应用基因枪将外源基因导入小麦幼胚获可育的…

以小麦晋２１４８，７５０６，７６０６，５９２６四个春性品种的幼胚为材料，用ＪＱ７００型高速基因枪将ＢＰＩ１２１质粒导入小麦，研究并确立了轰击速度、钨粉直径、上方式、ＤＮＡ浓度等基因枪转化参数。在以上研究基础上进一步将导入外源基因的小麦幼胚质片细胞通过胚胎发生途径再生成植株。供试的４个品种中有３个（７５０６，７６０６，５９２６）获得了可育的转基因植株。ＧＵＳ基因的转化频率分别为０．６％，０．６％和１     

农杆菌介导GNA基因对水稻的遗传转化

在ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒中插入带有ＲＳｓ－１启动子的ＧＮＡ基因,并利用农杆菌介导的遗传转化将其导入水稻的微不定芽受体,得到了再生植株。ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ的检测结果初步证明ＧＮＡ基因已经整合到水稻的基因组中并得到表达。     

用微弹轰击法将GUS基因导入香蕉茎尖组织细胞

用在弹轰击法将外源ＤＮＡ导入香蕉（Ｍｕｓａ，ｓｐｐ）茎尖细胞，以ＧＵＳ基因作为报告基因，用Ｘ－Ｇｌｕｃ浴液对ＧＵＳ基因表达产物进行组织化学鉴定。样品材料细胞中发现有明显的蓝色斑点，而对照则没有。实验说明用微弹轰击法可以将外源基因导入香蕉茎尖组织并在其中成功表达，这为香蕉的外源基因导入工作提供了新的有效途径．     

启动子对外源基因在转基因植物中表达的影响

将来自ｐＢＩ１２１质粒的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子片段插入到ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与ＧＵＳ基因之间，构建了串联的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子载体ｐＬＢ３８．通过三亲交配，将ｐＢＩ１２１及ｐＬＢ３８分别转移到含ｐＧｖ３８５０的农杆菌中，成为适合本研究的双元载体。以叶圆盘转化法将外源基因转入烟草，获得了２种转基因植株。经ＤＮＡ分子杂交、ＮＰＴⅡ点分析、ＧＵＳ荧光定性及定量分析，证明外源基因已整合进烟草基因组并获得表达。ｐＬＢ３８的ＧＵＳ表达量为ｎＢｌ１２１的３～４倍，这表明启动子数目的不同会直接影响其启动基因的表达水平。     

金鱼草Del基因影响烟草花色素苷的研究

采用根癌农杆菌介导法,获得转Ｄｅｌ基因的转基因烟草植株．对９株可能的转基因植株（Ｔ０代）ＤＮＡ进行ＮＰＴⅡ基因的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,其中８株显示ＮＰＴⅡ基因阳性．对其中５株开花的阳性植株进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,全部显示ＤｅｌＤＮＡ阳性．Ｋｍ抗性Ｔ１代转基因植株ＤＮＡ进行ＤｅｌＤＮＡ的ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析,结果显示全部含有ＤｅｌＤＮＡ．在５３０ｎｍ处测量Ｔ０代转基因植株中花色素苷含量和分布情况,３株转基因烟草的花萼、花冠和雄蕊部位花色素苷含量增加,而在雌蕊和叶中减少．在一定程度上验证了Ｄｅｌ基因的生物学功能,证实并补充了Ｇｏｏｄｒｉｃｈ等关于色素沉积模式的论述．     

转多个抗真菌蛋白基因水稻植株的获得及其抗稻瘟病菌的？…

用基因枪法将水稻碱性几丁质酶（ＲＣ２４）基因、芷蓿葡聚糖酶（β－Ｇｌｕ）基因、大麦核糖体失活蛋白（Ｂ－ＲＩＰ）基因和潮霉素基因同时导入籼稻品种（七丝软占）中,获得了个潮霉素抗性再生系,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证明２－３个抗真菌蛋白基因已整合到水稻基因组中,初步抗性鉴定表明ＲＯ代转基因水稻植株对稻瘟病菌的抗生有所提高。     

转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性研究

利用基因枪法将含潮霉素抗性基因、ＧＵＳ报告基因和雪花莲凝集基因的２个质粒ｐＷＲＧ１５１５和ｐＲＳＳＧＡ１共同转化粳稻品种鄂宜１０５的成熟胚诱导的愈伤组织,从轰击的１５２块愈伤组织中共再生出２６株独立转基因植株,ＰＣＲ／Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析发现,７３％的转基因植株含有所有３个外源基因,遗传分析证实外泊基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传,从其Ｒ１代亲本为孟德尔３：１方式遗传的Ｒ２代中,鉴定出     

杀虫晶体蛋白基因CryIA（c）表达载体构建与表达研究

为了检测改造后的ＣｒｙＩＡ（Ｃ）基因在植物中的表达，将其构建成表达载体并采用膛杆力介导的方法导入蕃茄，通过对转基因番茄植株的ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｍ和Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔ分析，证实外源ＣｒｙＩＡ（ｃ）基可整合到番茄基因组中，并能顺利表达，为该基因在其它农作物上的提供了依据。     

GUS基因对红豆草部分酶解小细胞团的转化

采用电击法，将大肠杆菌的ＧＵＳ基因（β－葡糖苷酸酶基因为报告基因）导入红豆草部分酶解小细胞团，利用ＧＵＳ基因产物与底物Ｘ－Ｇｌｕｃ反应的组织化学定位试验，检测到ＧＵＳ基因在受体组织中的表达。同时，对部分酶解的程度、不同电压条件下的转化效率以及两种质粒的不同启动子对ＧＵＳ基因表达的强度等进行了讨论。     

