牛体外受精技术研究的现状与展望

系统综述了牛体外受精技术研究的现状及存在的问题．并对今后的研究方向和前景提出了展望。牛卵母细胞可在不含血清的成熟培养液中获得受精及胚胎发育能力，促卵泡素、促黄体素及上皮细胞生长因子均对这一过程具促进作用。肝素是迄今最为有效的精子获能处理方法，但在受精过程中对精子获能起决定作用的是卵丘细胞和卵母细胞本身。提高受精质量可明显提高受精卵的胚胎发育能力。体外受精卵可通过改善培养条件或与体细胞进行复合培养发育到囊胚阶段．但后者更为稳定可靠。目前，牛卵母细胞的体外受精分裂率可达８０％，囊胚发育率达４０％左右．两枚鲜胚的移植妊娠率可达５０％～６０％．而两枚冻胚的移植妊娠率仅３０％～５０％。因此，尚需进一步提高体外受精胚胎的活力和改进胚胎的冷冻保存技术。     

胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

小鼠胚胎冷冻保存与移植

<正> 为了建立小鼠胚胎库,从1986年开始筹建实验动物低温生物学研究组,首先对小鼠胚胎冷冻保存与移植进行研究。两年多来,冻存小鼠胚胎取得成功,在冻存于-196℃液氮中,经10天至半年时间,解冻复苏后,形态学鉴定,其存活率可达58.99％。自从1972年D.G.Whittingham和I.Wilmut首先研究冷冻小鼠胚胎成功以后,     

小鼠胚胎一步冷冻法

本文描述了冷冻小鼠胚胎直接投入液氮的简单一步法。这项研究的主要目的是评价小鼠胚胎在下列不同浓度的甘油和蔗糖混合液中预脱水后冷冻胚胎解冻后的活力。同时研究了脱水前甘油的预处理及胚胎阶段的不同效果。当蔗糖浓度保持恒定(0.25M),甘油浓度变化范围为1.0～4.0M时,以甘油浓度2.0M冷冻胚胎解冻后活力最高(67％)。采用甘油预处理并不优于不预处理。当甘油浓度保持恒定(2.0M)。蔗糖浓度变化范围为0—1.0M时,发现在0.5M蔗糖中冷冻胚胎解冻后活力最佳(81％)。桑椹胚存活率优于囊胚(86％),VS72％)。与鲜胚移植54％的出生率相比较。胚胎冷冻最佳处理(2.0M甘油+0.5M蔗糖)解冻后移植出生率为41％。这项技术可实际应用于家畜胚胎的冷冻与解冻。     

澳洲劳莱恩牛MOET育种技术的研究

研究了澳洲劳莱恩牛的MOET技术,结果表明,PMSG PGc同情发情处理黄牛的发情率明显高于PGc单独处理(P<0.01);超数排卵处理青年劳莱恩牛也能获得较高的可用胚胎数(6.35±2.12枚/头);劳莱恩牛鲜胚移植受体的受胎率明显高于冻胚(53.33% vs 46.39%),差异极显著(P<0.01).     

兔桑椹胚胎细胞周期同步化及核移植后的发育能力

进一步改进兔供体桑椹胚Ｇ１期可逆性同步化方法，并比较Ｇ１期核移植胚胎和未同步化核移植胚胎在体内的发育能力。将兔早期１６细胞胚用秋水仙胺和ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ处理适当时间，这时期胚胎细胞处于３２细胞期的Ｇ１期。经扫描显微分光光度法测定表明，没有ＤＮＡ合成。经两种药物同步化处理，胚胎正常细胞周期、分裂及移植前发育均不受影响。与用未同步化３２细胞胚细胞核移植相比，用同步在Ｇ１期胚胎细胞进行核移植后，显     

