维生素K1注射液安全性评价实验的探讨

本文旨在研究药物的过敏物质检测方法,为药品的安全性评价提供参考。通过对白色豚鼠(Cavia porcellus)主动全身过敏实验、被动皮肤过敏实验、RBL-2H3细胞脱颗粒实验、β-氨基己糖苷酶释放率实验和L929细胞毒性实验考察不同厂家维生素K1注射液的产品质量。结果发现,供试的10个厂家的产品质量存在明显差异。研究认为细胞实验作为一种快捷有效的过敏物质检测手段,可用于药品的质量评价。
     

维生素K1注射液安全性评价实验的探讨

本文旨在研究药物的过敏物质检测方法,为药品的安全性评价提供参考。通过对白色豚鼠(Cavia porcellus)主动全身过敏实验、被动皮肤过敏实验、RBL-2H3细胞脱颗粒实验、β-氨基己糖苷酶释放率实验和L929细胞毒性实验考察不同厂家维生素K1注射液的产品质量。结果发现,供试的10个厂家的产品质量存在明显差异。研究认为细胞实验作为一种快捷有效的过敏物质检测手段,可用于药品的质量评价。     

新疆骆驼刺植物抗过敏作用的研究

目的：研究新疆骆驼刺提取物的抗过敏作用及其机制。方法：抗过敏动物模型实验法及大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3活化脱颗粒,ELISA酶联免疫法测试组胺过敏活性介质浓度。结果：骆驼刺提取物对致敏豚鼠离体回肠收缩有显著性拮抗作用,对RBL-2H3细胞脱颗粒释放组胺有显著性抑制作用,作用效果与色甘酸钠组相近。结论：骆驼刺的抗过敏作用机制可能是通过抑制MC细胞内活化信号的传导,从而抑制MC释放炎症介质,达到抗过敏作用效果。     

抗过敏中草药活性成分的药效评价

肥大细胞受到抗原刺激后释放组胺是过敏反应的重要过程,对组胺释放的抑制能力是评价抗过敏药物的重要因素.选取多种传统中医记载具有抗过敏作用的中草药,检测了其在体外对肥大细胞脱颗粒并释放组胺的抑制效果.在具有明显效果的中草药中,土茯苓与芍药对于抑制肥大细胞脱颗粒最为突出, IC50分别为62.5μg/mL和113.8μg/mL.土茯苓的突出药效(药物浓度为500μg/mL时抑制率达到95.63;)未曾被报道,具有研究与开发价值.对其机理的初步研究表明蛋白激酶A可能是土茯苓抑制肥大细胞脱颗粒的重要靶点.     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的影响

为探讨交通相关PM2.5对人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用及可能机制,为交通相关PM2.5的免疫毒性提供实验依据,采用0、50、100、200μg/mL PM2.5对人外周血淋巴细胞进行24 h和48 h染毒,FITC-AnnexinV/PI染色,流式细胞仪检测淋巴细胞早期凋亡和坏死;采用0、20、80、320μg/mL PM2.5浓度分别染毒人外周血淋巴细胞24、48、72 h,Western blot法测定细胞内含半胱氨酸的天冬氨酸特异蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3)和cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平,ELISA法检测细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophos-phate,cAMP)含量.结果表明,50、100、200μg/mL PM2.5染毒细胞24 h和48 h后,淋巴细胞早期凋亡和坏死均高于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.01),且具有一定的剂量-效应关系;20、80、320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,各剂量组Caspase-3蛋白表达水平均高于对照组,除80μg/mL PM2.5染毒72 h外,差异均具有统计学意义(P<0.01).320μg/mL PM2.5染毒细胞24、48、72 h后,细胞内cAMP含量均比生理盐水组升高(P<0.05).PM2.5染毒72 h后,CREB表达水平随PM2.5浓度的升高而降低(P<0.01).可见,交通相关PM2.5可诱导人外周血淋巴细胞产生凋亡,且细胞内cAMP和CREB参与了凋亡的调控.     

H13对HT-29细胞周期和caspase-3蛋白表达的影响

探讨新型Topo I抑制剂H13对体外培养的人结肠癌细胞HT-29细胞周期和caspase-3表达的影响.以人结肠癌细胞HT-29为研究对象,PI染色,流式细胞仪检测H13处理48 h后细胞周期的分布;Western Blot法检测H13处理48 h后caspase-3表达的变化.2.5和5 g/mL H13处理的HT-29处理48 h后,G1期细胞百分率下降,S期细胞百分率上升,并且有剂量依赖性;2.5,5,10 g/mL H13处理的HT-29处理48 h后,caspase-3蛋白表达升高.H13对诱导HT-29细胞周期阻滞于S期,其机制可能与其上调caspase-3表达有关.     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

