入侵植物春飞蓬DNA的提取及ISSR-PCR反应体系的建立

以菊科入侵植物的春飞蓬为研究材料,采用CTAB法提取植物总基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度法检测提取的总DNA质量良好,蛋白质、RNA等杂质去除彻底,适合进行ISSR分析;将提取的DNA进行ISSR-PCR扩增,筛选出特异性高的引物,利用单因素和正交试验,建立并优化了入侵植物春飞蓬ISSR-PCR反应体系,20μL优化体系中DNA模板为20 ng、引物为0.2μmol/L、Mg2+为2.5 mmol/L、d NTP为0.2 mmol/L.     

胡卢巴基因组DNA提取及RAPD引物筛选

以胡卢巴叶片为材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA并进行质量检测和含量测定,在优化RAPD反应体系的基础上,对100条RAPD随机引物进行了筛选.结果表明,采用改良CTAB法能从胡卢巴叶片中提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从100条随机引物中筛选出了16条显示胡卢巴遗传差异的多态性引物,为胡卢巴遗传多样性研究提供分子依据.     

向日葵Pst Ⅰ和Mse Ⅰ内切酶组合AFLP标记体系的建立及引物筛选

 为建立并优化适合向日葵的Pst Ⅰ 和Mse Ⅰ 组合的AFLP 技术体系, 为下一步构建遗传连锁图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础, 对向日葵基因组DNA 提取方法、酶切连接体系和选择性扩增程序的影响因素进行优化, 并对适合向日葵AFLP 分析的引物组合进行筛选。结果表明, 模板DNA 的提取采用改进CTAB 法, 酶切连接采用一步法反应14 h, 在选择性扩增体系20 μL中, Mg²⁺和dNTP 浓度分别为2 mmol/L 和0.3 mmol/L, 选扩引物的浓度为0.6 mmol/L, 预扩增产物最适稀释倍数为30 倍。同时筛选出了稳定且多态性丰富的48 对适合向日葵AFLP 分析的引物组合。     

唇鱼骨基因组DNA提取与ISSR-PCR的优化

以唇鱼骨为材料,分别采用4种不同方法(CTAB法、SDS法、ROSE法及试剂盒)提取基因组DNA,并对影响PCR反应的模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度等主要因子进行了优化,建立了适合唇鱼骨基因组DNA的ISSR-PCR反应体系.25μL的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:约60 ng模板DNA,1.2 U Taq酶,0.4 μrnol/L引物,2.0 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,2%甲酰胺.结果表明,利用优化反应体系对4种不同方法提取的DNA进行PCR扩增,均能得到较好的PCR扩增条带,以试剂盒法最佳,为淡水溪流性同属鱼类遗传多样性分析奠定了技术基础.     

4种叶型性状半夏和掌叶半夏的ISSR分析

从50条ISSR引物中筛选到5条适合引物,对4种叶型性状半夏和掌叶半夏进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,构建5种不同半夏的DNA指纹图谱．结果表明：5条引物都能够分别扩增出多态性条带,其中引物jUBC-868具有较高的多态性,可独自将所测的5种材料区分开．ISSR（Inter Simple Sequence Repeat）-PCR作为。一种简便、可靠的分子标记技术,可以作为不同半夏鉴别的方法之一,从而实现对半夏种质资源分子水平的鉴定．     

怀地黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析

采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个,分别对16个单株基因组DNA进行PCR扩增.3个RAPD引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%.2个ISSR引物共扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%.结果表明,怀地黄85-5品种内存在遗传差异,但遗传多样性比地黄品种间的低.     

黑木相思基因组DNA的快速提取

用SDS高盐介质法和1.5×CTAB法提取黑木相思幼叶及叶状柄基因组DNA,将其与2×CTAB法、3×CTAB法、改进的CTAB法进行比较,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶消化、RAPD(Radomly Amplified Polymorphic DNA)和ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)等方法进行鉴定.结果表明,叶状柄多糖的质量分数较幼叶少,更易于基因组DNA的提取;SDS高盐介质法与1.5×CTAB法提取叶状柄的基因组DNA得率为180.0～697.5 μg·g-1,分子质量为48 kb,D(260)/D(280)=1.750～1.955,无需经Rnase 处理,可直接用于限制性酶切和RAPD及ISSR分析;1.5×CTAB法所提的基因组DNA的纯度优于SDS高盐介质法.综合考虑认为,1.5×CTAB法可作为黑木相思基因组DNA快速提取的简便方法.     

适于蓖麻遗传多样性分析的RAPD引物筛选

采用CTAB法提取蓖麻基因组DNA,对RAPD随机引物进行了筛选,从120条引物中筛选出多态性好、稳定性高的引物48条作为蓖麻RAPD分析引物,为进一步进行蓖麻分子遗传育种提供依据．     

青檀基因组DNA提取方法的优化

以青檀(Pteroceltis tatarinowii Maxim.)的叶片为材料,采用改良高盐低pH值法、改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法4种不同方法提取其基因组DNA,并进行电泳分析、质量检测及ISSR引物扩增检测.结果表明,改良CTAB法优于其它方法,提取的DNA质量较好,纯度较高,能满足进一步的实验要求.     

枣树基因组DNA提取方法及RAPD体系的建立

以8个枣树品种的嫩叶为材料,比较了不同的DNA提取方法,结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA纯度和产率,虽然不比改良SDS的高,但适宜RAPD分析．在20μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为：引物0．2pmol·L^-1、Mg^2＋2．0mmol·L^-1、dNTP200μmol·L^-1、TaqDNA聚合酶1．2U．改良的CTAB法是枣树RAPD分析基因组提取DNA的最好方法．     

阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,0.5μmol/L引物、0.5UTaq酶、150μmol/L dNTPs和20ng模板DNA.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的ISSR-PCR反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.     

