植物细胞培养技术生产次生代谢产物的研究进展

对利用植物细胞培养技术生产次生代谢产物的条件控制、生产方法进行了综述,并对该技术的发展趋势进行了展望.     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析,并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A）,并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率,明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度,对土霉素的IC50为7．01ng／ml,且该单抗特异性强,仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应,而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时,其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％,变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此,单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

提高植物细胞培养中次生代谢产物产量的方法

细胞的生长速度和次生代谢产物合成能力是能否实现植物细胞培养工业化生产的先决条件.本文从外植体选择、高产细胞系筛选、物理因子、化学因子的调控及培养方法等5个方面论述了植物细胞培养中提高次生代谢产物的方法.     

植物细胞培养生产次生代谢产物中的影响因素

植物细胞中含有一些如萜类、酚类和生物碱等由糖类有机物次生代谢衍生而来的次生代谢产物,其中一些往往是重要的药物和工业原料。因此,如何优化植物细胞培养和高水平提取这类次生代谢产物深受人们重视。本文从调控培养条件、运用诱导剂等方面对此问题进行综述。     

植物内生放线菌及其次级代谢产物的研究进展

植物内生放线菌是一种特殊的微生物类群,广泛存在于自然界.其次级代谢产物具有丰富的药用价值和多种生物学功能,如抑菌、抗疟疾、抗癌,能保护和促进植物生长等.文章从植物内生放线菌次级代谢产物的功能及不同培养条件对大规模生产的影响进行综述,以期为植物内生放线菌的进一步研究提供参考.     

药用植物中四环三萜皂苷合成生物学研究进展

萜类化合物是药用植物中结构和生物活性多样化的一类大分子化合物,是自然界中广泛存在的次级代谢产物,主要应用于食品、保健品、医药等领域。生物信息学和分子生物学研究的不断深入,极大促进了药用植物四环三萜皂苷的生物合成途径解析与关键功能基因的挖掘鉴定。本文对常见药用植物四环三萜皂苷的生物合成学研究现状展开论述,重点介绍以药用植物四环三萜皂苷为代表的几类化合物的分子合成机制和生物合成研究进展,为人工构建、优化微生物“细胞工厂”,高效合成稀有、高附加值的四环三萜类化合物,推动药用植物资源可持续利用等提供参考。     

次生代谢产物的生产

主要阐述了生产次生代谢产物的五种主要类型、研究成果和发展趋势,重点谈了细胞组织和细胞培养法生产次生代谢产物的情况.     

浅谈禽病ELISA操作技术

在疾病监控方面,酶联免疫吸附试验(ELISA)技术是应用最为广泛的血清学检测技术,禽病ELISA抗体检测试剂已经大量应用到SPF鸡微生物学监测中。ELISA不仅操作技术上有一定的要求,而且影响因素也较多,如不注意有可能导致试验结果不准确。因此,将禽病检测过程中,ELISA操作各环节需注意的问题归纳总结,与各位同仁一起交流学习。     

吉林地区孕妇弓形虫感染的免疫学检测临床研究

目的探索吉林地区孕妇弓形虫感染情况.方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测196例孕妇(妊娠8周～7个月)静脉血中弓形虫(Toxoplasma godii,TO)抗体,即Tox-IgG抗体和Tox-IgM抗体.结果发现有猫犬接触史(指现在或曾经养过猫犬的)的孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史的孕妇(P<0.01),两者有显著性差异;但城市与乡镇孕妇弓形虫感染率无显著性差异(P>0.05);而首次妊娠孕妇与非首次妊娠孕妇弓形虫感染率有显著性差异(P<0.05).结论有无猫犬接触史是孕妇感染弓形虫的主要因素,二者相关性显著.     

氯霉素残留胶体金免疫层析快速检测法的研制

建立一种快速、简易的检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析法.将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸-醋酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的结果.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了...     