哺乳动物早期胚胎活力的测定——活体及非活体染色法

家兔及小白鼠的早期胚胎(2细胞—桑椹胚),用中性红及台盼兰进行活体及非活体染色,可以将活胚及死胚区别开来。我们对225个小白鼠早期胚胎和239个兔早期胚胎进行染色,获得染成淡粉色鼠胚105个,兔胚201个,染成兰紫色的鼠胚37个兔胚14个。经过早期胚胎的体外培养及体内移植实验证明:染成淡粉色的胚胎为活胚,染成兰紫色为死胚。本实验共培养了46个着淡粉色兔胚,经过14小时培养以后,其最高发育率可达90％。将6个着淡粉色兔胚进行移植,第14天剖腹检查受体,其受胎率为100％。将6个染成兰紫色的兔胚在体外培养,经过24小时以后其发育率为O％。6个兰紫色胚经过移植,其受胎率为O％。     

兔卵输卵管培养与再移植后的成活力

本文研究分裂的兔卵在输卵管内培养与再移植。目的是观察这种胚胎的成活力,验证这种方法的实用价值。分裂期的兔卵在输卵管内培养2～3天,发育到胚泡,然后再移植。移植分自体移植和异体移植。总共再移植24例,13例母兔妊娠,产仔9窝,获仔兔21只,怀孕率54.17％,成活率25.61％.     

客观地认识动物克隆问题

要获得遗传物质完全相同的生物体,必须应用克隆技术。克隆（ｃｌｏｎｅ）即无性繁殖系,指单一的亲代细胞通过无性繁殖而产生的一组细胞。克隆动物是把动物的细胞核转移到成熟的去核卵细胞质内而发育成的动物个体,它可分为胚型克隆和无性克隆两种。胚型克隆动物是指用早期胚胎细胞核作供体移植、克隆所形成的动物。其主要克隆方式有胚胎分割,胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和胚胎嵌合。目前世界上已经完成了对小鼠、家兔、山羊、绵羊、猪、牛、马等动物的胚胎分割克隆;用胚胎细胞核移植技术克隆成功了小鼠、家兔…     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

报道了胚胎冷冻技术的发展及现状。根据它的发展分别介绍了慢冻慢解法、常规快速解冻法、玻璃化冷冻、1步细管法冷冻、1步冷冻和半胚冷冻，并且就胚胎冷冻保护剂、冷冻方法、解冷方法、冷冻保护剂的脱除及胚胎发育时期等对胚胎冷冻效果的影响进行了探讨。     

昆明小鼠胚胎移植技术的研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响,以提高胚胎移植率。方法采用经超数排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将1-细胞胚、2-细胞胚和桑椹胚、囊胚分别移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中,妊娠产仔。结果移入1-细胞胚、2-细胞胚、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论2-细胞胚的移植可提高小鼠的胚胎移植成功率,子宫移植可提高小鼠的产仔率。     

实验小鼠胚胎冷冻技术实验研究

本文在建立和引进实验小鼠超排卵技术、卵采集技术、胚胎输卵管移植技术的基础上 ,应用小鼠初期胚的快速冷冻复苏法对实验小鼠C5 7BL 6J、BDF1 、A wy及昆明种小鼠进行了初期胚的冷冻保存与仔鼠存活率的研究 ,并将冷冻复苏胚与非冷冻胚经移植后的生存率作了比较 ,均取得了重复性的结果 ,可望为实验小鼠胚胎种子库提供参考依据。     

小鼠胚胎移植研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响以提高胚胎移植率。方法采用经超量排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚、移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中妊娠产仔。结果移入单胚卵、双胚卵、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论移植双胚卵可提高小鼠的胚胎移植成功率。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

常规体外培养的胚胎桑椹胚以上发育率低,胚胎质量不高及移植环境不适合可能是导致IVF-ET成功率低下的原因。目前,国外一些实验室尝试将多种哺乳动物乃至人的胚胎与输卵管组织或上皮细胞进行共培养,发现有促进胚胎体外发育及提高妊娠率的作用,本课题组将人输卵管上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对胚胎体外发育及胚胎质量的影响。结果显示：共培养的胚胎24h后大部分发育到4细胞期以上,发育快的已达桑椹胚。培养48h后共培养的胚胎大部分发育成桑椹胚,有些已开始形成囊胚腔。到72h,正常发育的共培养胚胎形成囊胚和孵出囊胚。3个观察…     

