一株凝结芽孢杆菌的筛选及鉴定

<正>凝结芽孢杆菌是一种美国FDA批准用于食品的益生菌,可定殖于肠道中并产生乳酸,同时由于其可产生芽孢,不良环境耐受性好,菌体在通过肠前消化道时可保持较高的存活率,是一种有重要价值的益生菌。但目前我国尚未批准用于食品中,相关研究较少。本文从土壤中筛选得到一株芽孢杆菌,经16s r DNA和生理生化鉴定,确定其为凝结芽孢杆菌,命名为Bacillus coagulans HXP-1。     

一株抗黄芪根腐病芽孢杆菌的筛选、鉴定及抑菌物质的初步研究

从河西走廊敦煌盐碱土中分离筛选出有效拮抗黄芪根腐病病原菌尖孢镰刀菌的细菌,以期能为黄芪根腐病的生物防治提供菌种资源.采用平板对峙法和琼脂扩散法筛选拮抗菌,通过其形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列进行分类学鉴定;对其产抑菌物质的发酵条件进行优化,探讨其抑菌谱与稳定性;用有机溶剂进行抑菌物质的初步提取和抑菌效...     

一株解淀粉芽孢杆菌亚种产果聚糖培养条件优化

通过单因子试验和多因子的正交试验对解淀粉芽孢杆菌亚种LE-3液体摇瓶发酵产胞外果聚糖的培养条件(碳源、氮源、接种量、发酵时间)进行了优化,并提取纯化果聚糖,进一步测定了该果聚糖螯合Fe~(2+)的能力。结果表明:解淀粉芽孢杆菌亚种LE-3种子菌液培养24 h后按照10%(v/v)接种发酵培养基(蔗糖60 g/L、酵母膏2.5 g/L、KH_2PO_4 2.5 g/L、K_2HPO_4 2.5 g/L、NaCl 1.0 g/L、MgSO_4·7H_2O 0.2 g/L、FeSO_4·7H_2O 0.001 g/L,初始pH 7.0),37℃培养36 h,胞外果聚糖产量达到最高值18.36 g/L,约是未优化时的3.0倍。     

一株产细菌素物质芽孢杆菌的筛选和鉴定

从石油污染的土壤中筛选出一株能产生细菌素类物质的芽孢杆菌,命名为SLY—3。该菌株分泌的活性物质抑菌活性好,对细菌主要是革兰氏阳性菌、霉菌都有抑制作用。从表型、生理生化反应及16S rDNA序列比对方面进行分析,最终确定菌株SLY—3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。培养基初始pH为7.0,28℃振荡培养24 h后,发酵产物抑菌活性最高。     

一株杀虫球形芽孢杆菌的鉴定

本菌株分离自甘肃省平凉地区死亡的菜青虫。将此菌苔制成菌悬液,再涂到清洁的饲料上,并使粘虫、菜青虫、地老虎、苹果枯叶蛾食用该饲料,重复3次都具有80％以上的作用效果,其表现症状与田间所见的完全相同,故对该株杀虫菌进行了细菌鉴定。     

一株高产胞外多糖的乳酸芽孢杆菌的筛选及功能鉴定

为丰富可用于功能食品的微生物资源,本研究从四川怀远发酵米糕作坊环境中分离出1株高产胞外多糖和乳酸的芽孢杆菌（XQ）,经分子鉴定为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus.HPLC检测XQ产乳酸含量为8 mg/mL;苯酚 硫酸法检测粗胞外多糖浓度达到7.16 mg/mL.并经滤纸片法测定出XQ产生的粗胞外多糖对常见的食源性病原菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑菌作用.DEAE分离粗胞外多糖为中性多糖E1和酸性多糖E2.当浓度为10 mg/mL时,E1对羟自由基清除活性为3.24%,而E2羟自由基清除活性高达84.58%;E1和E2对DPPH自由基的清除活性分别为26.07%和47.03%.E2还具有明显的抗肿瘤活性：当浓度为4 mg/mL时,E2对A549细胞的生长抑制率可达到81.30%,在浓度为6 mg/mL时,E2对HepG2细胞的生长抑制率为53.40%.在模拟胃肠道耐受性实验中发现XQ对胰蛋白酶、胃蛋白酶和胆盐均具有良好的耐受性.在安全性方面,没有发现XQ有溶血现象,对革兰氏阳性菌抗生素没有抗药性,具有良好的药物安全性.表明XQ可作为一种潜在的益生菌.     

