两种海洋饵料藻的超低温保存

用两步冷冻法对牟氏角刺和新月菱形藻进行了超低温保存，研究了影响存活率的内外因素，结果表明，对这两种 分别选用１０％和１５％ＤＭＳＯ抗冻保护剂，预冻至－４０℃并保持３０ｍｉｎ后投入液氮，样品化冻后分别在室温及０℃要用较慢的稀速率去除ＤＭＳＯ时可获得较高的存活率。     

两种蓝藻超低温保存抗冻保护剂的研究

以两种蓝藻为试材,对影响超低温(液氮温度-196℃)保存成活率的保护剂及其配比进行了探讨,发现非渗透保护剂(蔗糖)比渗透性保护剂(DMSO)效果好,混和保护剂与单一蔗糖为保护剂的处理效果未见区别,由两种方法所测成活率看鱼腥藻(Anabaena sp.)比钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)的抗寒性高.     

超低温保存脱除两种马铃薯病毒

采用超低温保存的方法对马铃薯病毒PVY和PVS进行了脱除研究.结果显示:经过超低温保存后,材料的存活率可达71.6%,比传统的茎尖培养脱毒材料的成活率在52%左右高;超低温保存后PVY病毒脱除率达到83%,比传统脱毒方法脱毒率(62%)和热处理脱毒率(65%)要高,且操作上也较简单;对于马铃薯PVS病毒脱除率在47%左右,而采用茎尖培养病毒的脱除率仅有17%左右.     

高山红景天花粉的超低温保存

对来自大兴安岭、长白山的高山红景天花粉进行了超低温保存研究。结果表明:不同的干燥时间对超低温保存后花粉萌发力有明显影响,12 h干燥处理的花粉萌发力明显高于8 h、24 h干燥处理的;用0℃(8 h)→-10℃(8 h)→-20℃(8 h)变温预冻处理能大幅提升超低温保存后花粉的萌发力;超低温保存后的解冻方式以-20℃(8 h)→4℃(8 h)→25℃(8 h)为最佳。     

太平洋牡蛎精液的超低温保存

利用解剖法采集太平洋牡蛎精液，用自然海水做基础溶液，配制不同浓度的DMSO（二甲亚砜）作为超低温保护剂，在液氮（LN2）面上不同高度进行预处理,投入LN2内保存，升温解冻后，检测精子成活率。结果表明，DMSO处理浓度、预处理温度及时间和升温方式对超低温保存成活率均具有显著影响。其中，用10％DMSO在LN2面上17cm预处理6min，采用16－17℃流水不完全解冻，效果最好，超低温保存精子成活率可达70％。与新鲜精子相比，在LN2内保存一天的精子，授精能力没有明显变化。     

七叶树种子离体胚的超低温保存

通过对七叶树种子离体胚超低温(-196 ℃)保存后生活力、相对电导率和脱氢酶活性的测定分析,初 步研究其长期保存的可行性。结果表明：含水率是影响七叶树种子离体胚超低温保存的重要因素,超低温 保存时应对种子进行适度脱水。超低温保存后,七叶树离体胚生活力最高为93 %,其处理组合中57.3 %含 水率+缓速冷冻+快速解冻+10 %二甲基亚砜+10 %蔗糖+20 %聚乙二醇为最佳处理方案。     

细叶小羽藓孢子的超低温保存

通过对干燥时间及预处理温度等超低温保存条件的实验探索,筛选出细叶小羽藓(Haplocladium microphyllum)孢子超低温最适保存条件,利用最适保存条件对细叶小羽藓孢子进行不同时间(1 d、15 d、30 d、90 d、180 d)的超低温保存研究,并与未经任何处理直接投入液氮的孢子进行比较.结果表明:(1)细叶小羽藓孢子在硅胶干燥5 h、-20℃低温预处理和室温自来水化冻的条件下的平均萌发率最高(88.26%),干燥20 h、常温处理的孢子与干燥5 h、-20℃低温预处理的孢子平均萌发率差异不显著;(2)液氮保存1 d后的孢子平均萌发率(88.26%)高于未用液氮保存的孢子平均萌发率(77.90%),保存30 d后的孢子平均萌发率降为6.03%,而保存90 d后平均萌发率又出现上升的趋势,达到88.47%,保存180 d后平均萌发率仍维持在49.46%,相对保持率为63.49%.因此,使用液氮超低温长期保存细叶小羽藓孢子是可行的.     

