鸢尾内生真菌Fusarium oxysporum YW1的分离鉴定及其次生代谢产物的研究

为了鉴定鸢尾(Iris tectorum)内生真菌YW1菌株并研究其活性代谢产物,通过菌株形态和其rDNA的ITS序列分析,鉴定其为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);运用薄层色谱、凝胶色谱和高效制备液相色谱方法从其代谢产物分离到5个生物碱类化合物,经质谱、核磁共振波谱技术鉴定为白僵菌素(1),4-氧代-乙酰丙酸(2),N-(4-氧代戊基)-乙酰胺(3),5-丁基-2-吡啶羧酸(4),5-丁烯-2-吡啶羧酸(5).生物活性测定结果表明化合物1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有较强的抑菌活性.化合物1、4、5对HepG2和Hep3B细胞株具有一定的细胞毒活性,IC50值在65.3～120.5 μg/mL.     

从深海沉积物中筛选具有抗菌、抗肿瘤活性的海洋真菌

从西太平洋近赤道区采集到的18个深海沉积物样品中分离到83株海洋真菌,采用滤纸片琼脂扩散法和MTT法分别对其发酵液乙酸乙酯抽提物的抗菌、抗肿瘤活性进行筛选.结果显示,有37株菌株对至少一种指示菌有抑制作用;有29株菌株对KB或Raji肿瘤细胞具有显著的抑制活性,分别占总供测菌株的44.6%和34.9%.在抗肿瘤活性菌株中,WP-M-1、DY-G-2、DY-C-2、WP-K-3和WP-Q-2等5株菌具有很高的活性,其发酵液乙酸乙酯抽提物对Raji细胞的IC50分别为5.000、1.064、2.796、1.920、0.520 μg/mL.研究结果表明,海洋沉积物来源的真菌中蕴藏着丰富的抗菌及抗肿瘤活性代谢产物产生菌,是开发抗菌和抗肿瘤药物的宝贵资源.     

海洋真菌Aspergillus sp. MF134的抗菌特性

采用固体发酵和液体摇瓶震荡培养两种培养方法获得丝状真菌Aspergillus sp.MF134培养物,并从中提取活性物质.应用纸片扩散法和比浊法测定提取物的抑菌作用,探讨MF134菌的抗菌活性及影响因素.实验结果表明,该菌固体培养物的提取物对枯草杆菌(Bacillus subtilis)和白色假丝酵母(Cancia albicans)有明显的抑制作用.其抗菌活性产物主要在孢子形成时产生的,而且与海水的存在有关,海水培养物所产生的抗菌活性高于淡水培养物.     

草珊瑚内生真菌SgG4抗植物病原真菌的活性物质研究

对草珊瑚内生真菌卷曲木霉Trichoderma spirale SgG4抗植物病原真菌的活性物质进行研究。采用菌丝生长速率法对SgG4发酵产物进行抑菌活性测定,采用硅胶柱层析法并结合活性追踪对发酵产物的活性萃取物进行活性物质分离纯化,运用核磁共振谱和质谱技术对活性化合物进行结构鉴定。结果表明,抗菌活性物质主要存在于发酵产物的乙酸乙酯萃取物中,该萃取物对13种植物病原真菌均有较好的抑制活性,EC₅₀值为0.000 2～2.475 7 g/L,其中对甘蔗凤梨病菌的抑制活性最好。从发酵产物的乙酸乙酯萃取物中分离出1个抑菌活性化合物,鉴定为木霉酸(trichoderma acid)。木霉酸在0.1 g/L时,对13种植物病原真菌均有抑制作用,其中对茶轮斑病菌、烟草黑胫病菌、甘蔗凤梨病菌和白绢病菌的抑菌率为100%,对其余9种植物病原真菌的抑菌率为21.43%～85.71%。可见,木霉酸的抑菌活性较好且抗菌谱广,在微生物源杀菌剂方面具有较好的开发应用前景。     