自制和进口试剂盒在犬细小病毒检测中的应用

用本研究室研制的犬细小病毒单克隆抗体和多克隆抗体，采用夹心ＥＬＩＳＡ原理，研制成功犬细小病毒快速诊断试剂盒。对８７份犬粪便样品进行检测，并与ＨＡ法和美国ＩＤＥＸＸ公司研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒进行比较。结果表明，与ＨＡ法相比，自制试剂盒的敏感性为９３．３％，特异性为１００％，总符合率为９５．４％；与美国试剂盒相比，自制试剂盒的敏感性为１００％，特异性为８４．６％，总符合率为９５．０％，达到国外同类产品     

人胎肝金属硫蛋白的分离纯化及酶联免疫吸附检测

人胎肝经匀浆、离心、乙醇沉淀后,通过Sephadex G-75、DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析分离,获得金属硫蛋白的两种亚型(MT-1和MT-2)。经氨基酸组成分析证明是均一的。MT-1为抗原免疫青紫兰兔制备了抗血清,以纯化的IgG建立了人MT的酶联免疫吸附检测(ELISA)方法,并给出了标准工作曲线。     

ELISA对毒理实验动物血清中神经生长因子抗体动态的研究

用ＥＬＩＳＡ法对神经生长因子（ＮＧＦ）毒理实验动物犬和大鼠血清作了抗－ＮＧＦ抗体检测。结果表明在大鼠血清中没有发现抗－ＮＧＦ抗体,但犬血清中有相应的抗体产生,并随注射剂量增加和注射时间延长而逐渐升高,另外,对ＥＬＩＳＡ间接法和竞争抑制法进行了比较,结果表明,竞争抑制法明显优于间接法,而且是一种简便、特异的好方法。     

人小肠三叶因子的克隆及酶联免疫吸附检测

人小肠三叶因子的cDNA,克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,hITF以GST-hITF融合蛋白的形式表达,融合蛋白占细菌总蛋白的15%左右。经过Glutathione-Sepharose 4B亲和柱和Sephacry1 S 100分子筛层析纯化了hITF。SDS-PAGE和氨基酸分析证明得到了hITF纯品。以天然hITF为抗原免疫青紫蓝兔制备了抗血清,用纯化的IgG建立了hITF的酶联免疫吸附检测(ELISA)方法,给出了标准工作曲线。应用于纯化过程中样品峰的确立。     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中,低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L,相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响,主要的代谢特征基本不变;在高乳酸浓度(13．1～41,58mmol／L,相应渗透压为701～944kPa)下培养,细胞生长受到抑制,代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中,维持正常的pH,7mmol／L的乳酸浓度,不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

生物反应器内人参细胞的培养生长及代谢特性

利用2．4L搅拌式反应器对人参细胞的培养生长与代谢特性进行了研究．结果显示：细胞3个生长时期的持续时间与接种量、初始营养浓度、营养流加情况及培养条件（如温度和溶解氧等）有关；分批培养和流加培养时的最大细胞得率分别为12g/L和35g/L（细胞干重）；细胞的皂甙含量在旺盛生长期快速上升，并保持增长至衰退期前期；干细胞中最大的皂甙含量达60～70g／kg；随着细胞的生长，培养液的电导值从8000μS以上下降至600μS以下，细胞自溶后逐渐回升．另外，培养后期部分细胞颜色变红，但没有发现颜色转变对皂甙含量造成影响．培养液的电导可以作为判别培养状态的指标之一，用于指导培养控制及终止培养操作．细胞的收获时间应在衰退期的前期．     

全息图的转印及效率研究

本文叙述了全息图转印的原理和转印方式，同时介绍了转印所用材料和怎样提高转印效率．     

BK病毒样颗粒制备及血清学检测方法的建立

将BK病毒 ( BK polyomavirus, BKV )的结构蛋白VP1 通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达, 并自发装配成BKV病毒样颗粒(BK virus like particles, BK VLPs). 以BK VLPs作为包被抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的血清学检测方法: 抗原最佳包被浓度为3.1 μg/mL, 血清最佳稀释度为1∶200, 酶标抗体最佳工作稀释度为1∶40000.并以该方法在国内对540名健康成年人进行BKV抗体阳性率情况调查, 结果显示我国健康成年人BKV抗体阳性率为79.94%.     

中国沿海贝类腹泻性贝毒的酶联免疫分析方法

为了解中国近海贝类受腹泻性贝毒污染状况,制备并应用多克隆抗体建立对腹泻性贝毒主要成分软海绵酸(OA)的间接竞争酶联免疫检测方法(idc-ELISA).应用该方法检测中国沿海双壳贝类中腹泻性贝毒的含量,并与小鼠法测试结果进行了对比.结果表明:idc-ELISA方法的检出限为0.1 ng/mL,相当于贝类样品的检出限8 ng/g;idc-ELISA方法和生物小鼠法的符合率为90%;中国沿海贝类受腹泻性贝毒污染严重,部分贝类样品的腹泻性贝毒含量超过了规定的0.2μg/g的食用安全标准.