医药基因工程产品的研究与开发

基因工程(亦称遗传工程)主要运用DNA重组技术,在特殊酶的作用上,在体外人工连接来自不同生物体的目的基因于有自主复制能力的载体的DNA中,建成重组DNA的质粒,再将此重组质粒传入受体生物细胞中去扩增和表达,达到遗传物质的转移,产生高纯度所需多肽和蛋白质。显然,基因工程的主要目的是按意图生产基因产物;此外,还有制取某些DNA片段和DNA探针,用于基因诊断和治疗;以及通过输入、替代     

基于染色体的重组工程系统的改进

重组工程是指通过重组酶催化DNA之间的同源重组,实现DNA克隆和修饰的一种基因工程技术.本研究从重组酶基因整合至大肠杆菌DH10B所获得的基于染色体的重组工程系统菌株LS-GR出发,利用菌株自身的重组工程系统和双链断裂修复功能,敲除了编码5’->3’单链DNA外切酶的recJ基因和编码3’->5’DNA外切核酸酶的sbcB基因,获得重组效率得以提高的菌株LS2002和LS2004.单链寡核苷酸修复和双链断裂修复实验表明所得菌株较LS-GR的重组效率有明显提高,对需要重组效率高的重组工程实验具有重要的应用价值.     

Red/ET重组AHBA生物合成基因簇打靶载体的构建与鉴定

为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根据靶基因A基因下游和P基因上游同源序列设计50 bp引物,中间插入卡那霉素抗性基因的DNA片段,进行PCR,获得外源DNA片段.经过电转化,将外源DNA片段和pKC1139-AOP重组质粒共转入含重组酶质粒大肠杆菌HS996/ pSC101-BAD-gba-(Tet).在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与重组质粒pKC1139-AOP上的AHBA基因簇的同源区域重组,构建了AHBA基因簇打靶载体.研究显示了Red/ET重组工作效率高、操作简单、精确的优点,可大大缩短构建打靶载体的时间.     

基因工程：农业发展的曙光

生物技术被公认为21世纪技术的核心和重要的支柱产业,它由4个部分构成:基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程.它的标志技术,一项是基因工程,一项是蛋白质工程.它是分子遗传学与工程技术相结合的产物.何谓基因工程?众所周知,生物的一切特性是由细胞内脱氧核糖核酸(简称DNA)的分子构造决定的,而一个DNA分子是由许多核苷酸片断携带着一定的遗传信息,是一个遗传因子,叫做基因.科学家则采用类似工程设计的方法,人为地转移或重组DNA中的基因,从而使生物体突变.基因工程也称为DNA重组、基因重组.而农业科技进步的龙头和被誉为农业第三次革命的生物技术,已在农业领域获得广泛应用,其前景极为广阔.正如美国科学家预示的那样,美国的第二硅谷将不再是半     

新世纪最具潜力的高科技产业--重组DNA制药业

恰在6月中旬山东省高新科技产业化工作会议在烟台闭幕后不久,2000年6月26日人类基因组NDA序列草图绘制完成！这是人类永远值得记念的日子,是人类科学史上具有重大理程碑意义的事情。标志着人类第一次在分子的水平上全面认识自我;也标志着后基因组时代即探索基因功能的时代的正式来临,从而为重组DNA制药业带来无限广阔的发展空间。 一、高速成长的重组DNA制药业 重组DNA制药业即是用现代化生物学技术(如基因重组技术,蛋白质工     

美国重组DNA咨询委员会的演变史

 重组DNA技术于1972年诞生于美国高校实验室。重组DNA咨询委员会（简称RAC）问世于1974年，并于2019年退出历史舞台，为美国基因操作技术的风险规制立下了汗马功劳。RAC在美国基因操作技术风险规制中跌宕起伏的演变史，是美国基因操作技术的风险规制由稚嫩逐步走向成熟的印证。通过探究RAC及其监管权是在哪些力量的作用下问世，还原RAC在基因操作技术风险阴霾笼罩下被政府当局质疑能力的历史图景，呈现美国基因治疗的基本规制路径，描述RAC审批首次基因治疗的经过以及RAC在首次基因治疗致死事件中的应对表现，阐述RAC退出历史舞台的过程和缘由，从而描摹一幅美国重组DNA咨询委员会演变历程的脉络图。     

甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

利用DNA重组技术，将杆状病毒极早期基因iel启动子基因克隆至重组质粒pGEM-Se39中，成功地构建了重组真核表达质粒pGEM-IE1-Se39。     

植物基因工程技术对现代农业的贡献

基因工程技术又称重组DNA技术或基因操作,它是通过人为控制的方法,改变生物的遗传性状,创造出生物新品种或新物种的方法.近年来,植物基因工程在理论上不断深入,在技术上日臻成熟,并在农业领域开始走向实际应用.     

