三种不同抗原对猴B病毒抗体检测结果的比较研究

采用HSV1抗原片、BV抗原片以及BV DIA dot试剂盒对我区灵长类实验动物进行BV抗体检查.结果表明用HSV1抗原片检测为阳性猴的阳性率与BV抗原片以及BV DIA dot检测为阳性猴的阳性率之间差异极显著(P＜0.01);后两者之间阳性率差异不显著.用HSV1抗原片、Bv抗原片以及BV DIA dot检测为阴性的猴,分别饲养2、4、6个月后,用同一种抗原复检,结果HSV1检测为阴性猴的阳转率与后两者的阳转率之间的差异极显著(P＜0.01).自1999年8月至今,经BV抗原片检测为阴性的猴出口至美国、荷兰、日本、德国等国家累计1389只,均符合客户要求.     

我国猕猴群中B病毒分离鉴定和检测方法研究初报

本实验从野外捕获的恒河猴的口腔溃疡灶中分离到一株病毒。该病毒在Vero细胞上具有B病毒特征性细胞病变 ,电镜观察具有疱疹病毒的典型形态与结构。经PCR扩增、SacⅡ酶切、PCR产物测序并与美国分离的BVE2 4 90株的部分基因序列进行比较 ,初步证实该分离株为B病毒 ,并命名为BV1 4 7株。用BV1 4 7株制备抗原片 ,并与国产HSV 1抗原片同时进行猴血清中B病毒抗体检测 ,可明显提高阳性检出率。B病毒的分离成功 ,对于提高我国实验猕猴的质量和检测水平 ,建立无B病毒猴群 ,增加出口创汇均具有十分重要的意义。     

猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。     

猕猴B病毒妒和gC合成基因重组杆状病毒质粒的构建

目的构建猕猴B病毒gB和gc合成基因的杆状病毒重组质粒（rBacmid）。方法根据本室已经合成的猕猴B病毒gB基因和gc基因,利用BamHI和XhoI特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒的pFastBacHTA转座载体。将该阳性转座载体转化到DHlobac感受态细胞,从中筛选出阳性重组细菌,并提取重组质粒。结果获得了重组质粒bacmid—gB和bacmid—gC。结论该研究为猕猴B病毒gB和gc蛋白在杆状病毒系统内的表达奠定了基础。     

食蟹猴(Macaca fascicularis) B病毒相关抗体的初步探讨

以人单纯疱疹病毒为抗原，用玻片免疫酶法（ＥＩＡ）检测来自广西中越边境地区及广西灵长类研究中心的食蟹猴Ｂ病毒相关抗体。发现食蟹猴Ｂ病毒相关抗体的阳性率随年龄增长而增加。野外捕获混养级阳性率为８３．４％；野外捕获组阳性率为４９．８％；自繁分笼群养组阳性率为１４．６％。三组中，不同性别之间相关抗体阳性率没有显著性差异（Ｐ〉０．０５），组间Ｂ病毒相关抗体阳性率的差异极显著（Ｐ〈０．０５）。     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

云南省野生恒河猴三种病毒血清抗体的初步调查

用酶免疫法（ＥＩＡ）检查了云南省３６０只野生恒河猴的轮状病毒、腺病毒和痘病毒血清抗体,抗体阳性率分别为８６７％,８０８％和１９４％．成年猴上述三种病毒抗体的阳性率明显高于未成年猴．在云南省思茅、文山和临沧地区三种病毒抗体阳性率无明显差异,其中轮状病毒、腺病毒抗体阳性率较高,痘病毒抗体阳性率较低．结果表明：轮状病毒、腺病毒和痘病毒抗体阳性动物在野外广泛存在,抗体阳性动物的分布与年龄有关．在云南省思茅、文山和临沧三个地区,三种病毒的抗体阳性率无差异．     

