电场诱导酵母菌原生质体融合的研究──原生质体分离、电融合条件及其机制的研究

研究了热带假丝酵母野生株１０４５及其突变株ＳＤ１的原生质体分离、电击诱导融合的诸条件以及融合子的再生。得出了原生质体的最佳生成条件。用９９９ｋＨｚ，２４０～４００ Ｖ／ｃｍ的高频交变电场使原生质体横向电泳形成珠串，以脉宽 ４０ μｓ，幅值 １６００～２ ８００ Ｖ／ｃｍ的直流脉冲可使原生质体融合，净融合率达６５％。采用较低幅值的多个脉冲有利于融合。电击液中加入ＣａＡｃ场、ＭｇＡｃ２及白蛋白可大大提高融合率，用光刻镀金方法设计了适用于微生物的多电极融合小室。对膜融合机制进行了探讨。     

降解精对苯二甲酸生产废水特化菌株性能测定

将黄孢原毛平革真菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ,ＰＣ）真核细胞与ＹＺＩ土著细胞原核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈ融合子;再将Ｆｈｈ与酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ,Ｙ９９）真菌真核细胞的原生质体进行融合,构建而成Ｆｈｈｈ融合子。Ｆｈｈ与Ｆｈｈｈ是跨真核原核两界细胞的两株融合子,对制霉菌素和链霉素同时存在抗性,孢子和菌丝形态均不同于ＰＣ菌。     

黑曲霉(Aspergillus niger)原生质体电融会(Ⅰ)─黑曲霉原生质体形成与再生的研究

通过紫外诱变获得两株稳定的黑曲霉营养缺陷型Ｍｕ２（Ｍｅｔ－）和Ｄ１２（Ｃｙｓ－），并首次证实低温黑暗保存数小时对黑曲霉突变株具有稳定作用。系统地研究了菌龄、渗透压稳定剂、温度、酶的浓度和酶解系统等因素对黑曲霉原生质体形成的影响．采用２％溶壁酶加０．５％纤维素酶，获得了大量的原生质体。在显微镜下观察原生质体形成和再生过程， Ｍｕ２和 Ｄ１２再生率分别为 ５４％和 ３３％。原生质体在正弦交变电场（１ＭＨｚ，４５０ Ｖ／ｃｍ）作用下形成珠串，在高压电脉冲（强度 ９．０ ｋＶ／ｃｍ、时程 ２５ μｓ）触发下，发生融合。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究：Ⅲ.诱变…

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出５３－Ｇ３８－６，产酶活的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌５３－Ｇ３８－Ｋ６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ。     

单倍体小麦与簇毛麦的不对称体细胞杂交

以小麦杂２４２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ,ｃｖ．２４２）花药来源的愈伤组织分离原生质体作受体;簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａｖｉｌｏｓａ）幼胚来源的愈伤组织原生质体经２２０μＷ／ｃｍ２紫外线照射３０ｓ作供体,用ＰＥＧ法诱导融合,最后获得再生愈伤组织．对融合再生的４个最先长大的细胞系进行染色体,同工酶和ＲＡＰＤ分析．结果表明,这些细胞系均为体细胞杂种,ＲＡＰＤ技术可作为小麦体细胞杂种早期鉴定的有效方法     

小麦与高冰草原生质体融合及再生能力的恢复

以普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）济南１７７悬浮细胞来源的原生质体与高冰草（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎｅｌｏｎｇａｔｕｍ）愈伤组织来源的原生质体用ＰＥＧ法诱导融合．由于来源材料的长期继代，小麦原生质体的再生能力已很低；高冰草原生质体不能分裂；而融合产物却能高频率的分化出完整植株．融合再生植株的表型类似高冰草，染色体数目和同工酶谱亦然．但它们早期发育的模式与小麦相似．     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,以摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,     

刺槐根瘤发生的超微结构研究

通过扫描电镜和透射电镜观察刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ）幼瘤的超微结构。刺槐根瘤中侵入线丰富、粗大，内具有高电子密度基质，基质中包埋大量根瘤菌。根瘤菌通过降解侵入线壁和从侵入线无壁泡中释放两种方式进入宿主细胞质     

高山雪鸡卵壳及壳膜超微结构的观察

以扫描电镜观察了高山雪鸡（Ｔｅｔｒａｏｇａｌｌｕｓｈｉｍａｌａｙｅｎｓｉｓ）卵壳和壳膜的超微结构。其卵壳由５层构成，由内向外分别是基帽层，乳突层，栅栏层，结晶层和护膜层。气道外孔有益层。栅栏层有少量气泡（Ｖｅｓｉｃｌｅｓ）．壳膜由３层膜构成，外层和中层为纤维膜，内层为非纤维结构的平滑的薄膜。本项观察发现了引导栅栏层形成的钙化桥。     

单倍体小麦与簇毛麦的不对称体细胞杂交

以小麦杂２４－２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ,ｃｖ．２４－２）花药来源的愈伤组织分离原生质体作受体;簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａ ｖｉｌｌｏｓａ）幼胚来源的愈伤组织原生质体经２２０μＷ／ｃｍ＾２紫外线照射３０ｓ作供体,作ＰＥＧ法诱导融合,最后获得再生愈伤组织。以融合再生的４个最先长大的细胞系进行染色体,同工酶和ＲＡＰＤ分析。结果表明,这些细胞系均为体细胞杂种,ＲＡＰＤ技术可作为小麦体细胞杂种     