蛇足石杉内生真菌的分离和抗植物病原真菌活性

采用内生菌常规分离法对健康的蛇足石杉植株体内的内生真菌进行了分离和筛选.结果表明:从蛇足石杉的不同部位所分离到的内生真菌的数目有所不同,茎部最多,有100株;其次叶部73株;根部最少,仅7株.经初步鉴定,这180株菌分属于13属,即交链孢属(Alternaria)、头孢霉属(Cephalosporium)、球座菌属(Guignardia)、青霉属(Penicillium)、间座壳属(Diaporthe)、木霉属(Trichoderma)、茎点霉属(Phoma)、曲霉属(Aspergillus)、镰刀菌属(Fusarium)、轮枝孢属(Verticilliun)、组丝核菌属(Phacodium)、瓶梗青霉属(Paecilomyces)、刺盘孢属(Colletotrichum).采用抑制率法对所分离到的菌株稀释十倍的发酵液进行抗植物病原真菌实验,结果表明:部分菌株对病原菌有不同程度的抑制作用,其中对油菜菌核病菌抑制率达100%的有37株,对苹果炭疽病菌抑制率达100%的有27株.     

束骨姜黄化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性

采用硅胶层析、反相硅胶中压柱层析、高效液相等色谱技术对姜科姜黄属束骨姜黄(Curcuma xanthorrhiza Roxb.)根茎中的低极性化学成分进行了分离纯化,并通过MS和NMR等波谱技术确定了化合物结构,分离纯化化合物6个,分别鉴定为蓬莪术环氧酮(Ⅰ)、β 谷甾醇(Ⅱ)、愈创木内酯Guai-1(10),3,5,7(11),8-pentaen-2-on-11,8-olide(Ⅲ)、郁金二酮(Ⅳ)、莪术双环烯酮(Ⅴ)、花侧柏烯(Ⅵ)。化合物Ⅲ、Ⅵ为首次从该科植物中分离得到,化合物Ⅳ、Ⅴ为首次从该种中分离得到。对所分离获得化合物进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性测定,其中化合物Ⅳ、Ⅵ具有活性,化合物Ⅳ的TLC生物自显影最小抑制量为95μg。     

海洋真菌K38号代谢产物的研究

海洋真菌K38号从湛江红树林中分离得到,菌体为白色,种属未定,首次研究了该菌的代谢产物,从培养液的乙酸乙酯提取物中分离得到了4个化合物,通过波谱解析或与文献对照分别鉴定为(-)-byssochlamic acid、5-丁基-2-吡啶甲酸、5-丁烯基-2-吡啶甲酸、丁二酸。(-)-byssochlamic acid是首次从自然界中发现。前3种化合物的细胞毒活性未见报道,实验结果表明它们对hep-G2细胞抑制的IC50分别为35、110、和15μg/mL。     

博落回内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究

从健康博落回植株中分离内生真菌,用PDA培养基分离纯化菌株,结果纯化得到19株内生真菌,用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选,其中有2株博落回内生真菌对指示菌株有抑菌作用,占总分离菌株的10.53%,其中有一株内生真菌具有较强的抑菌活性。     

蕨类植物丙酮提取物对乙酰胆碱酯酶活性抑制作用的研究

目的 对采自浙江天目山的40 种蕨类植物丙酮提取物进行乙酰胆碱酯酶活性抑制作用的研究.方法 采用乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选模型.结果 在供试质量浓度在1 mg/mL时,40 种植物的丙酮提取物均具有明显的的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中假长尾复叶耳蕨、假蹄盖蕨和延羽卵果蕨等11种蕨类植物表现出较强的抑制活性,抑制率均大于90%,其余大部分植物的抑制率均大于60%.而在供试质量浓度在0.025 mg/mL时,只有少数植物表现出较高的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中虎尾铁角蕨的抑制率为(65.36 ± 1.65%),蜈松草的抑制率为(53.30 ± 3.32%),其余大部分植物的抑制活性均小于50%,甚至有些植物提取物不仅对乙酰胆碱酯酶没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用.结论 假长尾复叶耳蕨等蕨类植物丙酮提取物的乙酰胆碱酯酶抑制作用值得进一步研究.     