核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法，从叶片中提取核桃基因组DNA，比较其分离效果，结果表明：改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染，并以此为模板进行RAPD反应，对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验，建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系，以进行该树种的分子标记研究。     

龙眼基因组DNA提取及RAPD反应体系优化的研究

采用改良CTAB法提取龙眼幼叶基因组DNA,并以其为模板对影响RAPD扩增反应的主要因子采用单因素递进分析方法进行优化,建立了龙眼基因组DNA最佳RAPD反应体系,即在25μL的反应体积中,含20 ng模板, 1．0 U Taq DNA聚合酶,2．0 mmol／L MgCl2,各0．20 mmol／L dNTP,0．20μmol／L引物．     

濒危植物长叶红砂ISSR扩增条件的优化与引物筛选

对濒危植物长叶红砂(Reaumuria trigyna Maxim)的核基因组DNA进行ISSR扩增条件的优化与引物筛选.利用单因素实验,测试了ISSR-PCR反应体系中模板DNA的含量、引物浓度、Master Mix等因素对反应结果的影响,经过优化实验,建立了长叶红砂ISSR-PCR的最佳反应体系,15μL PCR反应体积包括Mix 4.5μL,模板DNA 20ng,引物0.6μmol/L.利用优化反应体系,从60个ISSR引物中筛选出稳定性好、重复性高的14个引物.对长叶红砂5个种群的85个个体进行扩增,共扩增出110个位点,其中多态位点102个,多态位点百分率为92.73%.长叶红砂ISSR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术进一步研究长叶红砂的遗传多样性奠定了良好的基础.     

菊叶香藜（Chenopodium foetidum）基因组DNA的提取方法研究

文章通过传统CTAB法、改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法等5种方法,对菊叶香藜进行基因组DNA提取,旨在筛选一种菊叶香藜基因组DNA的适宜提取方法。同时用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对5种方法所提DNA进行检测,并对改良CTAB法提取的DNA进行RAPD-PCR扩增检测。结果表明：改良CTAB法提取速度较快,便于操作,提取的DNA质量较好,进行的RAPD-PCR扩增条带清晰,能满足分子标记的要求。因此,改良CTAB法为菊叶香藜基因组DNA可靠并合适的提取方法。     

地石榴ISSR扩增体系优化及应用

以地石榴为材料,通过单因素试验,对ISSR-PCR反应体系中各种影响因子,如引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量、模板DNA浓度、退火温度等进行了优化和筛选,建立了适合地石榴的IS-SR-PCR反应体系:20μL体系中,10×buffer 2.0μL,引物0.50μmol.L-1,dNTPs 0.15 mmol.L-1,Mg2+1.2mmol.L-1,Taq DNA酶1.25 U,模板DNA 25 ng.确定了适宜的退火温度为52℃.利用该优化后的体系从60条ISSR引物中筛选出了12条,随机选取2条对10份分布于不同地区的地石榴标本基因组DNA进行扩增,证实了该体系稳定可靠,可用于进一步分析地石榴居群遗传多样性.     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

泽泻ISSR反应体系的建立与优化

以四川泽泻为实验试材,采用改进的CTAB法提取了泽泻的高质量总DNA模板,克服了泽泻中所富含的酚类物质的影响.对泽泻ISSR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选,建立了标记位点清晰、稳定、重复性好、可用于泽泻ISSR-PCR分析的最适反应体系,它们是:25μL PCR反应体系中,10×Taq酶配套缓冲液,1U Taq DNA聚合酶,1.8~2.0 mmol/L MgC l2,100μmol/L dNTP,0.3μmol/L引物,DNA模板约10~20 ng,退火温度在52~60℃;为进一步研究泽泻居群的ISSR分子标记鉴别奠定了基础.     

大蒜种质资源遗传多样性的分子标记研究

本研究利用RAPD和ISSR两种分子标记技术．对中国10个不同地区的大蒜品种进行了种质资源遗传多样性研究．从30个RAPD引物当中．筛选出11个具有多态性的引物．共扩增出多态性带224条．多态性条带比率为41．18％．从12个ISSR引物中筛选出5个具多态性的ISSR引物．共扩增出多态性带121条．多态性条带比率为50．21％．对RAPD和ISSR两种标记分别运用Nei指数法．计算出10个大蒜品种的平均遗传距离为0．28和0．32．根据这两种标记的结果．采用UPGMA进行聚类分析，得到与生物学分类地位基本一致的结果．结果表明，在实验稳定性上．ISSR优于RAPD．且ISSR比RAPD能检测到更多的遗传变异．RAPD和ISSR两种标记可用于大蒜种质遗传多样性的研究．     

濒危植物翅果油树DNA的提取方法及纯度检测

为从翅果油树(Elaeagnus mollis Diels)叶中提取高质量的基因组DNA,用PVP和TNE洗液预处理样品并筛选出合适的清洗次数,比较了SDS法、CTAB法和改进CTAB法3种DNA提取方法.结果表明:TNE和PVP预处理三次并且采用改进的CTAB法更适合于翅果油树基因组DNA提取.该方法提取的DNA经紫外分光光度法检测,其A260/A280为1.82,优于CTAB法(1.59)、SDS法(1.00).琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增结果也得出同样的结论.