太行山猕猴体表胃电的初步探讨

体表胃电是胃平滑肌功能活动的一项重要指标。为阐明猕猴胃的活动规律,我们对太行山猕猴的体表胃电进行了测量,其测结果为:慢波频率为3.57±0.26次/分,振幅为41.85±7.34微伏。“新斯的明”和“阿托品”对胃电频率影响较小,但前者能增加胃电振幅,后者能减弱胃电振幅。     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

龙虎山猕猴(Macaca mulatta)麻疹病毒感染的探讨

采用HI(血凝抑制试验)法,比较在不同生境中,龙虎山猕猴麻疹病毒抗体阳性率的差异:小群关养组的阳性率为90.9%;半野生猴组阳性率为28.3%;野生猴组阳性率为2.4%。不同性别及不同年龄猴麻疹病毒抗体阳性率没有显著性差异(P>0.01)。半野生猴组阳性率逐年递增。对建立无麻疹、B病毒等病毒感染繁殖种群提出初步意见。     

恒河猴B病毒血清抗体流行病学调查

目的摸清B病毒(BV)感染现状,从而有效降低BV在恒河猴群中的感染率。方法采用ELISA方法对恒河猴血清进行抗体检测。结果检测样品629份,其中350份呈BV抗体阳性,10份血清呈BV抗体可疑,其余血清为抗体阴性。结论种猴(≥11周岁)BV感染率89%;青年猴(3~10周岁)BV感染率39.2%;幼龄猴(≤2周岁)BV感染率7.6%。随着年龄的增长,恒河猴群中BV感染率越高。     

夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）及其表面刺突糖蛋白受体结合域（receptor-binding domain,RBD）的ELISA试剂盒.该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体,其中检测抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）偶联,通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.另外,对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.结果表明,双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1∶160 000和1∶320 000,试剂盒的定量检测下限为31 ng/mL.经验证,组装的试剂盒精密度为0.71%～1.59%,平均准确度为96.53%,与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.试剂盒各项参数均符合《中国药典》（三部）2020版标准,表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.     

龙虎山猕猴（Macaca mulatta）麻疹病毒感染的探讨

采用ＨＩ（血凝抑制试验）法，比较在不同生境中，龙虎山猕猴麻疹病毒抗体阳性率的差异：小群关养组的阳性率为９０．９％；半野生猴组阳性率为２８．３％；野生猴组阳性率为２．４％。不同性别及不同年龄猴麻疹病毒抗体阳性率没有显著性差异（Ｐ＞０．０１）。半野生猴组阳性率逐年递增。对建立无麻疹、Ｂ病毒等病毒感染繁殖种群提出初步意见。     

BV EIA、BV ELISA在检测食蟹猴BV抗体中的比较研究

本中心待出口美国、德国的 5 34份食蟹猴血清用国产BVEIA抗原检测片检测后送美国BioReilance公司进行检测。 5 34份血清中 ,11分为阳性 ,5份为可疑 ,5 18份为阴性。经美国复检 5 14为阴性 ,8份为可疑 ,12份呈阳性。两者的检测符合率达 95 9% ,说明BVEIA检测准确度已达到国际检测水平 ,可为国内猕猴生产单位控制BV检测质量提供有力的技术保证。     

丙肝病毒核心抗原检测临床应用研究

应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。采用湖南康润公司生产的HCV游离核心抗原试剂盒,对来自门诊或手术前筛查的850例临床样本进行了HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实。850例筛查样本HCV-Ab阳性22例,其中HCV-cAg阳性14例,RT-RNA阳性16例;828例HCV-Ab阴性的样本检出HCV-cAg阳性4例,其中RT-RNA阳性3例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为83.33%(15/18)。HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,敏感性高、特异性好、费用低廉。     

两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。     

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用.无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒,均获得了满意的结果.同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明:无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后2种方法,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为0.65ng,烟草花叶病毒为0.39 ng,小西葫芦黄化花叶病毒为0.45 ng;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适,这种底物可在室温下长期保存,并且反应产物为不褪色的紫色,易于观察和保存.     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。