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1.
设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酶Rz-2,分别以pKyLx7和pBin19为载体,构建含Rz-2基因及核酶和底物连接的RzSb-2基因的重组质粒,通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒。 相似文献
2.
研究一个烟草花叶病毒(TMV)cDNA3′末端被特异切割的发夹核酶对感染原生质体的作用。选用一个外源基因绿色水母荧光蛋白(GFPuv)作为报道基因,取代了大部分的CP编码区域,以研究在烟草原生质体中发夹核酶对TMV载体的复制,通过GFP的表达来确定表达量。顺式发夹核酶对TMV载体感染效率的影响通过体外转录来观察。TMV GFPRIB体外转录感染原生质体的效率比与其不含该核酶的对应物的感染效率高3~5倍。Northern杂交结果表明,包括核酶在内的3’末端非病毒序列在体外转录反应开始后就被顺式发夹核酶切除了。当直接用载体DNA pSTMVGFPRIB感染原生质体时,感染原生质体的数量比与之相对应的pSTMVGFP NOS感染原生质体数多50%~80%。 相似文献
3.
由TMV54*10^3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的 … 总被引:2,自引:0,他引:2
通过土壤农杆菌的介导,将烟草花叶病毒的54*10^3蛋白cDNA转入番茄植物中,得到了转基因植株,这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性。 相似文献
4.
通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的介导,将烟草花叶病毒(TMV)的54103蛋白cDNA转入番茄植物中,得到了转基因植株.这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性.DNA的PCR扩增及Northernblot分析表明,54103蛋白基因已整合到番茄基因组上.攻毒实验表明,未转基因的对照组接种病毒2周后即出现花叶,并且随着时间的推移,花叶症状更加典型.而转基因的植物接种病毒后一直到开花结果都未见发病,即没有花叶出现. 相似文献
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构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂突变体rPA(Reteplase)的烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)瞬时表达载体PJL TRBO-rPA,并转入农杆菌GV3101中.利用农杆菌渗滤接种技术在烟草本氏烟(Nicotiana benthamiana)中进行表达.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western blotting)和纤维蛋白琼脂糖平板(fibrin-agarose plate assay,FAPA)法检测分析.结果表明,在烟草中成功地表达出了有活性的rPA.为在植物中生产Reteplase提供了一条可能的途径. 相似文献
7.
烟草原生质体的分离纯化 总被引:6,自引:0,他引:6
研究从烟草叶片分离原生质体的若干影响因素.通过酶解法降解细胞壁释放出原生质体,利用离心和蔗糖漂浮法从粗提取液中纯化出原生质体,并通过血球计数板计数来比较制备的效果.结果表明:酶的种类、质膜稳定剂、渗透压稳定剂、pH及酶解时间是影响原生质体制备的重要因素.纤维素酶含量2%,果胶酶含量1%,2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)浓度50mmol/L,Ca2+与甘露醇作为渗透压稳定剂,pH6左右,温度28℃,酶解时间4h时原生质体的分离效果最佳. 相似文献
8.
植物原生质体作为一个良好的实验系统,广泛应用于植物分子及细胞学研究中.本研究以烟草NC89叶片为材料,采用酶解法制备烟草原生质体,经台盼蓝染色鉴定活性,结果显示,分离纯化后的原生质体产量为(12.7±1.6)×106 g-1,表明该方法能成功地制备高产率、高活力的原生质体,建立了一种烟草原生质体的简易制备方法. 相似文献
9.
烟草叶肉原生质体分离和纯化研究 总被引:7,自引:0,他引:7
实验比较了从烟草K326叶片分离叶肉原生质体的若干影响因素.结果表明,质壁分离的时间、酶液浓度、渗透压及酶解时间是影响原生质体产量和质量的决定性因素.研究结果对建立高效的烟草原生质体再生系统及其遗传操作有参考价值. 相似文献
10.
电镜观察表明,新分离的烟草叶肉原生质体表面光滑,在质膜外没有纤维状物质,内质网和高尔基体几乎没有发育:培养1天后,线粒体明显增加,粗面内质网和高尔基体沿质膜发育,质膜变得粗糙;2天后,质膜发生折皱,高尔基囊泡向质膜外分泌它的内含物;6天后,质膜表面出现明显松散分布的再生壁。在培养基中附加200 ppm香豆素处理,在培养1天后,质膜仍然光滑,未出现内质网和高尔基体;2天后,质膜开始变粗糙,内质网开始发育。试验表明,质膜、内质网、高尔基体在原生质体再生壁形成中起重要作用,并讨论了它们的可能作用。香豆素可能是在一定时同内,通过抑制质膜的活动和内质网、高尔基体的发育而抑制壁的再生。 相似文献
11.
