细胞选择性穿膜肽的穿膜效果研究

细胞穿膜肽是一类能够穿透细胞膜并且不损坏细胞膜结构的小分子多肽,该多肽一般由不多于30个氨基酸组成.针对FITC标记的具有肺癌或肝癌细胞选择性的两种穿膜肽,设置不同浓度梯度,分别处理多种肿瘤细胞,荧光显微镜下观察不同作用浓度下细胞中绿色荧光的强弱,并通过流式细胞仪检测含有荧光的细胞数.结果表明:两种细胞穿膜肽具有不同的细胞选择性. CPP33在作用浓度为10μmol/L时能观察到较强的荧光选择性,流式细胞仪检测含有荧光的细胞数约大于50%,CPP44在作用浓度为10μmol/L时能观察到较强的荧光选择性,流式细胞仪检测含有荧光的细胞数约大于60%.并且随着作用浓度的增加,两种细胞中含有荧光的细胞数不断上升.因此这种针对肿瘤细胞的选择性穿膜肽可能为小分子药物在体内的精确递送提供一种新的方法.     

细胞穿透肽增强抗肿瘤效果的研究进展

细胞穿透肽(CPPs)是一种能够穿透细胞膜的多肽,可携带多种物质进入细胞内,并产生生理活性.现有一些抗肿瘤药物由于其本身的水溶性差、活性低、毒性大和易产生耐药性等缺陷,影响了肿瘤治疗效果.综述了近几年来细胞穿透肽增强抗肿瘤效果的研究进展,为更好地寻求治疗肿瘤药物的给药途径提供新思路.     

正反向Penetratin转导肽细胞穿膜效率的初步比较

目的:实验致力于研究正反向细胞穿膜肽Penetratin携带工具的穿膜效率,为进一步解决大分子药物的临床应用奠定基础。方法:通过质粒构建重组成融合质粒载体pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(-)-EGFP,分别在BL21(DE3)中进行表达、经过His标签蛋白纯化柱纯化,得到比较纯的融合蛋白,然后用这些蛋白与HeLa细胞共同孵育,进行蛋白质的穿细胞功能检测。结果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(-)-EGFP穿细胞膜能力类似,而His-EGFP不具有细胞穿膜功能。结论:经过研究验证正向和反向序列Penetratin穿膜能力类似,并且两种融合蛋白穿膜机制与膜受体无关,属于被动运输的一种,两种融合蛋白对细胞无创伤作用,为开发新药成功建立了技术平台。     

2015-02 国外期刊亮点

发现高效杀伤肿瘤细胞的人工阳离子多肽AIK恶性肿瘤严重危害人类健康和生命,目前常用抗肿瘤药物存在疗效低等问题,寻找高效、低毒、特异性强的药物成为肿瘤治疗的当务之急。哈尔滨医科大学医学遗传学教研室周春水课题组筛选发现了能高效杀伤肿瘤细胞的小分子阳离子多肽AIK。实验证实AIK是一种广谱、高效的抗瘤肽,对肺巨细胞癌95C细胞、人白血病HL-60细胞、宫颈癌He La细胞、小鼠肝癌     

国内期刊亮点

<正>发现高效杀伤肿瘤细胞的人工阳离子多肽AIK恶性肿瘤严重危害人类健康和生命,目前常用抗肿瘤药物存在疗效低等问题,寻找高效、低毒、特异性强的药物成为肿瘤治疗的当务之急。哈尔滨医科大学医学遗传学教研室周春水课题组筛选发现了能高效杀伤肿瘤细胞的小分子阳离子多肽AIK。实验证实AIK是一种广谱、高效的抗瘤肽,对肺巨细胞癌95C细胞、人白血病HL-60细胞、宫颈癌He La细胞、小鼠肝癌     

细胞的跨膜信号传递功能

无论是单细胞生物还是多细胞生物的每一个细胞,在其生活历程中,无时不刻要受到细胞外界环境中的各种理论因素（如各种化学物质和机械的、电的和一定波长的电磁波、声波等信号）的作用和影响。在这些刺激因素中,除少数[一些脂溶性的小分子类固醇激素、甲状腺素、一氧化碳（CO）和一氧化氮（NO）等]外,不能穿透细胞膜进入细胞内部直接发挥其作用,它们必须经过细胞膜上的跨膜信号传递或称跨膜信号转换机制,转换为细胞内化学信号物（“第二信使”物质和所谓的“第三信使”物质）、膜电位的变化、质膜和细胞内膜的离子通透性改变等后,才…     

大肠杆菌表面展示结核分枝杆菌噬菌体结合肽

构建重组表达载体,将分枝杆菌噬菌体中分离出小分子肽段PK34的基因与大肠杆菌外膜蛋白OmpC基因相融合,并利用OmpC自身启动子将PK34及组氨酸标签在大肠杆菌外膜上进行重组蛋白表达,借助磁珠建立表面展示体系.结果表明,利用外膜蛋白OmpC的穿膜特性,能够在大肠杆菌表面对分枝杆菌噬菌体PK34肽段进行展示.通过表面展示...     

