一种高倍扩增细胞因子诱导杀伤细胞方法

CD3单克隆抗体分别以包被和悬浮的方式刺激人外周血单个核细胞,并以不同的基本培养基(RPMI-1640、IMDM、DMEM/F-12 (1:1)和M199)以及抗氧化剂(2-巯基乙醇和亚硒酸钠)培养细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞,分别测定细胞的扩增、表型(CD3CD56和CD25)和非MHC-限制性毒性(NK 毒性和LAK毒性).结果显示高浓度CD3单克隆抗体包被刺激方式的细胞集落和细胞扩增倍数大于悬浮刺激方式.基本培养基DMEM/F-12 (1:1)的扩增倍数优于其他3种基本培养基.抗氧化剂2-巯基乙醇和亚硒酸钠均有促进CD25抗原形成的作用,亚硒酸钠能提高CIK细胞的毒性,而2-巯基乙醇对于细胞的扩增有促进作用.建立了一种高倍扩增CIK细胞的方法,20 d细胞平均扩增倍数可以达到千倍以上.     

同种异体的细胞毒性T淋巴细胞诱导和培养

通过诱导获得了移植的ＣＴＬ（细胞毒性Ｔ淋巴细胞）并为建立大规模培养系统而研究了其培养条件，通过外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）与经Ｘ－射线辐射的肿瘤ＳＱ－５在含有白细胞介素（ＩＬ）１、２、４、６的Ｒｈａｍα培养液中共同培养３天以上，获得了抗人肺鳞状癌肿ＳＱ－５的人的ＣＴＬ．ＣＴＬ杀伤靶细胞的靶效比是１．在含有人的血清白蛋白（ＨＳＡ）培养液中这种ＣＴＬ生长很快，保存３个月以后仍保持很高杀伤活性，达９５％以上。与非靶的肿瘤细胞相比，ＣＴＬ表现出对靶细胞的特异活性，在一个月内即可获得足够量的ＣＴＬ（１０￣（１０）－１０￣（１１）个）．这些结果表明应用培养的ＣＴＬ治疗各种癌症是有良好前景的治疗技术。     

去甲斑蝥素对人乳腺细胞MCF—7的杀伤效应及其可能机制

用１０μｇ／ｍＬ去甲斑螯素（ＮＣＴＤ）作用于人乳腺癌细胞,以ＭＴＴ法、流式细胞仪、台盼蓝排斥法和透射电等方法分别观察ＮＣＴＤ对癌细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明：ＮＣＴＤ对乳腺癌细胞的杀伤作用有时间和剂量依赖性,药物作用２４ｈ后,Ｇ１期细胞减少,Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增多,凋亡细胞百分比升高阈可见到凋亡细胞的形态学变化。     

IL-2联合银耳多糖激活的脾细胞对体外肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法用甲基-3氢胸腺嘧啶核苷标记肿瘤细胞H22,B16,p815,将标记的靶细胞悬液调至1×105/mL,分别以效靶比40∶1,20∶1和10∶1加入效应细胞,混匀后置37℃5%CO2培养箱内培养2h,2h后用γ-闪烁记数仪对上述细胞悬液进行检测.结果 2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,p815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强(P<0.05),且效靶比越高,杀伤作用越强.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肿瘤细胞,IL-2与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.     

利用经修饰的survivin短肽体外诱导对胃癌细胞系具有限制性杀伤作用的特异性细胞毒性T细胞

采用一种简单有效的方法体外诱导经修饰的survivin短肽特异性细胞毒性T细胞,并观察其对胃癌细胞的杀伤作用。选取对HLA-A2分子亲和力更高的survivin短肽(96—104,LLLGEFLKL,HLA-A2限制性)以更有效地诱导特异性T细胞。选取正常志愿者外周血单核细胞,筛选其中HLA-A2+者,利用HLA-A2/survivin短肽有效诱导特异性细胞毒性T细胞。Pentamer实验检测特异性细胞毒性T细胞比率。Elispot实验检测细胞毒性T细胞IFN-γ分泌能力。选取胃癌细胞系MKN28、SGC7901及KATO Ⅲ,检测其HLA-A2和survivin表达情况。检测特异性细胞毒性T细胞对三种细胞系的杀伤效果。Pentamer实验结果显示,HLA-A2/survivin短肽刺激之前短肽/HLA Pentamer和CD8双阳性细胞仅为0.06%,接受刺激后双阳性细胞增加到27.5%。Elispot实验结果显示HLA-A2/survivin短肽刺激后IFN-γ分泌细胞比率明显强于阴性对照组。PCR结果显示,KATO Ⅲ为HLA-A2+,MKN28和SGC7901为HLA-A2-。Western Blotting结果显示KATO III和SGC7901为survivin阳性,MKN28为survivin阴性。特异性细胞毒性T细胞杀伤结果显示,细胞能有效杀伤KATO III细胞,但对其他两种细胞杀伤效果不明显。p<0.01。经修饰的survivin短肽能够有效诱导特异性细胞毒性T细胞,并对胃癌细胞系有HLA-A2/survivin限制性杀伤。     