解淀粉芽孢杆菌ptsGHI基因的敲除及缺陷株生长特性

在解淀粉芽孢杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要是由ptsGHI操纵子编码的酶EI、HPr、EIIGlc转运入细胞.文中运用PCR技术,扩增出ptsG和ptsHI基因上下游的DNA片段,共约1kbp,用融合PCR连接上下游片段后,再连接到温敏型质粒pKS2上,然后电转化到解淀粉芽孢杆菌XH7中,最终构建了ptsG和ptsHI基因缺陷株.实验结果显示:在LB培养基中,tsG及ptsHI基因缺陷株的生长状况与野生型菌株无明显差异;在含葡萄糖的LB培养基中,ptsG基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株提高了28％,且平稳期比野生型菌株要长,而ptsHI基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株降低了约32％,与其在LB中的生长状况基本一致;ptsG和ptsHI缺陷株及野生型菌株经鸟苷发酵实验后,ptsG基因缺陷株的鸟苷产量比野生型菌株提高了约24％,ptsHI基因缺陷株的鸟苷产量则比野生型菌株降低了约82％.以上结果表明:解淀粉芽孢杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和产物合成能力.     

一株胶质芽孢杆菌的解钾能力

胶质芽孢杆菌 (Bacillusmucilaginosus)是一种能分解硅酸盐矿物的细菌 .国内一些学者把它称为硅酸盐细菌 .长期以来对该菌种的特性一直有不同的意见 ,因此其分类地位、名称直至1 998年才在国际上得到承认[1] .它能分解钾长石、云母等铝硅酸盐类的原生质态矿物 ,使土壤中的不溶性K、P、Si等转变为可溶性元素供植物利用 .同时还可产生多种生物活性物质 ,促进植物生长[2 ] .本实验室在南京郊区土壤中分离到一株胶质芽孢杆菌NS0 5,对此作者采用不同的培养基 ,以不同的硅酸盐矿物作为唯一钾源对NS0 5菌种的解钾作用进行了研究 ,特别是采用了B…     

产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究

对一株产纤维素酶菌株进行分离鉴定,并对其酶学特性进行了初步研究.刚果红染色法筛选产纤维素酶菌株B16,采用形态观察、生理生化指标和16S rDNA确定其菌属来源,分析纤维素酶的最适反应pH值和温度、酸碱和热稳定性、金属离子对酶活性的影响,最后考察纤维素酶系的分布.结果表明:筛选菌株为解淀粉芽孢杆菌,其较适反应温度为30℃,较适pH 8.0,在10~60℃呈高稳定性,在pH 5~8时稳定性较强,Mn2+和Ba2+是该酶的激活因子.除微晶纤维素酶活力(16.39 U/mL)稍弱外,滤纸酶(70.37 U/mL)、β-葡萄糖苷酶(131.55 U/mL)、羧甲基纤维素酶(307.23 U/mL)活力均相对较高.结果表明,该酶在饲料添加剂方面具有应用潜力.     

一株耐盐芽孢杆菌的分离与鉴定

从校园草坪土壤中分离得到一株能够在20%NaCl的高盐条件下生长的耐盐细菌,经过形态观察、生理特征分析及16SrDNA序列分析,鉴定为一株芽孢杆菌(Bacillussp.),并在GenBank中完成该菌株16SrDNA序列的注册,登录号为EU167738.     

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(NC_009725)的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明:BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.     

一株产脂肪酶蜡状芽孢杆菌的分离鉴定

从三角湖生活用水排污口取样,利用橄榄油培养基筛选产脂肪酶菌株。革兰染色结果为革兰氏阳性杆状菌;16SrDNA序列显示,该菌为蜡状芽孢杆菌;并从生理生化特征上进一步证实了是蜡状芽孢杆菌;对其生长曲线进行了测定;其生长规律与模式菌株大肠杆菌基本相同。对蜡状芽孢杆菌脂肪酶分解不同类型油脂的能力进行了评估,该菌脂肪酶对猪油分解能力强,橄榄油及花生油次之,对牛油分解能力差。     

解淀粉芽孢杆菌次生代谢产物的研究进展

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens在自然界分布广泛,其自身在生长过程中产生多种多样的代谢产物,且具有很好的抑制真菌与细菌的能力。随着人类生活水平的提高,对于天然产物或生物来代替传统的化学制剂的需求也越来越大。因此,目前对解淀粉芽孢杆菌的研究与探索越来越多,本文对解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定、次生代谢产物的类别及活性成分进行了总结,为解淀粉芽孢杆菌的进一步研究提供参考。     

解淀粉芽孢杆菌发酵液的抑菌活性及抗氧化作用

以尖孢镰刀菌黄瓜专化型病原菌为指示菌,利用平板对峙法、牛津杯法等方法,探究解淀粉芽孢杆菌SJ100001对尖孢镰刀菌的拮抗作用、SJ100001菌株抑菌活性成分的来源、SJ100001菌株发酵液的最佳发酵条件及其理化稳定性;通过DPPH自由基清除能力和还原力的测定,探究SJ100001菌株发酵液的抗氧化活性.结果表明,...     

