单克隆抗体制备的一种特异电融合方法研究

常规制备单克隆抗体(McAb),一般采用的都是非特异融合方法,这就导致(1)分泌特异性抗体的杂交瘤阳性率不高、筛选工作量大;(2)不易得到高亲和力的McAb。近年来,Lo等和Wojchowski等发展了生物素-抗生物素-抗体-抗原介导的特异电融合,克服了上述缺点。然而,该方法较繁琐,不宜推广应用。我们用双功能连接剂将抗原直接挂到骨髓瘤细     

人-人杂交瘤,抗脊髓灰质炎Ⅱ型病毒Sabin株单克隆抗体的研究

一、前言 人-人杂交瘤的研究是举世瞩目的重大课题。科家家们正努力探索人源性单克隆抗体(以下简称单抗McAb)在临床上诊断和治疗的重要作用,希望能开辟单抗临床应用的新途径。目前制备人单抗的方法有四种:(ⅰ)人-人杂交瘤。(ⅱ)EB病毒转化B淋巴细胞,产生特异性抗体。(ⅲ)EB病毒转化与人-人杂交瘤相结合。(ⅳ)鼠-人杂交瘤。但总的看来,方法     

利用单克隆抗体研究人绒毛膜促性腺激素与受体的结合反应

人绒毛膜促性腺激素(hCG)是人胎盘绒毛膜分泌的一种糖蛋白激素,对其化学结构、理化特性、生理功能及代谢过程等已有较为系统的研究,但迄今尚未获得hCG的结晶,故对其立体结构及其与功能之间的关系还缺乏了解。近年来,杂交瘤技术的发展和单克隆抗体(McAb)的应用,为医学和生物科学开辟了新的前景,也为hCG结构与功能之间关系的研究     

微生物氧化十八烯-(9)-一酸生成1,18-十八烯-(9)-二酸研究

七十年代中期发展起来的用杂交瘤制备单克隆抗体(McAb)的技术已广泛应用于医学、生物学和农业各个领域。我国在农业研究领域内尚无建成杂交瘤细胞株的报道。农牧渔业部植物检疫实验所与中国预防医学中心病毒研究所、中国医学科学院基础所、中国科学院微生物研究所和新疆兽医研究所协作,用烟草花叶病毒(TMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与Sp 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得10株能稳定传代并分泌     

不连续蔗糖梯度离心和两相分配法纯化的小麦根细胞质膜的特性

为了研究高等植物细胞质膜上的质子泵ATP酶的作用机理,需要纯化细胞质膜。Hodges等首先使用蔗糖梯度法纯化燕麦根细胞质膜,现在广泛地应用着。Lundborg等应用水溶性多聚体(PEG/Dextran)两相分配法纯化小麦根细胞质膜后,两相分配法在质膜纯化上逐步引人注意,被认为是一种优于蔗糖梯度法的方法。Lundborg等用两相分配法分     

牛脑皮层Gs和腺苷酸环化酶在脂质体上的重建

腺苷酸环化酶体系是细胞膜上与信号跨膜传导密切相关的蛋白复合体,它由受体、激活型G-蛋白(Stimulatory GTP-binding protein,Gs)和腺苷酸环化酶(Ademylate cyclase,AC)所组成,体系中各组分的分离、纯化及其体外重建实验是研究信号跨膜传导分子机理的重要方法之一.牛脑Gs的分离和纯化已获成功,纯化的Gs含三个亚单位(α:Mr=45000—52000,β:Mr=3500—36000,γ:Mr=8000—11000),α-亚单位是其功能单位,Gs通过其α-亚单位的     

北京白鸭线粒体基因组的物理结构

线粒体基因组的分子遗传学是一个很有意义的领域。但是对鸟类线粒体基因组还很少研究。我们从北京白鸭肝脏纯化了线粒体DNA(mtDNA)并研究了它的物理结构,包括周长和分子量的测定及物理图谱的建立。线粒体及mtDNA的粗制品用常规方法制得。大部分大分子RNA用2MNaCl沉淀除去,最后用Sepharose 4B柱凝胶过滤纯化mtDNA。用紫外吸收     

三(羟甲基)氨基甲烷的纯化及其纯度鉴定

三(羟甲基)氨基甲烷简称[THAM或Tris],是一种化学、生物化学和医药的有用试剂。为此,本品的纯化方法及纯度鉴定就成为引人注目的问题。一般,Tris的纯化多采用重结晶法,Koch等曾在常压和氮气流下升华,但未能成功。我们采用真空升华法,达到纯化之目的,此法的优点是简单而又不致引入杂质,所得产品纯度不低于99.9％。     