柑橘原生质体的超低温保存

对柑橘原生质体的超低温保存进行研究，发现玻璃化溶液加入小牛血清蛋白对原生质体的超低温保存有利，不同品种的胚性愈伤组织原生质体超低温保存后的成活率不同；不同倍性的伏令夏橙原生质体超低温保存后的成活率也不同，其中2倍体成活率最高，其次为4倍体，6倍体成活率最低，超低温保存后的原生质体在BH3厮中能够恢复分裂，形成细胞团。     

梯度蔗糖诱导黄皮胚轴脱水耐性后超低温保存

梯度蔗糖预培养能增强黄皮胚轴的脱水耐性,使胚轴含水量下降至17.6%仍保持活力,在含NAA和IAA的WPM培养基上可诱导植株再生.黄皮胚轴脱水至18%后分别采用直接冻存法、抗冻剂冻存法、微滴冻法和玻璃化法超低温保存都不能复活.玻璃化冻存后的胚芽超微结构基本完整,若能继续优化冻存和培养条件,有希望获得存活的胚芽及其再生植株.     

包埋脱水法冰冻保存3种饵料金藻的研究

用包埋脱水法冰冻保存绿色巴夫藻(Pavlova viridis)、湛江等鞭藻(Isochrysis zhanjiangensis)和球等鞭金藻(Isochrysis galbana 3011)3种海洋饵料金藻,探讨了胶球含水量和预培养对冰冻保存存活率的影响．结果表明：3种藻冰冻前胶球的最佳含水量不同,绿色巴夫藻为35％。湛江等鞭藻和球等鞭金藻都为30％;预培养后3种藻都在20％含水量获得最高存活率,其中绿色巴夫藻经2％PEG预培养后存活率提高了6％,效果好于5％PVP预培养．预培养对其他两种藻的存活率没有提高．     

新月菱形藻的紫外诱变及优化培养

本实验室通过紫外诱变得到一株富含油脂的新月菱形藻BC6,在实验室条件下研究了不同温度、光照强度、pH值、N源含量、NaCl含量等培养条件对BC6生长的影响。研究结果表明：最适培养温度在20 ℃,pH值为7.5,最适光照强度为54 μE/(m2·s),NaNO3的最适添加量为105 mg/L,NaCl最适添加量为27 g/L。在优化培养条件下,最高细胞密度可达1.69×106 /mL,比优化前增大了2.2倍。     

Hierarchical recognition on the taxonomy of <Emphasis Type="Italic">Nitzschia closterium</Emphasis> f. minutissima

Nitzschia closterium f. minutissima, a marine eukaryotic unicellular diatom, originally classified as Bacillariophyta/Bacillariophyceae/Bacillariales/Bacillariaceae/Nitzschia, is one of the most important feed sources in mariculture. In this study, its morphological features were examined under DIC Microscopy （differential interference contrast microscope）; its pigments and fatty acids composition were analyzed by using High Performance Liquid Chromatography （HPLC） and gas chromatography （GC）; the complete Actin cDNA, part 18S rDNA, complete ITS1 and ITS2 sequences, part 28S rDNA sequences, and a putatively encoding A5 fatty acid desaturase gene were cloned respectively and further functioned in transgenic yeast. The sequence alignments were separately conducted using the related sequences from Nitzschia closterium f. minutissima, Cylindrotheca closterium （Bacillariophyta/Baci- Ilariales/Bacillariaceae/Cylindrotheca） and Phaeodactylum tricornutum （Naviculales） with ClustalX 1.83. No distinct difference was discovered between N. closterium f. minutissima and P. tricornutum in both biochemical and molecular level. Their identity was more than 99.6% among 18S rDNA, 5.8S rDNA and actin-gene sequences, and is up to 98.6% even among ITS1 and ITS2 sequences. Their △5 desaturase similarity was 99.4%. However, the lower similarity was disclosured between N. closterium f. minutissima and Cylindrotheca closterium, which shared less than 40% identity in the ITS1 and ITS2 sequences. So, N. closterium f. minutissima should not be placed in Bacillariales, Bacillariaceae, Nitzschia, but in Naviculales, Phaeodactylaceae, Phaeodactylum, and it was actually a strain of P. tricornutum.     