核酶的化学合成及其对烟草花叶病毒RNA片段的体外剪切 总被引:1,自引:0,他引:1
设计并用化学方法合成了针对烟草花叶病毒RNA的核酶RZ-1及RZ-1小型化的核酶RZ-2以及它们的底物RNA片段Sb,研究了两种核酶对底物Sb的体外催化活性,并把核酶Rz-1与生物合成的相同组成的核酶Rz-1’进行了比较试验。 相似文献
12.
复制酶基因介导的抗病毒烟草植株的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
将构建的携带烟草花叶病毒(TMV)54KD蛋白基因及黄瓜花叶病毒(CMV)3’端缺失0.9Kb的1.6Kb片断复制酶基因植物表达载体pBICT,导入根癌农杆菌311SE系,用叶圆盘法转化烟草,在含有卡那霉素的选择性培养基上诱导生芽、生根,得到28株成活苗.移入大田后,随机挑选4.株植物,提取植物总DNA,经PCR扩增、Sorthern杂交检测,结果4株植物中都有复制酶基因的整合,而未经转化的对照组植物则没有.转基因植株在大田试验中表现了良好的抗烟草花叶病毒及黄瓜花叶病毒能力. 相似文献
13.
为有效切割端粒酶逆转录酶mRNA为抑制端粒酶活性,设计合成了针对端粒酶逆转录酶mRNA的核酶基因htert RZ及htert-5'RZ,构建了核酶基因的体外转录和真核表达质粒,将核酶转染至肿瘤细胞中,均能抑制端酶活性,核酶heterRZ稳定转染细胞后,使细胞倍增时间长,但无明显细胞凋亡,因而,二种核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂,用于抑制肿瘤生长。 相似文献
14.
以烟草K326无菌苗为材料,成功地将烟草叶肉原生质体培养出再生植株.并同时就烟草叶肉原生质体的酶解条件、培养方法及培养基中的激素组成等因素对植株再生的影响进行了研究和探索. 相似文献
15.
利用番茄U3snRNA基因上游启动区构建植物表达载体及对烟草的转化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用番茄U3snRNA基因上游启动区和ACC合成酶反义RNA-核酶嵌合基因DNA片段,构建含U3snRNA基因上游启动区-ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列的表达载体,重组于植物双元表达载体pGA643中,得到pGU3R.用三亲融合法导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化烟草,诱导再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株.提取抗性植株总DNA,通过PCR、PCRSouthern杂交检测并分别用启动区序列和ACC合成酶的反义RNA-核酶嵌合序列作探针,通过Southern杂交检测,已筛选出整合有外源基因的转化植株.为进一步研究U3snRNA上游启动区增强反义RNA-核酶基因的表达奠定了基础. 相似文献
16.
商陆抗病毒蛋白(PAP)是一种广谱的植物抗病毒蛋白.本试验以商陆叶片为外植体,在附加0.5 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和0.5 mg/L 6-BA (6-苄氨基嘌呤)的 MS培养基上诱导愈伤组织,通过继代筛选培养获得3个稳定的愈伤组织株系:黄色系(Y-型)、粉色系(P-型)、红色系(R-型),不同株系具有不同的生长特性. Northern杂交结果证明不同株系中PAP基因转录水平有明显差异.离体烟草叶片摩擦接种实验表明,不同株系的蛋白提取液对TMV均具有显著抗性,其中黄色株系具有较明显的优势.商陆离体愈伤组织的研究为生产安全、高效的植物源抗病毒制剂提供了一定基础. 相似文献
17.
漂盘培育云烟87和三生烟,苗期接种TMV后0h,12h,24h,36h,48h,60h和72h分别取样测定其叶片和根系中PAL的活性,并以未接种TMV烟苗叶片和根系中PAL的活性为对照.结果表明:烟草与TMV非亲和性互作时,叶片和根系中PAL活性上升速度比烟草与TMV亲和性互作时PAL活性上升速度快;烟草与TMV无论是亲和性互作还是非亲和性互作,烟草叶片中PAL活性升高速度快于根系中PAL活性上升速度. 相似文献
18.
目的 构建人表皮生长因子受体-2(HER-2)特异性核酶(ribozyme,RZ)及其底物基因的体外转录载体.方法 设计合成RZ基因,将该RZ克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )中,测序鉴定.应用Trizol试剂提取MDA-MB-453细胞总RNA,RT-PCR扩增靶基因HER-2 cDNA片段,同样插入载体pcDNA3.1( ),测序鉴定.结果 经DNA测序分别证实合成的RZ基因序列和通过RT-PCR扩增的HER-2 cDNA序列克隆入pcDNA3.1( )中.结论 构建HER-2特异性RZ真核表达载体及含有HER-2 cDNA的载体,有助于进一步研究RZ对靶基因切割作用及雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER-2信号转导通路. 相似文献