菠萝DNA导入黄瓜的初步研究

以菠萝为供体,黄瓜为受体,应用花粉管通道导入外源ＤＮＡ技术,在黄瓜自花授粉后直接导入菠萝ＤＮＡ,导入后代在产量、糖分含量等性状上产生了变异。结果表明：利用花粉管通道直接导入外源ＤＮＡ是改良黄瓜品种的有效技术,这一技术将在作物品种改良及远缘杂交方面起着非常重要的作用。     

GUS和HPT基因的基因枪法转化水稻

以水稻（丹粳－５号）愈伤组织为受体材料，采用基因枪法将含有ＧＵＳ和ＨＰＴ基因的ＣＭ２质粒导入水稻细胞．经过５０ｍｇ／Ｌ的潮霉素筛选，获得抗性愈伤组织，并在同样筛选压力下诱导分化成苗，获得抗性苗．共获得１７个抗性克隆．ＧＵＳ组织化学检测表明，有１２个克隆为ＧＵＳ阳性，ＧＵＳ和ＨＰＴ基因共表达率为７０％左右．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子检测证明ＨＰＴ基因已整合到水稻基因组中．     

用电穿孔法将外源基因高效导入水稻胚盾片细胞

利用电穿孔法将外源基因导入未经前处理的水稻成熟胚盾惩细胞，质粒为ｐＡＣＴ１－Ｆ，其上带有受水稻肌动蛋白基因ａｃｔｉｎ１启动控制的ＧＵＳ（ｕｉｄＡ）报告基因，电穿孔实验的条件为１００μｇＤＮＡ／ｍｌ缓冲液，３１０Ｖ／ｃｍ场强及９００μＦ电容，通过ＧＵＳ基因瞬时表达实验室证明只需一次脉冲处理便可在一个胚上获得几十个数百个转化细胞，并且发现盾片细胞较胚上其它部位的细胞更易于转化。     

BYDVCP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性愈伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病基因的质粒Ｐ＾ｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒Ｐ＾ＢｌＡｅｔＳＮ导入融合细胞中。经抗性筛选获得抗潮霉素的阳性克隆并再生植株。对再生植株作ＰＣＲ检测表明，     

一个简单高效的甘蓝转化系统的建立

将苗龄为５－７天的甘蓝子叶柄下胚轴分别培养于再生率很高的两个培养其中。当培养７－１０天时，通过基因枪轰击，进行ＧＵＳ基因的转移，结果表有，ＧＵＳ基因导入了甘蓝细胞并进行了瞬间表达。     

花生DNA导入大豆的后代POD SOD活性及其同工酶谱分析

利用花粉管通道技术，将花生ＤＮＡ导入大豆中，得到变异后代Ｄ３．取结荚期大豆、花生和Ｄ４的不同器官为测试材料，对超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）活性及同工酶特性进行了比较研究．结果表明，导入后代Ｄ４种皮的ＳＯＤ、ＰＯＤ活性明显增高，种子活性降低；其同工酶在凝胶上的分布及染色活性均表现出与受体和供体不同的特征，有的酶带明显来自花生ＤＮＡ．     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

转BADH基因玉米的获得及其耐盐性

利用花粉管通道技术将甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因导入玉米，以提高玉米的耐盐性．对1286株转化玉米进行PCR检测，共有16株呈阳性，转化率为1．2％．Southern Blot进一步证明BADH基因已经整合到玉米基因组．将阳性植株的后代（T3）用含1.2％NaCl的Hogland营养液每日1次浇灌。14d后对玉米叶片的相对电导率和叶绿素含量进行测定．结果表明在同样的盐胁迫条件下．转基因植株所受到的盐伤害明显较对照植株轻，说明转入的BADH基因可以提高玉米的耐盐能力．     

青菜花粉管通道法导入外源DNA的研究初报

采用花粉管通道法，将青菜株系７５Ｆ５、１４号大白菜、紫阳等三个品种的总ＤＮＡ及质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ ＤＮＡ导入青菜６０５品系，收获青菜种子。种子发芽后分别提取约两周苗龄的小苗总ＤＮＡ，并经ＥｃｏＲⅠ酶切，以ｇｕｓ基因片段为探针做子杂交，证实了外源ｇｕｓ基因已整合到青菜６０５品系中；田间观察还获得了一株与供体大白菜花形相似的变异株。     

导入野生大豆DNA小麦后代的农艺性状研究

用花粉管通道法将野生大豆总DNA导入小麦，获得了转基因小麦，其后代的农艺性状有较大的变化。田间实验分析了变异系小麦植株与对照植株在叶片的光合速率、蒸腾速率、叶面积及株高、穗粒、穗重等性状上的差异。t检验结果显示，变异系小麦在叶面性状及产量性状上的差异是显著的，外源DNA的导入改善了植物的农艺性状，并在后代中表达，为选育高产、优质的新小麦品种提供了依据。     

转基因马铃薯植株中外源基因PCR扩增和拷贝数测定

本文报道一种简便、快速、可靠，同时又适合大量转基因植株中外源基因测定的ＰＣＲ检测技术，同时改进了转基因植物中总ＤＮＡ提取方法，并且用窄缝转移杂交测定了转基因植株中外源基因拷贝数。