突托蜡梅叶化学成分及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

采用乙醇浸提法、液液萃取法得到突托蜡梅叶石油醚萃取物,用气-质联用法对其进行组成分析并用面积归一化法测定各化学成分的相对百分含量.使用改进了的Ellman比色法检测突托蜡梅叶石油醚萃取物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性.突托蜡梅叶石油醚组分共鉴定了33个化学成分,其中螺[2,3]己烷-4-1,5,5-二乙基-6-甲基含量最高,占总质量的61.311;,其次是喇叭烯氧化物Ⅱ,占总质量的2.042;.突托蜡梅叶石油醚组分的乙酰胆碱酯酶抑制率在1～10mg.mL-1范围变化明显,显示出一定的抑制活性,这为突托蜡梅叶的进一步开发利用提供了科学依据.     

红树植物内生真菌的种群动态及生物活性

2003年10月至2004年8月对福建龙海浮宫2种红树植物秋茄、木榄的内生真菌进行连续6次的分离，得到290株内生真菌．研究结果显示，木榄（Bruguiera gymnorrhiza）和秋茄（Kandelia candel）内生真菌数量高峰期分别为4月份和10～R12月份；青霉（Penicillium）、交链孢（Alternaria）、Dothiorella和无孢目是秋茄中的主要优势属；木榄内生真菌主要优势属为头孢霉（Cephalosporium）、交链孢（Alternaria）、青霉（Penicillium）等．不同宿主对内生真菌的季节分布有重要的影响．抗菌测定共筛选得到活性菌株40株，占总菌株数的13．8％；17株内生真菌对KB（人口腔上皮癌）和／或Raji（人B淋巴瘤）细胞具有抑制作用，占总菌株数的5．9％．生物活性菌株分布于青霉、交链孢、拟青霉、无孢目等10个不同的分类单元中，2种宿主植物内生真菌抗菌及抗肿瘤活性均有不同程度的季节差异性．     

土木香内生真菌YIGZ-3抗菌活性及菌种鉴定

采用组织分离法从药用植物土木香根、茎和叶片中分离出32株内生真菌,通过纸片扩散法测定20株土木香内生真菌,筛选出1株具有较强抑菌活性的菌株,命名为YIGZ-3.用薄层层析法（TLC）法和高效液相色谱法（HPLC）法检测其发酵液中的土木香内脂,通过形态学特征观察和rRNA基因内转录间隔区（ITS）序列分析对菌株进行鉴定.结果显示：菌株YIGZ-3对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌均有较强的抑菌活性,其发酵液中检测到与土木香内脂相似的化合物,根据真菌形态特征和ITS序列同源性鉴定表明菌株YIGZ-3为塔宾曲霉菌（Aspergillus tubingensis）.     

海洋木栖真菌抗肿瘤活性及其营养条件的影响

对从厦门海沧及漳州浮宫的红树林生态区分离到的177株海洋木栖真菌用MTT法进行抗肿瘤活性的测定，获得具有抗肿瘤活性的菌株共44株，占总受试菌株的24．9％，其中对KB瘸株有抑制作用的有12株．对Raji瘤株有抑制作用的菌株有43株，对这两种肿瘤细胞均有抑制作用的菌株有11株．并且考察了其中6株海洋木栖真菌在纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉和蔗糖为碳源的生物量和抗肿瘤活性。结果表明海洋木栖真菌在不同营养条件下的菌体生物量及代谢产物的抗肿瘤活性均存在差异，部分菌株在纤维素为碳源时，有最高的生物量和抗肿瘤活性，PDB培养基不宜作为抗肿瘤活性测定或生产发酵的基质．     