噬菌体纯化方法的比较研究

噬菌体分离后,一般采用挑取法进行纯化而获得大小一致的溶菌班。但对某些细菌的噬菌体利用挑取法往往在平板上出现大小极不一致的溶菌斑。我们最初分离根瘤菌噬菌体时也观察到同样的清况,因此考虑到采用几种纯化的方法作比较,以获得大小一致的溶菌斑。本文报告这工作的结果。所采用的细菌为豌豆根瘤菌(Rhizobium legu-minosarum),由山东大学微生物教研室供给,编号59。一种是未经纯化的混合根瘤菌株(至少含两株,简称R_(59)),仅用于吸附实验的部分实验中;另一种是将R_(59)纯化后的根瘤菌株(简称R_5),本文所有的实验均采用此株。细菌为20—24小时的斜面培养,加液体培养基制成的细菌悬液。     

BmK AS,一种新型骨骼肌Ryanodine受体激动肽的氨基酸序列

前文曾报道从东亚钳蝎毒中纯化了一个新型骨骼肌Ryanodine受体激动肽(BmK AS).本工作将进一步报道该活性肽的完整氨基酸序列.由它的序列(共66个残基)计算出的最小分子量为7698u与经电喷雾质子光谱测定的7696.26u值基本吻合.其分子结构与同一蝎毒中已知的各类Na~ 通道配体间的同源性较差.但与一种独特的非洲蝎所产抗昆虫毒素(AaH IT),同属Na~ 通道配体间却存在着>80%的相似性.1 材料与方法BamK AS的纯化参照文献进行.分别用SDS-PAGE电泳法和电喷雾质子光谱仪鉴定纯化样品的纯度和分子量.     

铁离子对肌动蛋白聚合的影响

肌动蛋白(Actin)是细胞骨架蛋白之一.在一定的条件下其球状单体(G-actin)可以聚合为丝状聚合体(F-actin).细胞的形态学变化及游动性与此特性有关.已经证明一些金属离子(如K~+,Mg~(2+),Ca~(2+))在ATP存在下可引发肌动蛋白的聚合.我们曾报告Fe(Ⅱ)离子可引起体外培养的软骨细胞形态发生明显变化,并伴有细胞功能的变化.用鬼笔环肽标记方法观察到Fe(Ⅱ)作用于细胞骨架,使细胞骨架微丝系统发生了解组与重组.为了进一步研究Fe(Ⅱ)离子与细胞微丝的相互作用,探讨软骨细胞形态与功能之间的关系.本文利用从兔腿肌肉分离纯化的肌动蛋白,研究了Fe(Ⅱ)离子对肌动蛋白聚合过程的影响.1材料和方法1.1试剂三磷酸腺苷(ATP)购自Sigma公司,叠氨化钠(N_aN_3)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)为进口分装试剂;其余均为国产分析纯试剂.1.2肌动蛋白的分离与纯化参照文献[4]方法由兔腿肌肉分离提取丙酮干粉(-15℃可保存数月).取一定量丙酮干粉经离心、盐析及透析等步骤分离并纯化得G-actin.G-actin溶解在缓冲溶液G(2mmol/LTris-HCI,0.2mmol/L ATP,0.5mmol/L二巯基乙醇,1.5mmol/L NaN_3,pH=8.0)中在4℃下放置两周无明显聚合.由紫外分光光度法(A_(290))确定G-actin含量.     

用穆斯堡尔(Mssbauer)谱学方法研究Fe~(3+)、Fe~(2+)与胡敏酸的结合

近年来,研究者们应用穆斯堡尔谱学方法和其他光谱学方法研究了胡敏酸和富里酸中铁结合的物理、化学性质,以及铁的环境和氧化态。我们在经过纯化的胡敏酸中加入丰度为91.8％的~(57)Fe,制备了~(57)Fe-胡敏酸络合物。在不同pH条件下应用穆斯堡尔谱学方法研究了Fe~(3+)、Fe~(2+)与胡敏酸结合的性质。     

细胞外钙调素对花粉萌发和花粉管伸长的影响

钙调素(Calmodulin CaM)作为主要的多功能的Ca~(2+)受体,传统上被认为是细胞内信号转导(Signal transduction)途径中的主要信号分子。然而近年来国内外的一些研究结果表明CaM不仅存在于细胞内,也存在于细胞外。在植物系统中,Biro和孙大业等人(1984)首次发现燕麦胚芽鞘细胞壁中存在CaM,随后我室一系列工作,包括从小麦细胞壁中纯化CaM、用金标免疫电子显微镜从玉米根尖细胞壁中检测到CaM,以及从悬浮培养的白芷和胡萝卜胞培养介质中检测到CaM,证实了植物细胞外CaM存在的普遍性。另外,我室近年来还发现细胞外CaM可以促进白芷细胞增值、原生质体壁再生及第一次分裂,并且还在白芷和胡萝卜细胞外检测到了CaM结合蛋白(CaMBPs),并将其中主要的分子量为21 ku的CaMBP纯化。上述结果表明植物细胞外不仅存在CaM,而且细胞外CaM还具有生物学功能。     