脂质体模型在抗菌肽膜作用机制研究中的应用进展

抗菌肽是一种阳离子、两亲性的膜活性多肽,具有广谱抗菌活性,改变膜渗透性,且对宿主正常细胞的毒副作用较小的特点.近年来研究表明,抗菌肽最基本的作用方式是破坏细菌的细胞膜结构,因此抗菌肽膜作用机制的研究引起了人们的广泛关注.为了研究抗菌肽与细菌细胞膜的相互作用,根据细胞膜磷脂成分的差异,以脂质体模拟细胞膜的模型,逐步成为抗菌肽结构与功能研究中的常用方法.对脂质体模型在抗菌肽结构、功能以及膜作用方式等研究中的作用、意义和方法进行了综述.     

穿膜肽Tat以脂筏介导的巨胞饮方式进入骨髓间充质干细胞

艾滋病病毒的一个富含精氨酸的Tat多肽具有穿膜转导蛋白功能并能介导多种外源性物质进入细胞甚至细胞核.本研究的目的是探讨Tat多肽进入骨髓间充质干细胞的机制.将FITC标记的Tat分别和Alexa Fluor 546-标记的转铁蛋白(笼形蛋白介导的受体内吞方式入胞)、Alexa Fluor 594-标记的霍乱毒素B(脂筏介导的巨胞饮内化方式入胞)同兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)共孵育.用激光共聚焦扫描显微镜可观察到在BMSCs中穿膜肽Tat和霍乱毒素B呈点状叠加而与转铁蛋白几乎无叠加,同时在细胞核部位观察到有绿色荧光的Tat,初步表明穿膜肽Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs而非受体介导的内吞方式.另外,低温(4℃),破坏ATP、β-环式糊精和诺考达唑内吞抑制剂的使用均可观察到BMSCs内吞Tat的量降低,也间接验证Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs.     

多肽Tat与CdTe量子点共价偶联后的跨膜转运

利用偶联剂EDC将具有跨膜转导功能的多肽Tat与水溶性CdTe量子点进行偶联,并用超滤膜反复超滤纯化,然后比较偶联产物和游离量子点进入PLC细胞的量.对接有多肽的量子点进行研究,结果表明,其荧光发射光谱发生了红移.与游离的量子点相比,修饰后的量子点具有更高的细胞膜穿透性,更容易穿过细胞膜进入PLC细胞内部.     

非内吞依赖型生物大分子药物胞质递送策略研究进展

生物大分子药物由于具有高效、高特异性等优点,已成为新一代治疗药物的重要组成部分,但其分子稳定性差、易被酶解、难以跨越生物膜。传统的生物大分子药物纳米递送策略的有效性主要受限于溶酶体逃逸效率低,针对性开发非内吞依赖型的胞质直接递送策略具有重要意义。本文综述细胞穿透肽、低pH插入肽、清道夫受体介导的非内吞作用、膜融合、内质网途径、硫醇介导、基于液-液相分离技术的非内体捕获型生物大分子药物胞内递送策略的效应机制和研究进展,并分析了技术转化难点。     

Cε3-Cε4结合肽筛选及鉴定

为了获得免疫球蛋白E(IgE)特异性结合肽,采用固相筛选法,以Cε3-Cε4为靶蛋白,利用噬菌体随机多肽展示技术进行筛选,4轮筛选后,经ELISA鉴定获得19个阳性单克隆噬菌体,阳性率达38％,测序并翻译后共获得11个结合肽.竞争抑制性实验证明P7,P13,P20与Cε3-Cε4蛋白的结合能力较强,细胞水平分析表明:结合肽P7,P20可阻止IgE与其受体结合.本研究将为进一步探索IgE结合肽生物学功能奠定基础,并为设计治疗变态反应性疾病的小分子药物提供参考.     

R9-FOXM1(1-234aa)重组蛋白批量纯化及其抑瘤效应研究

通过基因工程构建重组表达质粒pET15b-R9-FOXM1(1-234aa),转化大肠杆菌建立构建表达R9-FOXM1(1-234aa)的菌株.采用原核表达系统和His-tag亲和纯化手段,规模化制备纯化穿膜肽R9-FOXM1(1-234aa),获得的蛋白的纯度达到90%以上.用R9-FOXM1(1-234aa)穿膜肽处理不同的肿瘤细胞,通过MTT实验研究其细胞效应.结果显示:当R9-FOXM1(1-234aa)穿膜肽的浓度达到2mM时,肿瘤细胞的死亡率为50%左右.实验表明穿膜肽R9-FOXM1(1-234aa)抑制不同肿瘤细胞的生长,有可能成为治疗肿瘤的潜在蛋白类药物.     