种植前基因诊断综述

种植前基因诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)又称为第三代试管婴儿，它是指从体外受精的胚胎中取1～2个细胞或者取卵细胞的第一极体在种植前进行基因分析，可用以鉴定胚胎性别，分析胚胎染色体，然后移植基因正常的胚胎，从而达到优生优育的目的。     

不同融合条件及激活方法对体细胞克隆绵羊胚胎发育的影响

对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代，将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后，作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产，用细胞驰素B法与离子霉素＋6－DMAP法对核移植胚胎（重构胚）在电融合后进行化学激活，然后在38.6度，5％CO2，最大相对湿度条件下，进行体外培养（IVC），重构胚卵裂率分别为37．8％与43．8％（51／135与81／185），囊／桑葚胚率分别为9．8％和12．3％（5／51和10／81），在融合电压1．5kV/cm，持续时间30us，脉冲次数为2次的条件下，孤雌激活胚胎的卵裂率和囊／桑葚胚率分别为81．0％和12．9％。     

鸡胚早期发育中组织者的起源及其诱导能力

本研究利用活性荧光染料ＤｉＩ，对鸡胚的期和期胚盘进行标记，以确定组织者的部位。并将组织者区域的细胞移植到宿主胚胎中，验证其诱导次级胚胎的能力。结果表明，期、期胚盘的组织者细胞位于胚盘中轴的后端，其细胞的性质已被决定，能够诱导次级胚胎的发育，本研究结果支持原条的发育与组织者细胞性质不是受下胚层诱导的观点。     

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物,反应缓冲液中Ｍｇ＾２＋浓度,循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响。并对１８个胚胎进行了性别鉴定,移植３８枚性别鉴定后的胚胎,成功产下２头与预测性别一致的牛犊,胚胎性别可鉴率为９４．１％,预测性别符合率为１００％。     

落叶松体细胞胚胎发生的研究进展

落叶松体细胞胚胎发生属于间接体细胞胚胎发生途径，主要包括三个步骤：胚性培养物诱导、继代与增殖及其体胚成熟和萌发。供体植物的基因型及其培养基的成分等是影响落叶松体细胞胚胎发生的重要因素。体细胞胚胎发生是一种有效的大规模克隆繁殖方法，并且在许多有重要经济价值的树种中都取得了很大进展，目前已从30多种松柏类植物诱导出体细胞胚。落叶松体细胞胚胎发生的应用大多数集中于胚性培养物的超低温保存、原生质体培养、转基因等技术，并对落叶松体细胞胚胎发生的研究趋势作了展望。     

绒山羊胚胎的体外培养,冷冻保存和移植的研究

采用体外培养和冷冻保存的方法将起排处理后的绒山羊２～８细胞期胚胎经体外在Ｍ１９９＋ＦＣＳ（对照组）、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＦＣＳ、Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＥＮＧＳ和，Ｍ１９９＋ＯＥＣ＋ＮＳＳ的培养基中分别进行培养以后，选取发育为桑椹胚和早期囊胚期胚胎分别以１０％Ｇｌｙ、１０％ＥＧ为防冻剂和玻璃化方法进行冷冻保存，并将用常规和玻璃化法冷冻保存的胚胎解冻后进行移植．结果表明，体外培养胚胎的囊胚的发育率在四个培养处理组中分别为１２．５％、７０．６％、８１．８％和７３．９％，对照组与添加ＯＥＣ处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１），囊胚发育率在添加ＦＣＳ、ＥＮＧＳ和ＮＳＳ的实验组之间无明显差异．经冷冻保存的桑椹胚和早期囊胚的冷冻解冻胚的形态正常率在甘油、乙二醇和玻璃化三个冷冻处理组中分别为７５．０％、８６．７％和７５．０％，发育率分别为５８．３％、７８．８％和８０．０％．冷冻解冻胚的移植妊娠率在三个处理组中分别为５０％、７５％和５０％，产羔率分别为３０％、６８．８％和５０％．采用乙二醇冷冻绒山羊胚胎产生的效果优于甘油和玻璃化方法的冷冻效果。