O_3氧化黑碳对SH-SY5Y细胞的毒性作用

以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为模型,在细胞体系探讨经O_3氧化过的黑碳(O_3-oxidized black carbon, OBC)颗粒对神经细胞的毒性作用.应用MTT方法评估SH-SY5Y细胞的存活率;通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LHD)浓度评估细胞膜的损伤程度;利用流式细胞术评价细胞凋亡率;使用荧光探针(Fluo 3-AM)检测细胞内Ca~(2+)浓度.结果显示, OBC颗粒对SH-SY5Y细胞暴露24和48 h的半致死浓度(IC50)分别为202.2和133.3μg/mL;随着BC颗粒染毒浓度的增加(0, 5, 10, 20, 40μg/m L),胞外LDH浓度、细胞凋亡率和Ca~(2+)浓度均逐渐升高,呈显著的剂量-效应关系(p 0.05).研究表明, OBC颗粒可导致神经细胞内Ca~(2+)浓度升高、细胞膜损坏,并最终导致细胞凋亡的发生.     

吴茱萸碱诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡

探讨吴茱萸碱对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制、诱导细胞凋亡的影响.采用MTT法测存活率;光镜观察细胞形态学改变;流式细胞术测细胞凋亡;流式细胞仪检测线粒体膜电位.结果显示,吴茱萸碱能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长.MTT法测得吴茱萸碱的IC50为3.15μg/mL.在光镜下观察药物作用24 h的细胞生长密度逐渐变疏,细胞变小,表面起皱,高质量浓度组大部分细胞破碎.流式细胞仪检测,用20、10、5、2.5、1.25μg/mL质量浓度的吴茱萸碱作用48 h均出现亚二倍体凋亡峰,凋亡率分别为27.273%、24.206%、20.575%、19.520%、18.361%.流式细胞仪测线粒体膜电位,用质量浓度2.5、1.25、0.625、0.313、0.152μg/mL的吴茱萸碱作用48 h后线粒体膜电位显著提高.提示吴茱萸碱通过诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡,而达到抗肿瘤作用.     

脂多糖诱导星形胶质细胞炎性反应的机制研究

目的 探讨脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞产生炎性反应及其可能机制.方法 原代培养并鉴定C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,GFAP免疫荧光染色进行鉴定,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,正常组细胞作为对照,Griess法检测NO的释放,ELISA检测细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,免疫荧...     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

利用人胚胎干细胞评价反式维甲酸的胚胎发育毒性

目前,药品安全、食品安全和环境污染等问题受到国人的广泛关注,也受到政府的特别重视。医用化学品、食品添加剂和环境污染物等通过各种途径进入体内,可能产生胚胎发育毒性;因此,建立新的高通量、高灵敏的胚胎发育毒性检测和评价十分重要。研究尝试利用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)对人胚胎干细胞H9的细胞毒性和分化抑制,评价RA的胚胎发育毒性。通过CCK8检测不同浓度下RA对人胚胎干细胞H9和鼠胚胎成纤维细胞3T3的细胞存活百分数和半数增殖抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50),发现处理5 d和10 d,RA对人胚胎干细胞H9的IC50分别是9.23μg/mL和7.20μg/mL,明显低于3T3细胞。通过实时定量PCR检测不同RA浓度下,自然分化20 d的细胞中Nkx2.5、α-MHC、ACTC1和TNNT2基因的表达,发现0.3μg/mL及其以上浓度RA显著抑制H9细胞向心肌细胞分化。RA对H9细胞α-MHC、TNNT2和ACTC1的半数抑制分化浓度(ID50),分别为0.16、0.07和0.05μg/mL,ACTC1和TNNT2的ID50明显低于α-MHC的,提示ACTC1和TNNT2可能更适合作为人胚胎干细胞分化抑制的评价的指标。     

鱼藤素对大鼠H9C2心肌细胞的生存活力和凋亡的影响

为探讨不同浓度的鱼藤素(Deguelin)对大鼠H9C2心肌细胞活力及凋亡的影响。通过将不同浓度(0、10、50、100、500、1 000 nmol / L)的鱼藤素作用于H9C2细胞24 h、48 h、72 h,应用CCK-8 法测定鱼藤素对H9C2细胞存活率的影响;划痕实验检测(0、10、50、100、500、1 000 nmol / L)浓度的鱼藤素作用于H9C2细胞24 h、48 h后,对细胞迁移能力的影响。应用Hoechst 33342 / PI 双染试剂盒检测不同浓度鱼藤素(0、10、50 nmol / L)作用于H9C2细24 h后对细胞凋亡的影响。结果表明：10、50、100、500、1 000 nmol / L的鱼藤素作用H9C2细胞24 h、48 h、72 h后,能明显抑制其存活率,10、50、100、500、1 000 nmol / L的鱼藤素作用H9C2细胞24 h、48 h后,能明显抑制其迁移能力,且呈浓度和时间依赖性;荧光倒置显微镜观察发现鱼藤素在低浓度时便可以诱导H9C2细胞凋亡。可见鱼藤素能够呈时间和浓度依赖性来抑制H9C2细胞的生存活力并诱导其凋亡。     