嗜盐真菌多样性及其抗肿瘤活性研究

为探讨海盐田中的嗜盐真菌类型及其抗肿瘤作用,采用稀释涂布法和平板划线法分离海盐田中的可培养真菌,并基于ITS基因序列分析鉴定菌株,通过FGFR2过表达和未过表达的肿瘤细胞增殖抑制活性以及酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）评价真菌的抗肿瘤作用。本研究分离得到11种嗜盐真菌,隶属于3科4属。真菌Epicoccum sorghinum（编号GXIMD02001）的提取物对FGFR2过表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231-（S252W）增殖有较强的抑制作用,其半抑制浓度IC₅₀为11.02 μg/mL,而对FGFR2未过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231几乎没有抑制活性,该提取物在1 mg/mL浓度下对FGFR2蛋白激酶活性抑制率为91.5%;两株真菌（编号GXIMD02004和GXIMD02009）对FGFR2表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-231（S252W）增殖抑制的IC₅₀为11.94-16.41 μg/mL;5株真菌的IC₅₀为219.2-449.7 μg/mL。嗜盐真菌（编号GXIMD02001）是首次报道具有靶向FGFR2抗肿瘤作用的海洋真菌,部分嗜盐真菌具有较好抗肿瘤作用,本研究为北部湾海洋微生物来源的抗肿瘤药物开发利用提供科学依据。     

蛇足石杉内生真菌 TL 的分离鉴定与药敏研究

从蛇足石杉植株中分离出内生真菌,通过马铃薯培养基（PDA）培养菌株,利用三点接种法分离纯化,筛选出一株优势菌株TL作为供试菌株通过菌落形态和培养特性观察以及显微摄影技术进行形态观察,对照《真菌鉴定手册》,经鉴定为半知菌亚门( Amon imperfect fungi )丝孢纲（Hyphomycetes）丛梗孢科(Moniliaceae)单端孢属(Trichothecium Link ex Fries)通过单因素试验与正交试验相结合,最终发现对供试菌株具有最佳抑菌效果的药物浓度组合     

食用菌污染真菌的调查研究

报道了食用菌制种及栽培中的污染真菌5科7属12种:毛霉科(Mucoraceae)1属2种,根霉属(Rhizopus),黑根霉(R.nigricans Ehrenb.),杭州根霉(R.hangchow Yamazaki.),点头根霉(R.reflexus Ehrenb.);长喙壳菌科(Ceratostomataceae)1属1种,毛壳菌属(Chaetomium Kunze et Schmidt),卷顶毛壳菌(C.murorumCda.);丛梗孢科(Moniliaceae)2属5种,青霉属(Penicillium)3种,皮落青霉(P.crustosumThom),葡酒色青霉(P.vinaleumGilman et Abhott.),类阿达青霉(P.adametzioides Abeex Smith.Br.),曲霉属(Aspergillus)2种,黄曲霉(A.flavusLink.),青霉状曲霉(A.penicilloidesSpegazzini);暗梗孢科(Dematiaceae)2属2种,链格孢属(Al-ternariaNees ex Wallr.)1种,细交孢链孢霉(A.tenuis Nees.),枝孢霉属(Cladosporium)1种,禾黑芽枝霉[C.herbarum(Pers.)Link];黑盘孢科(Melanconiaceae)1属1种,拟盘多毛孢菌属(Pestalotiopsis),拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsissp.).其中,杭州根霉(R.hangchow),点头根霉(R.reflexus),卷顶毛壳菌(C.murorum),皮落青霉(P.crustosum),葡酒色青霉(P.vinaleum),类阿达青霉(P.adametzioides),青霉状曲霉(A.penicilloides),禾黑芽枝霉(C.herbarum)8种真菌为河南省食用菌污染真菌新记录.     

从文蛤分离丝状真菌

分离海洋微生物是开发海洋药物的重要内容.对共附生在双壳贝文蛤的真菌,采用平板直接分离和液体富集后涂布分离两种方法,以及6种不同的分离培养基,分离到23株丝状真菌,其中9株丝状真菌在淡水及海水培养基中均能生长、繁殖.对分离菌(W16)的生长特性研究结果表明,盐浓度、pH值,以及海水和淡水的不同环境,对其生长和代谢有明显的影响.