枯草杆菌纳豆激酶基因的克隆及其在E.coli BL21(DE3)plysS中的表达

用CTAB法从枯草杆菌(纳豆株)中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得837bp的DNA片段,将该基因片断克隆到pMD18-T载体上,筛选重组子,通过限制性内切酶、PCR技术和测序分析确定该重组子所含插入片断为纳豆激酶基因．利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的融合表达载体,转化E．coli BL21(DE3)plysS后经IPTG诱导在大肠杆菌中高效表达,经SDS—PAGE电泳及bandscan软件分析融合蛋白分子量约为33．4kD,约占菌体总蛋白29．4％．     

基因工程技术的应用现状

基因工程是通过DNA重组技术,获得具有特殊生物遗传性状和功能的遗传工具生物体,基因工程技术广泛应用于农业、医学、食品工业等。本文就基因工程的应用现状综合阐述。     

带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物重组表达质粒pBI-GFP的构建

利用 DNA重组技术 ,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因 ( gfp)克隆到植物表达载体p BI-1 2 1中 ,成功地构建了植物重组表达质粒 p BI-GFP.     

植物养分转运蛋白的分离与克隆

本文着重讨论利用异源表达分离植物养分转运蛋白基因的策略和方法，以及利用分子生物学技术与DNA重组技术研究转运蛋白分离的三种路线.     

DDR相关蛋白缺陷引起的原发性免疫缺陷表型研究进展

在细胞内可变区基因(多样化基因)连接区基因片段重组(variable(diversity)joining recombination,V(D)J)与免疫球蛋白的类别转换重组(class switch recombination,CSR)过程中会产生程序性DNA双链断裂(DNA double strand break,DSB).当检测到DSB发生时DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)被启动.DDR缺陷的病人具有原发性免疫缺陷表型(primary immunodeficiency,PID).总结了V(D)J重组与CSR产生DDR的分子机制,综述了V(D)J重组与CSR过程中DDR相关蛋白缺陷引起的原发性免疫缺陷表型.     

揭示基因组功能的强大工具:基因打靶技术——2007年度诺贝尔生理学或医学奖成果简介

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术,是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞(ES细胞)技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的实验手段,具有定位性强、打靶后新的基因有随染色体DNA稳定遗传的特点,其方法包括基因敲除、基因敲入、点突变、缺失突变、染色体组大片段删除等,相关的基因工程技术包括转基因、基因沉默和基因捕获技术等,为生命科学、基因组学和疾病治疗等领域的研究提供了强大的工具。美国科学家Mario R. Capecchi,Oliver Smithies和英国科学家Martin J. Evans因基因打靶技术的开创性研究而获得了2007年度诺贝尔生理学或医学奖。     

生物素标记的PSTV互补DNA探针分子杂交的研究

用~(32)P标记的互补DNA探针进行分子杂交是基因重组和分子克隆中常用技术,然而由于~(32)P的半衰期短,从而为供应和保存带来不便,致使这一技术的应用受到一定限制。近年来国内外均十分重视研究应用非同位素标记DNA探针的技术。我们用Biotin—11—dUTP(Bethesda Research Laboratories)以缺口平移(Nick translation)标记了pST-B14和pST-B5 DNA中的PSTV cDNA插入顺序,制备出生物素标记的DNA     

人M-CSF与SCF融合蛋白的构建及其在昆虫细胞中的表达

应用重组DNA技术构建M-CSF与SCF的融合基因并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pVL1392中,通过与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地夜蛾细胞Sf9,融合基因插入AcNPV基因组.重组病毒感染单层Sf9细胞后,表达产物分泌到胞外培养液中,用MTT比色法和TF-1细胞株可检测到表达产物与IL-3的协同效应.上述研究为开发具有应用价值的新型细胞融合因子奠定了基础.     

21世纪生物技术

21世纪70年代出现的基因工程技术由于能在体外按设计要求构建重组DNA分子,并能将重组分子转移到任何所需的机体中,打破了基因转移的物种界限,因此不仅使生命科学全面进入了分子生物学时代,而且迅速开拓了现代生物技术产业。现代生物技术是以基因为源头、基因工程为主导技术,与其他高技术互相渗透和交叉的高技术,21世纪生物技术产业成为知识经济中对人类和社会产生深远影响、并改变经济结构的支柱产业。     

重组抗栓人胰岛素基因工程菌高密度发酵研究

通过重组DNA技术构建抗栓人胰岛素突变体基因,并转化入大肠杆菌宿主菌,构建基因工程菌株.通过高密度发酵技术对重组菌株进行大规模培养.通过对培养条件包括温度、溶氧量、pH值、补料等的调整,达到最佳培养状态,进而获得高产量的重组大肠杆菌菌体.检测大量培养重组大肠杆菌的表达率,并对表达产物进行纯化与进一步的理化分析鉴定.     

ERF类转录因子OPBP1基因重组质粒的构建及蛋白质表达

探讨了OPBP1基因的蛋白质表达方法.利用DNA重组技术,将pGEM-OPBP1和pET-32a分别进行SalⅠ和NotⅠ双酶切,连接,获得了重组质粒pET-OPBPI质粒.IPTG诱导其蛋白质表达.获得了高表达量的OPBP1融合蛋白.     

人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究

将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游,构成重组转移载体pVL1393hGH,将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9,通过体内同源重组,hGH基因取代多角体蛋白基因,从而整合到病毒基因组上,经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因,通过反复病毒空斑纯化,获不含多角体的重组病毒,利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．