烟草原生质体活力检测和细胞核染色方法的研究

本试验以烟草叶片和烟草悬浮系制备的原生质体为材料,采用不同染料对原生质体活力和细胞核进行染色效果比较.结果表明,原生质体活力观察宜采用荧光素双醋酸酯（FDA）染色法,染色效果清晰易于观察,四嘧唑蓝（MTT）法则可定量反映原生质体活力;相对于其他细胞核染料,DAPI对不同来源的原生质体细胞核染色效果均较好,能够清晰地对原生质体进行观察和计数.本研究为今后原生质体的检测提供有用的参考.     

初孵扬子鳄端脑基底中枢的组织学研究

用光镜对初孵扬子鳄端脑基底中枢的组织学结构进行了研究.基底中枢可分为背侧区、中心区、腹侧区、隔区及周围神经核:嗅前核、侧嗅束核、嗅结节、Broca斜角带核、横核等.本文对这些区域及核团进行了定位,并就其特征同其他脊椎动物进行了比较.     

球孢白僵菌几丁质酶的定位研究

采用酶解球孢白僵菌菌丝细胞壁以获得原生质体,用超声破碎器破碎细胞,并用差速离心等方法,对此丝状病原真菌细胞中几丁质酶的定位进行了研究.采用球孢白僵菌 Eu-120株,分别用几丁质酶、蜗牛酶和纤维素酶,以不同比例混合进行脱壁处理.通过测定培养物上清液及原生质体溶解物的几丁质酶活性,发现此培养物上清液中的酶活性占其总酶活性的81.46%,而原生质体溶解物中酶活性极少.研究表明,球孢白僵菌几丁质酶主要存在于细胞的周质空间,并在菌生长过程中通过细胞壁分泌至细胞外.     

地衣芽孢杆菌JF—20菌原生质体的形成及其再生的最佳条件

以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)JF-20菌为出发菌株,对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究,在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体。结果发现：JF-20菌的原生质体形成率及再生率分别达到以86.9%和38.4%,并通过光学显微镜技术,观察了原生质体形成及再生的有关现象。     

青檀花粉生殖细胞的形成和质体遗传格式

利用电子显微镜和荧光显微技术研究了青檀花粉生殖细胞的形成过程及壁的成份.小孢子刚从四分体中释放时,核位于中央,细胞器随机分布.当小孢子核移向边缘时,细胞器特别是质体,呈不均等分布,在核的对面聚集.刚形成的生殖细胞完全被细胞壁包围着,壁的成份是纤维素和胼胝质.生殖细胞形成后不久,胼胝质即消失,而纤维素则部分地保留,一直到游离生殖细胞早期.传粉时的生殖细胞呈蝌蚪状.在生殖细胞中始终没有发现质体.故青檀的质体遗传格式属于番茄型.     

猴头菌原生质体制备条件的研究

比较了不同酶液、酸碱度，渗透压稳定剂，菌龄和菌丝培养基成分等因素对猴头菌菌丝释放原生质体作用的影响。结果表明：在土豆培养基（ＰＤＰ）上静止浅层培养９６小时的菌丝，用２％的溶壁酶液，以０．６ｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４为渗透压稳定剂，在ＰＨ５．５的条件下酶解，获得的原生质体数最大。     

Ｌogistic方程在柑桔原生质体耐热性测定中的应用

试验了山金柑（Ｆortunella hindsii Osb.cv.swingle)、Murcott桔橙（Ｃitrus reticulataBlance C.sinensis Osb.sv.murcott)、伏令夏橙（Ｃ.siensis osb.cv.valencia)、伏令夏橙和宁波金柑的体细胞杂种（Ｃ.sinensis F.Crassifolia swingle cv.Meiwa)４种柑桔原生质体及其叶片经高温处理后的原生质体活力、电解质渗出率（％）的变化,配合logsitic方程分别求出自的高温半致死温度（ＬＴ５０）,以此来衡量各品种耐热力的大小。发现原生质体的耐热力大小与叶片耐热力的大小有显著相关性,回归方程为Ｙ＝１．３００７＋０．９８８１(r=０．９７７１）。讨论了原生质体耐热力测定的生理基础。     

元素周期系界限问题研究

本文以四个立论为基础对原子的存在提出“空间限制”和“时间限制”概念。从“空间限制”考虑,原子存在的界限是Z=131-153号元素;从“时间限制”考虑,原子存在的界限是Z=125号元素,由此认为周期系界限的大体范围是在Z=125-131号元素。     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

产黄青霉菌原生质体形成、再生和融合

采用0.5％的纤维素酶和0.5％的蜗牛酶的混合液在33°c分别酶解产黄青霉菌的两株营养缺陷型突变体的菌丝体以制备原生质体,并以0.6MNaCl为渗透压稳定剂使原生质体在再生培养基上再生成菌落,以30％的聚乙二醇(分子量6,000)和0.01MCaCl_2作助融剂,获得了两株营养缺陷型突变株原生质体营养互补的融合子,融合率为0.011％