东亚钳蝎毒中Alpha型昆虫神经霉素的HPLC纯化及其部分氨基酸顺序

蝎毒中存在着多种神经毒素,其中除个别小分子多肽成分被证实是神经细胞膜上钾离子通道的阻断剂外,绝大部分是一类选择性地影响电压敏感钠离子通道的、由60—70个氨基酸残基组成的单链多肽。蝎神经毒素作为一种工具物已被广泛地应用在神经电信号传导机制的基础理论研究中。文献[1,2]曾报道了从国产东亚钳蝎(Buthus martensi Karsch)毒中纯化的2个哺乳动物神经毒素(BmK Ⅰ和Ⅱ)和一个被命名为BmK IT的昆虫神经毒素,并分别确立了它们的完整蛋白初级结构。本文将报道东亚钳蝎毒中另一个昆虫神经毒素BmK aIT的HPLC纯化及其部分氨基酸排列顺序的测定结果。     

紫色非硫光合细菌铁氧还蛋白生化特性的研究

作者从紫色非硫光合细菌(Rhodopseudomonas capsulata)中,分离纯化获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的铁氧还蛋白(Ferredoxin),通过对其生物活性、分子量、铁、硫含量的化学分析,以及电子自旋共振波谱的研究,确认它是具有8Fe-8S活性中心结构的     

抗牛生长激素单克隆抗体的制备、纯化及单抗免疫吸附剂的研制

生长激素(GH)是垂体前叶分泌的一种多肽激素,它控制动物的生长,参与机体内各种代谢过程。近年来由于基因工程技术的发展,开辟了GH在经济动物方面应用的前景。因而如何利用先进技术纯化及分析这些基因工程产物,已提到日程上,其中单克隆抗体     

泡桐丛枝病类菌原体DNA的分子克隆与序列分析

类菌原体(MLO)是一类引起多种作物严重病害的病原,无壁,仅有单位膜,大小不一,难以纯化和体外培养,长期以来对这类病原一直缺少一种特异、灵敏及快速、简便的检测方法,也阻碍了对病原本身的一些理化特性和分子生物学方面的研究.我国泡桐遭受MLO 严重危害.本文以自然染病泡桐病组织为材料,进行了泡桐丛枝病(PWB)MLO     

东亚钳蝎毒中一个软瘫型抗昆虫神经毒素(BmK IT2)的初级结构研究

蝎抗昆虫神经毒素根据分子大小可分为长链(含约61或70个氨基酸残基)和短链(含约35个氨基酸残基)两大类,而前者又可根据作用效应的不同分为挛缩或软瘫两种类型.前文我们曾陆续报道了东亚钳蝎(Buthus martemsi Karsch)毒中一个挛缩型抗昆虫毒素(BmK IT)的分离及其初级结构以及一个alpha型(BmK αIT)和4个软瘫型抗昆虫毒素(BmKIT2至IT5)的纯化与鉴定.本文将进一步报道有关其中一个属软瘫型毒素(BmK IT2)氨基酸序列的测定分析结果.     

紫色非硫光合细菌铁氧还蛋白(Ferredoxin)的电子自旋共振(ESR)波谱

前文报道了,我们首次从紫色非硫光合细菌Rhodopseudomonas capsulata N-3菌株中,分离纯化获得了聚丙烯酰酽(酉安)凝胶电泳纯的铁氧还蛋白(Ferredoxin),通过对其分子量和生物活性测定,以及铁、硫含量的化学分析,初步认为它是具有八个非血红素铁和与其数目相等的酸性不稳定硫活性中心结构的铁-硫蛋白。     

细胞钓蛋白带法制备与红细胞分化有关的单克隆抗体及其基因的筛选

哺乳类红细胞在生长分化过程中,受一系列调控因子的影响。例如造血干细胞早期发生依赖于白细胞介素-3(IL-3L IL-9,红细胞激烈形成单位(BFU-E)红细胞集落形成单位(CFU-E)和红细胞生成素(EPO)协同作用,但对红细胞分化末期出现自然排核现象的作用机理尚未阐明。薛社普等提出并证明了哺乳类中晚幼红细胞可能存在红细胞分化(排核)因子(EDDF),为进一步了解红细胞排核与分化机理提供了理论依据。为进一步纯化该因子,本文报道以“细胞钓蛋白带法”进行单克隆抗体的制备及其基因的筛选。