一株同型乳酸发酵芽孢杆菌的分离和鉴定

从奶粉中分离到一株同型乳酸发酵杆菌，编号ＴＱ３３，主要特点：产生芽孢，生长温度范围（２０～６３）℃，最适生长温度（４５～５０）℃，接触酶试验阳性，通气条件下生长良好，厌氧条件下发酵葡萄糖产酸不产气，主要产Ｌ（＋）乳酸，菌体（Ｇ＋Ｃ）为（３２．４５）％，生理生化性质特殊，据以上特点，将ＴＱ３３菌株鉴定为凝结芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｏａｇｕｌａｎｓ），ＬＤ_（５０）试验表明，菌体和代谢产物属无毒物质。     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6–巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+MSOr+6-MPr)的突变株GR600.以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607(Ade-+MSOr+6-MPr+kmr),鸟苷产量高达20.82,g/L.     

一株嗜酸性硫杆菌的筛选、鉴定及应用

以硫磺粉作为能源底物,采用Waksman培养基进行菌种的驯化、富集、分离及纯化,直接从污泥中分离出一株高度嗜酸菌种SD02.通过16S r DNA测序鉴定以及污泥的生物淋滤实验,对其菌属信息及应用效果进行了考察.结果显示,菌种SD02为嗜酸性氧化硫硫杆菌,可有效淋滤出污泥中的重金属,12d后污泥中Cu、Zn、Cr、Ni的最高去除率分别达到84.66%、80.57%、90.18%、98.83%.研究表明,从污泥中筛选出的嗜酸性氧化硫硫杆菌SD02是一种能有效应用于污泥中重金属去除的菌株.     

一株产纤维素酶的暹罗芽孢杆菌筛选及产酶条件优化

以一株来自海鱼肠道的暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)为出发菌株,进行紫外线诱变,诱变后通过平板初筛和摇瓶复筛,获得了五株纤维素酶高产菌株,其中菌株UV-30酶活最高,为0.082 1 U/g,较出发菌株(酶活为0.052 4 U/g)提高了56.68%.通过采用单因素和正交试验对该菌株产酶条件进行优化,结果表明最优发酵条件为:羧甲基纤维素钠1.25%,蛋白胨6%,产酶温度30℃,起始pH值8.0,装液量30%,接种量2.5%.以此条件发酵,酶活可达到0.168 6 U/g,为出发菌株的3.22倍,酶活显著提高,为该酶的进一步分离纯化及性质研究奠定了基础.     

一株盐湖芽孢杆菌AF-1的鉴定及其抗尖孢镰刀菌活性研究

盐湖作为一种特殊的极端环境,其中的微生物具有巨大的潜在应用价值.为了了解盐湖微生物的特性,对分离自山西运城盐湖的一株芽孢杆菌AF-1进行分类鉴定及抗菌特性研究.对该芽孢杆菌分类鉴定采用的是16s rDNA基因序列分析;以尖孢镰刀菌作为指示菌,采用杯碟法检测AF-1发酵上清液的抗菌活性,研究不同温度、pH、盐度条件对发酵上清液抗菌活性的影响,检测AF-1的生长曲线和抗生素产生量的关系及抗菌曲线;利用扫描电镜和透射电镜观察AF-1的抗菌效果;利用PCR技术对AF-1基因组进行抗菌功能基因PKS筛查.结果显示,16s rDNA基因序列的系统发育分析表明AF-1为Bacillus属成员,对尖孢镰刀菌有很好的抗性;AF-1发酵上清液在不同的温度、p H和NaCl浓度条件下均有很好的抗菌活性;显微镜检测和透射电镜结果显示,AF-1发酵上清液使尖孢镰刀菌细胞结构出现明显改变,并导致部分细胞质泄露;AF-1基因组中含有聚酮合酶PKS基因,可以用来合成抗生素前体物质.以上结果表明,从盐湖中分离的芽孢杆菌AF-1具有很好的抗尖孢镰刀菌的活性,可以作为抗菌活性物质的新菌种来源.     

浓香型大曲中多株芽孢杆菌的分离及鉴定

采用传统微生物分离方法从浓香型白酒大曲中筛选出8株优势芽孢杆菌,通过形态特征观察并结合细菌脂肪酸鉴定技术(MIDI鉴定系统)对其进行鉴定。结果表明,从大曲中分离筛选得到8株芽孢杆菌分属于5个种,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。