新型两亲性酞菁锌杀伤Bel - 7402人体肝癌细胞研究

合成了新型两亲性α -四(对羟甲基苯氧基)酞菁锌(Ⅱ)光敏剂,采用UV - Vis、元素分析、IR、激光解吸电离飞行时间质谱(TOF - MS)对配合物进行了表征.在光诱导条件下,采用四甲基偶氮唑蓝比色法研究了此酞菁锌配合物对Bel - 7402细胞抑制作用,考察了质量浓度对配合物的抑瘤效果的影响,确定其IC50值.结果发现:酞菁锌是一种很有潜力的抗癌光敏剂,并探讨了其抑瘤机制.     

pEgr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞杀伤效应的实验研究

目的研究p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射对MCF-7细胞的杀伤效应,为增强肿瘤放疗效果提供实验证据.方法应用Annexin V-EGFP/PI双染法检测细胞凋亡;应用酶标仪检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期.结果不同处理组作用MCF-7细胞后24 h、不同剂量X射线照射后24 h后,各处理组MCF-7细胞的生长抑制率呈上升态势,生长抑制由弱到强的顺序为:2.0 Gy,p Egr1-Trail+0.5 Gy,5.0 Gy,p Egr1-Trail+1.0 Gy,p Egr1-Trail+2.0 Gy,Egr1-Trail+5.0 Gy.各处理组联合2.0 Gy X射线照射后6 h,细胞凋亡率开始上升,48 h达高峰,其中p Egr1-Trail+2.0 Gy组与其他各处理组比较差异具有统计学意义,且细胞凋亡最为显著(P0.05).在细胞周期方面,2.0 Gy X射线照后6 h各处理组S期细胞百分数呈现上升趋势,24 h达高峰;照后24 h,G_2+M期细胞百分数开始上升,且各处理组比较差异均具有统计学意义(P0.05);照后48 h,G_2+M期细胞百分数达到最高,依旧是p Egr1-Trail+2.0 Gy组上升最显著.结论 p Egr1-Trail重组质粒联合电离辐射作用于肿瘤细胞表现出协同杀伤效应,促凋亡作用强于单独X射照射组或p Egr1-Trail基因干预组.     

IL-10修饰的树突状细胞的体外生物学效应研究

探讨lL-10修饰的树突状细胞（DC）对T细胞增殖和细胞毒性T细胞（CTL）胞毒活性的影响。采用乳酸脱氢酶法和ELISA法，分别测定细胞毒活性及T细胞凋亡。结果表明，IL-10对同种细胞刺激的增殖反应和特异性CTI．细胞毒活性有明显的抑制作用，修饰的DC诱导淋巴细胞增殖反应明显降低，而未修饰的DC诱导淋巴细胞增殖反应较强；IL-10和修饰的DC可诱导淋巴细胞凋亡．可见，稳定表达IL-10的DC，对T细胞增殖和对胞毒活性有明显的抑制作用，并可诱导T细胞凋亡。     

盐酸去氢骆驼蓬碱诱导人胰腺癌AsPC-1细胞凋亡

目的:探讨盐酸去氢骆驼蓬碱对人胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察盐酸去氢骆驼蓬碱对胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞凋亡及自噬相关蛋白的表达水平。结果:盐酸去氢骆驼蓬碱作用人胰腺癌AsPC-1细胞后,不同浓度的药物对其生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),24、48及72h的IC50分别约为116.5、66、22.3μmol.L-1;与对照组相比随着盐酸去氢骆驼蓬碱浓度的增加,细胞克隆逐渐减少;不同浓度盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,均出现明显的晚期凋亡及坏死细胞群,且呈剂量-效应关系;盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,胰腺癌AsPC-1细胞出现Caspase-3、PARP酶切活化,同时自噬标记性蛋白LC3Ⅱ增加,P62减少。结论:盐酸去氢骆驼蓬碱通过诱导细胞凋亡及自噬的方式抑制人胰腺癌AsPC-1细胞的生长。     

细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞(CIK)培养条件优化的研究

肿瘤生物治疗目前是继手术、药物、放化疗治疗之后的第四种肿瘤治疗主要手段,目前,临床上应用最广泛的是细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞(CIK).由于CIK培养方式多样,因子选择及配比不同,医疗机构各有不同,造成CIK细胞数量、有效细胞数量、杀伤率有较大的差异.本研究通过对无血清培养基中添加的单克隆抗体CD3,注射用重组人白介素-2(IL-2),采血者自体血浆进行正交实验,得知在无血清培养基中加入CD3 100ng/mL,I-2 700IU/mL,自体血浆2％时,培养效果最好,双阳性有效细胞比率可达97.88％,以效靶比10:1接种,MTT法检测,效应细胞CIK对Hela细胞杀伤率为32.80％.初步观察此种培养条件下的CIK细胞在临床治疗上有一定的疗效.     