多肽的表面展示与结构库

表面展示是一种新的基因操作技术,它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面,保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽(蛋白质)的性质、相互识别和作用,并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构。常用丝状噬菌体、T₄噬菌体、λ噬菌体以及细胞构建表面展示系统。表面展示库包括重组噬菌体抗体库、随机短肽库、多肽构象库、cDNA展示库和基因突变体展示库。表面展示技术可用于人工抗体和疫苗的制备、抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离、细胞表面工程的研究、多肽药物的研制,以及生物分子实验定向进化等研究。     

酶解蛋膜制备小分子多肽的工艺研究

目的 以废弃蛋膜为原料,用碱性蛋白酶水解制备小分子多肽.方法 在单因素实验的基础上以水解度、肽质量分数为响应值,采用4因素(时间、温度、酶用量、pH)3水平的响应面(Re-sponse Surface Method,RSM)分析法根据回归分析确定影响因子.结果 在分析各因素的显著性和交互作用后,得到最佳水解条件:时间2.3h、温度48℃、酶用量2.0%、pH9.1,蛋膜水解度(DH)达到18.23%,肽含量达到62.38%.结论 为废弃蛋膜的综合利用提供了一条思路.     

多肽修饰的还原敏感型靶向光敏剂的合成及生物活性评价

采用穿膜肽(八聚精氨酸)作为连接基团,双硫键为敏感化学键,叶酸作为靶向基团,修饰光敏剂替莫卟吩(m-THPC),制备了一种多肽修饰的还原敏感型靶向光敏剂1,其结构经核磁共振氢谱(~1HNMR)和基质辅助激光离子化飞行时间型质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行表征.研究表明,八聚精氨酸的引入,可显著改善m-THPC的溶解度和提高肿瘤细胞的靶向性;在谷光甘肽(GSH)作用下,光敏剂1可释放出m-THPC, 6 h时的释放率大于80%.细胞毒性实验表明,光敏剂1在浓度为15μmol/L时, HeLa细胞的存活率可降至36.1%,细胞毒性大于叶酸-PEG-羧酸卟吩(光敏剂7).     

稀土与体内小分子的作用

稀土元素目前广泛应用于农业、医学及生物的诸多领域中，主要就是由于稀土元素进入体内以后，可以与细胞膜上的小分子形成配合物，从而影响细胞的各种生理、生化反应，但是关于稀土元素作用时过膜与否还未定论，这也是今后研究的重点和方向。     

人卵巢癌细胞靶向多肽的筛选与初步鉴定

采用改良的生物淘筛(Biopanning)流程,以人卵巢癌细胞为靶细胞进行5轮消减筛选,从噬菌体展示12肽文库(Ph.D-12phage displayed peptide library)筛选到靶向人卵巢癌的12肽克隆,通过ELISA、细胞免疫荧光法等方法从细胞水平鉴定了最佳阳性多肽噬菌体克隆R20靶向卵巢癌细胞的特异性和敏感性。结果显示:R20可以特异的、敏感的与卵巢癌细胞SKOV3结合,不与正常细胞或者其他癌细胞结合,具备进一步研发为卵巢癌导向分子元件而应用于卵巢癌靶向诊治试剂或药物研发的潜力。     

吉西他滨3′-氨基酸酯化拟肽类化合物的合成及生物活性评价

吉西他滨是临床上常用的一种拟核苷类抗肿瘤药物,临床实验表明吉西他滨在小肠中的渗透效率偏低,其在体内的平均口服生物利用度仅为37.6%。小肠寡肽转运蛋白(PEPT 1)是位于小肠细胞膜上的一种跨膜转运蛋白,其对于体内拟肽类化合物具有显著的主动跨膜转运活性。针对于PEPT 1的转运特性,选择性地合成了8种吉西他滨3'-氨基酸酯化拟肽类化合物,所有的化合物结构经ESI-MS和1HNMR确证。同时体外活性实验表明,所有化合物与PEPT 1的亲和度都有一定程度的提高,其在Caco-2细胞的膜渗透效显著增强,同时部分化合物5c,5e还展现出了很好的体外抗肿瘤细胞增殖活性。     

文蛤活性肽的研究现状及应用前景

文蛤活性肽是一类小分子多肽,它具有被肠道直接吸收的营养特性,且具有较强的肿瘤抑制作用、抗氧化活性等,成为当前研究的热门课题之一。该文综述了文蛤活性肽的制备、分离纯化及功能活性方面的研究进展,并阐明文蛤活性肽在医药、食品及化妆品等领域中的潜在应用价值,为进一步开发利用文蛤活性肽提供一定的参考。