云芝子实体多糖对人宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响研究

研究云芝多糖(Coriolus versicolor polysaccharides,CVP)对宫颈癌HeLa细胞系生长和凋亡的影响及可能的通路。采用MTT方法测定了CVP对HeLa细胞体外生长抑制的作用,结果表明当CVP浓度在0~0.625μg/mL的范围内,随着CVP浓度的增加,HeLa细胞的存活率逐渐减少.流式细胞仪检测凋亡细胞的结果显示,使用0.5μg/mL CVP处理HeLa细胞,作用24h和48h后细胞凋亡率分别为26.36%和63.81%;实时荧光定量PCR检测结果显示CVP处理细胞后Bcl-2基因的表达量显著下降(P0.05).该研究证明CVP能抑制HeLa细胞的生长、诱导细胞的凋亡,其作用机制与影响Bcl-2基因的表达下调有关.     

改性硫磺颗粒的制备及其改性沥青路用性能

通过在硫磺中添加H2S抑制剂来制备改性硫磺颗粒(MSP),采用亚甲基蓝分光光度法测定改性硫磺颗粒与沥青混合加热过程中H2S释放量,并讨论H2S主抑制剂、辅助抑制剂的种类和用量对H,s释放量的影响,优化改性硫磺颗粒配方.结果表明:二硫化物抑制剂是最佳的主抑制剂,且随主抑制剂用量的增加,H2S抑制效果增强;少量的协同抑制剂极大地提高了改性硫磺颗粒对H,s的抑制能力.在最佳配方下,160 ℃时改性硫磺颗粒与沥青共混时H2s释放量为0.03μg/g,与纯硫磺相比H2S释放量降至0.68%;150℃时不同配方改性硫磺颗粒与沥青共混时H,S释放量为0.012～0.156μg/g,而纯硫磺与沥青共混时H2S释放量为0.956μg/g.添加适量改性硫磺颗粒,沥青混合料的动稳定度由l 073次/mm提高至2410次/mm,冻融劈裂强度比由75.3%提高至84.4%.改性硫磺颗粒具有显著降低H2s释放量、增强路面强度、改善抗水损害能力等优点.     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的观察

观察龙葵碱对3种消化系统肿瘤细胞株人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞SGC-7901、人大肠癌细胞Ls-174的细胞毒作用.并从细胞凋亡角度揭示龙葵碱对敏感细胞株的作用机制.采用MTT法观察龙葵碱对3种肿瘤细胞株的细胞毒作用;采用AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微术(confocal)观察龙葵碱对HepG2肿瘤细胞形态的影响;PI单染,流式细胞仪测定龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响.龙葵碱作用于HepG2、SGC-7901、LS-174的IC50分别为14.47μg/mL、(50μg/mL、(50μg/mL;在形态学观察实验中,阴性对照组细胞形态正常,0.003 2μg/mL、0.016μg/mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变,0.08、0.4、2μg/mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态.凋亡率测定结果表明5个剂量龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡率分别为6.0%、14.4%、17.3%、18.9%、32.2%,0.08μg/mL喜树碱诱导HepG2细胞的凋亡率为21.9%.细胞周期观察发现龙葵碱各组G2/M期均消失,S期明显升高.龙葵碱对HepG2人肝癌细胞株比较敏感,能够诱导HepG2细胞凋亡,并将HepG2细胞阻止在S期,影响肿瘤细胞DNA合成.     

自然老化作用下聚氯乙烯纳米塑料的形成及邻苯二甲酸酯类添加剂的释放

自然老化作用可以促进环境中纳米塑料的形成以及塑料中添加剂的释放,增强了塑料的生态风险以及人体健康风险。利用室外模拟实验,以典型的聚氯乙烯(PVC)塑料为研究对象,研究了自然老化作用下PVC塑料表面结构特征的变化,纳米塑料的形成以及邻苯二甲酸酯类添加剂的释放特征。结果表明：老化过程使得PVC发生了脱氯化氢和氧化反应,使得C=C键增多,并且形成了新的—OH和C—O键,显著增加了C=C指数、—OH指数和C—O指数。自然老化作用下,光照50 d时,水中纳米颗粒浓度由起始时的7.5×10⁶个/mL增加到9.5×10⁷个/mL;PVC塑料质量由3 200μg减少到2 000μg,质量损失率达到37.50%;体系的主导粒径明显降低,由起始时的约219.3 nm减小到约176.6 nm;三种邻苯二甲酸酯类添加剂在水中浸出浓度的大小顺序为邻苯二甲酸二丁酯(DBP,27.40μg/L)>邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP,9.69μg/L)>邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP,5.68μg/L),塑料中添加剂的含量及性质均对其浸出能力具有重要影响。     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.