC3N以及包含SEG的VDAC3C两段.将VDAC3全长以及分别截短的169个氨基酸(VDAC3N)及105个氨基酸(VDAC3C)的片段进行酵母转化实验,与RCAR1或RCAR3共同转化后,VDAC3,VDAC3N的共转酵母能够在缺陷型培养基上生长,并且使X-Gal显色为蓝色,而VDAC3C则不能.这验证了全长的VDAC3与RCAR1,RCAR3的存在相互作用,并发现决定VDAC3蛋白与RCAR1,RCAR3是相互作用的结构域位于N端的DUF3442结构域.     

液相色谱法研究有机溶质与醋酸纤维素膜表面的相互作用

用醋酸纤维素(CA)反渗透膜作为液相色谱固定相,溶剂水作为流动相,模拟反渗透分离过程中表面的平衡效应,测出了一些不同有机溶质在醋酸纤维素(CA)膜表面与水溶液间的平衡分配系数k。结果表明,大多数酸性小于水的有机溶质(醇、醛、酮)的k值小于水的k值。证明这些溶质在CA膜表面是负吸附,与优先吸附-毛细孔流理论的推断一致,与Sourirajan的色谱实验结果不同。讨论了不同类型有机溶质与CA表面的相互作用特性,较好地解释了CA膜对这些溶质的分离效果,初步探讨了溶质与膜表面的相互作用与反渗透分离率之间的关系。     

2型糖尿病患者检测血清硫氧还蛋白相互作用蛋白与唾液酸的临床价值

目的探讨血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin interacting protein,TXNIP)诊断与其他血液学指标联合诊断2型糖尿病的价值及临床意义.方法回顾性分析2型糖尿病患者(270例)与同时期健康体检者(73例)血清TXNIP水平(ELISA法)、一般临床资料和相关血液学指标.结果 2型糖尿病组血清TXNIP与唾液酸(SA)水平显著高于健康对照组(P0.01).ROC曲线分析结果显示:血清TXNIP与SA单独诊断2型糖尿病的线下面积AUC分别为0.606(敏感度0.815,特异性0.438,约登指数0.253,P=0.003)与0.646(敏感度0.632,特异性0.616,约登指数0.248,P=0.000).TXNIP联合SA、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、收缩压等联合诊断2型糖尿病的线下面积AUC=0.749(敏感度0.494,特异性0.903,约登指数0.397),差异具有统计学意义(P=0.000).结论血清TXNIP检测可对2型糖尿病诊断提供一定的参考价值,同时为预防和治疗2型糖尿病的分子生物学靶点提供了方向.     

染料木素及其钐配合物与DNA的相互作用

在合成染料木素钐（Ⅲ）配合物的基础上，以荧光光谱法、紫外吸收光谱法和粘度法研究了染料木素及其钐（Ⅲ）配合物与DNA的作用．结果发现，该配合物的荧光强度在加入DNA后增大，而染料木素则降低；配合物使DNA-EB体系的荧光强度降低要明显强于染料木素；配合物相较于配体与DNA相互作用之后，其紫外光谱的减色效应以及红移现象均强于配体；配合物使DNA粘度的增加的程度也大于配体．结果显示，染料木素及其钐（Ⅲ）配合物都能与DNA发生插入结合作用，但配合物与DNA结合得更加紧密．抗肿瘤活性体外测试的结果表明，无论染料木素还是配合物对于筛选的瘤株均具有一定的抑制作用，但是配合物对瘤株的抑制强于配体。     

λ噬菌体调节蛋白与操纵基因相互作用的研究

根据λ噬菌体调节蛋白和特异的ＤＮＡ部位的相互作用提出一种线笥三位点的结合模型，从理论上解释了调节蛋白结合左右操纵基因的协同性，得出耦合自由能的分配。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ2基因多态性及其表达与糖尿病关系的研究

通过PCR—RFLP与免疫组织化学方法,研究过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ_2基因Prol2Ala多态性与糖尿病(DM)易感性的关系,以及人皮下脂肪组织中PPARγ_2的表达与DM的相关性.实验结果表明,DM患者基因型Pro/Ala为9%,而对照组Pro/Ala为5%,DM患者与对照组之间Prol2Ala多态性频率存在差异,但不显著;用SABC方法处理皮下脂肪组织后,DM患者与正常对照组切片染色不同.PPARγ_2可能会在DM的诊断和治疗过程中起到一定作用.     