密封袋半连续培养新月菱形藻

利用密封袋装置代替水泥池半连续培养新月菱形藻,通过控光、控温、控气来满足新月菱形藻的生长条件要求,进行了密封袋培养新月菱形藻的生产试验,效果明显好于水泥池培养,对培养水体的监控情况也进行了分析.并根据新月菱形藻的相对生长常数K、平均日增量X和平均倍增时间G,选出其最佳生长条件:光照5000～8000lx,水温15～20℃,pH7.8～8.5,接种浓度40×104～60×104个/mL.     

羟基自由基致死小新月菱形藻的生化机制

 船舶压载水中悬浮微藻的去除一直是一个难题。本文以小新月菱形藻（Nitzschia closterium minutissima）为压载水代表生物,研究了羟基自由基致死小新月菱形藻的生化机制。结果表明,当小新月菱形藻的浓度为1.2×106/mL时,致死小新月菱形藻的羟基溶液浓度范围为0.81~0.91mg/L。羟基自由基对小新月菱形藻的致死机制是对细胞蛋白质、藻糖和叶绿素等大分子的破坏,使其无法再生,从而达到压载水排放的生物量要求。     

乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠 2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的 评价用乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠 2-细胞胚胎冷冻保存的效果。方法 通过超排卵处理 后与雄鼠交配获得长爪沙鼠 2-细胞胚胎,胚胎在冷冻液 EFS20 中平衡 3 min,然后移入冷冻液 EFS40 中平衡 1 min, 之后将细胞冻存管直接浸入液氮中保存。采用二步法复苏胚胎,复苏后移入改良的胚胎培养液( mKSOM) 中体外 培养。结果 采用该方法冷冻的胚胎复苏后胚胎回收率为 86. 73% ,存活率为 82. 94% ,复苏后存活的胚胎中约 1 / 3 胚胎可以在体外发育到囊胚。结论 乙二醇玻璃化冷冻液适于冷冻保存长爪沙鼠 2-细胞胚胎。     

厌氧氨氧化菌种的低温保藏条件

剖析了厌氧氨氧化菌种低温保藏的影响因素,系统总结了保藏温度、保护剂（海藻糖、二甲亚砜、甘油等）、保藏时间、基质及活性恢复措施的设置要点。最后指出,保藏厌氧氨氧化菌种时需根据优势菌的生理特性选择恰当的保藏条件。     

实验Beagle犬精液冷冻保存方法初探

实验比格犬是生物医学研究中较常用的实验动物。采用以精液冷冻保存为基础的人工授精技术将大大推动实验犬的繁殖育种工作,为此,本实验尝试用两种不同配方的冷冻保存液,三种不同的冷冻程序进行了比格犬精液的冷冻实验,结果比格犬精液经冷冻保存后,最高解冻存活率达７４％,解冻复苏率达到９７．３％,此方法用于犬的人工授精具有一定的可行性。     

药用植物种质资源超低温保存研究

针对我国药用植物资源因过度采挖导致产量逐年递减的现状,从超低温保存原理、超低温保存基本程序、超低温保存后材料细胞相对存活率测定及其遗传稳定性检测等方面对药用植物种质资源超低温保存技术的研究现状进行了分析与总结.