小鼠脾脏和SRS淋巴瘤体外培养细胞株的电泳行为

本文比较了SRS淋巴瘤体外培养细胞株及其宿主小鼠脾脏细胞的电泳行为。两种细胞都具有快、慢两个电泳主峰。经抗θ血清处理和尼龙柱过滤的结果表明,快峰为T细胞,慢峰为B细胞。SRS淋巴瘤细胞体外培养株,主要是T,B混合细胞型,其中B细胞约占60%～70%,T细胞约占30%～40%。     

DC-CIK过继转移联合微创技术治疗消化道肿瘤

建立免疫效应细胞联合微创技术回输治疗消化道肿瘤技术平台.新入组病人首先制定综合治疗方案,预先进行免疫效应细胞的制备并在术中、术后早期采用微创技术进行回输.经肝动脉输注+TACE2例;腹腔镜+射频消融+局部注射治疗5例;腹腔镜手术+局部注射治疗3例;达芬奇机器人+局部注射2例;超声引导下腹腔内注射120例.免疫效应细胞联合微创技术回输治疗消化道肿瘤技术具有可行性和安全性,初步分析表明疗效显著.     

离体培养中黄槐叶片细胞脱分化的细胞学观察

黄槐叶片外植体接种于 MS+2,4-D 1 ppm+NAA 1 ppm+6-BA 2 ppm 培养基上,外植体的维管薄壁细胞及维管束鞘细胞先脱分化启动,而后栅栏组织细胞脱分化,进而形成愈伤组织.细胞脱分化启动时有两个明显特点:一是细胞质变浓,核相对变大,核仁明显;二是细胞开始积累淀粉.细胞脱分化过程中细胞分裂方式以无丝分裂为主,有丝分裂较少.通过观察无丝分裂的主要过程,可以认为它是典型的劈裂式无丝分裂.文中还对两种细胞分裂方式在愈伤组织形成中的意义进行了讨论.     

异博定增强平阳霉素对体外培养人喉癌细胞的毒性及机制

为探讨钙拮抗剂异博定是否能增强平阳霉素对人癌细胞的毒性,利用体外培养人喉癌细胞对二药单用和合用效果进行了比较研究.结果表明,非抑制浓度的异博定使平阳霉素的半抑制浓度显著下降;平阳霉素与异博定联合处理后,细胞存活率下降到单用平阳霉素的1/16～1/43;异博定能增强平阳霉素对人喉癌细胞的毒性,原因之一是异博定促进了细胞对平阳霉素的吸收,使药物在细胞内的积聚增加,但对该药外排无显著影响.     

大白鼠淋巴结树突状细胞的组织化学特征

以Wistar大鼠淋巴结为材料作ATP酶(ATPase)、非特异性酯酶(NSE)、5′-核苷酸酶(5′-N)和酸性磷酸酶(ACPase)的组织化学反应,可显示淋巴结中的一些树突状细胞。ATP酶反应具有特异性,既可显示出树突细胞的形态,又可根据分布情况进一步确定其为镶嵌型树突状细胞,还是Nossal氏滤泡树突网状细胞。     

人胎儿子宫肌层的平滑肌细胞超微结构研究

利用电镜研究胎儿子宫肌层的平滑肌细胞在不同胎龄阶段（6个月、7个月、8个月、足月）的超微结构。结果发现随着胎龄的增长，平滑肌细胞显示下列形态变化：（a)胞质的细胞器减少；（b)核表面的凹陷增加和加深；（c)糖元颗粒聚集，细胞表面的半桥粒状致密斑及带有电子致密体的5nm微丝束逐渐增多；（d)到足月妊娠时，其形态与育龄妇女的子宫肌层的平滑肌细胞极为相似，在任何胎龄到足月妊娠时，其形态与育龄妇女的子宫肌层的平滑肌细胞极为相似，在任何胎龄的子宫肌层里均可见到平滑肌细胞间有间质细胞和一些成熟较差的平滑肌细胞。由于样本取自肌层中间部位，及肌层内间质细胞随着胎龄的增长而减少，歌曲以认为平滑肌细胞增多，可能是由于肌层里间质细胞分化的结果，由于在雌激素作用下，核体大量出现及黄体酮促使糖元颗粒聚集成团，本研究结果提示胎儿子宫肌层平滑肌细胞的成熟可能与雌激素主黄体酮的作用有关。     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。