孕激素受体激活系统建立及对细胞周期的影响

建立孕激素受体（PR）转录激活系统,同时探索孕激素受体对细胞周期的影响。有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。运用双荧光报告系统,建立内、外源孕激素受体转录激活系统,运用细胞流式技术检测孕激素受体对细胞周期的影响。发现孕激素可以激活外源构建的孕激素受体,孕激素能够通过结合内源受体促进细胞生长。我们成功建立了孕激素受体转录激活系统,并发现孕激素可以通过其受体增加细胞的S期比例,促进肿瘤细胞T47D的增殖。     

基于肿瘤蛋白-蛋白相互作用网络的药物靶标发现

基因组学的快速发展在我们面前呈现出了一幅肿瘤基因组的总构架,但目前最大的挑战之一是怎样将这些大量基因组信息转化成针对癌症病人基因变化的有效治疗方法.针对这一挑战,美国国家癌症研究所建立了癌症靶标研发(CTD2)联盟.作为国家联盟的一员,埃默里大学CTD2中心着重于对癌症基因功能的研究,建立蛋白-蛋白相互作用网络,以助发现新的癌症治疗靶点.为了实现这个目标,笔者团队通过高通量筛选技术和高通量信息学方法的共同应用,快速检测癌症相关蛋白的分子互相作用,并构建了与肿瘤相关的蛋白-蛋白相互作用网络(OncoPPi).此网络将癌症基因与相应的功能蛋白相接,并可用于发现与肿瘤缺陷有关的作用机制、新药物靶标和新的治疗方法.这些数据已存入Emory CTD2中心的portal网站,供大家分享.Emory中心是CTD2联盟一个重要组成部分,联盟内提供实时的数据分享,合作紧密.通过共同努力,笔者团队以及CTD2联盟的目标是发展新的一代肿瘤信号通路干扰药物,实现基因组学基础上的精准治疗.     

“嘎嘣脆”受体——可被单线态氧分子永久激活的G蛋白偶联受体

光敏剂磺酸化铝络酞菁(SALPC)光动力作用所产生的单线态氧分子(¹O₂),永久性激活分离大鼠胰腺腺泡细胞内源性的和在HEK293细胞异源表达的胆囊收缩素1型受体(cholecystokinin type 1 receptor, CCK1R).基因编码的蛋白质光敏剂(genetically encoded protein photosensitiser, GEPP)毒杀红(KillerRed)、迷你单(miniSOG)在胰腺腺泡肿瘤细胞系AR4-2J质膜定位表达后,光动力永久激活AR4-2J细胞内源性CCK1R.细胞特异性KillerRed或miniSOG光动力作用,有望为阐述CCK1R的生理功能提供直接证据.潜在"嘎嘣脆"受体嵌合体的出现,将可实现对其他G蛋白偶联受体的在体原位远程调控.本文综述了实验室发现"嘎嘣脆"受体(可被¹O₂永久性激活的G蛋白偶联受体)的相关工作背景和已发表的主要研究结果,展望该领域发展前景,预测"嘎嘣脆"受体在疾病治疗中的可能应用.     

含外显子8的prosaposin蛋白亚型与Rhox5蛋白间的相互作用

研究含外显子8的prosaposin蛋白亚型(PsapE8)与同源异型框蛋白Rhox5蛋白间的相互作用. 重叠延伸PCR法扩增PsapE8的cDNA序列,将其按照通读框方式分别克隆至pGBKT7和pGADT7酵母双杂交载体中构建pGBKT7-PsapE8和 pGADT7-PsapE8重组质粒. 酵母双杂交实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在酵母体内的结合;体外转录翻译S35标记的PsapE8蛋白,GST pull-down实验检测PsapE8与Rhox5蛋白在体外的结合情况. 成功地构建了pGBKT7-PsapE8和 pGADT7-PsapE8重组质粒,酵母双杂交实验表明PsapE8蛋白在酵母体内可以结合Rhox5蛋白;GST pull-down实验再次验证了两者在体外的结合;表明含有外显子8的prosaposin蛋白亚型PsapE8可以与Rhox5蛋白相结合.     

绵羊脂联素受体2基因生物信息学分析

采用生物信息学方法对绵羊(兰州大尾羊)AdipoR2基因及其所对应蛋白质进行了分析.结果显示,AdipoR2基因全长1 809 bp,编码386个氨基酸多肽蛋白.核苷酸和氨基酸的同源性与山羊最高,分别为99.1%和99%,非洲爪蟾最低,分别为68.2%和78.5%.兰州大尾羊AdipoR2编码蛋白二级结构中α-螺旋占23.06%,β-片状占27.72%,无规则卷曲占49.22%.ADIPOR2蛋白为跨膜蛋白,N-端位于胞内,C-端位于胞外,由7个跨膜结构域组成.分析表明,绵羊AdipoR2基因由7个外显子和6个内含子组成,核苷酸序列变异以转换为主,转换/颠换比值为2.072.不同物种间绵羊与山羊AdipoR2核苷酸序列间变异最小(0.9%).系统发育分析表明,绵羊与山羊也首先聚为一类,推测绵羊与山羊的分歧时间大约在0.225百万年前.这些结果为进一步分析绵羊脂联素受体2(AdipoR2)基因功能及其所介导的脂联素功能奠定了理论基础.     

诸葛菜植物防御素基因克隆与原核表达研究

以从正在萌发的诸葛菜种子中提取总RNA反转录成的cDNA作为模板,进行PCR扩增,获得了160 bp的植物防御素cDNA片段.然后将该片段克隆到pMD18-T载体. 经测序后将片段酶切回收,再克隆到GTK原核表达载体中. 经0.1 mmol/L IPTG诱导表达,获得了与理论值相符的32 kD的融合蛋白质条带. 用GST单克隆抗体做第一抗体进行WesternBlot检测,获得阳性结果. 这为诸葛菜植物防御素基因功能的研究提供了基础.     

酵母双杂交筛选与视黄醇结合蛋白有相互作用的蛋白质

为了研究视黄醇结合蛋白(RBP)在维生素A代谢调控中的作用和与相关疾病发生、发展的关系,以RBP作为诱饵基因构建了融合表达载体pGBKT7-RBP;在排除自身转录激活活性的基础上,与人肾脏cDNA预转库融合筛选(Pretransformed MATCHMAKER Lbraries),经营养缺陷型和X-α-gal显色鉴定,从中筛选出三种与RBP有相互作用的新蛋白质,并从人睾丸cDNA库中克隆了这三个基因的全长序列。     

人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。     

皂荚素与离子表面活性剂三元体系的相互作用

测定了天然皂荚素 (GS)、CTAB和 (C1 2 S ,C1 6 S)三元复配体系在 2 5℃ ,纯水及 0 .1mol·L- 1 NaBr溶液中的表面张力 .并用Rubingh和Rosen公式计算了分子间相互作用参数 βm、βσ.结果表明电解质 ,表面活性剂疏水链长对三元表面活性剂体系表面活性的影响 ,遵循表面活性剂体系的一般规律 ,三元表面活性剂体系分子间存在相互吸引作用且强度大于CTAB -CnS体系 .     

水稻脱落酸受体PYL2与mNeonGreen融合蛋白的原核表达及纯化

目的:为建立脱落酸的荧光检测方法.方法:通过重叠PCR技术,在水稻脱落酸受体PYL2蛋白的C-端融合一种新型黄绿色荧光蛋白mNeonGreen,并对融合蛋白进行原核表达和纯化.结果:获得了高纯度的融合蛋白PYL2-mNeonGreen,加入脱落酸后,该融合蛋白黄绿色荧光强度逐步降低,表明融合蛋白PYL2-mNeonGreen能特异性识别脱落酸.结论:该研究为后续脱落酸的原位检测奠定了基础.