转瓶中不同供氧状况对昆虫细胞生长和代谢的影响

对传统转瓶进行了改进,使之成为一套既可有效控制供氧又可在线检测细胞摄氧率的小型多功能培养装置,并在此基础上,系统考察了不同供氧状况对ＩＰＬＢ－Ｓｆ２１－ＡＥ昆虫细胞生长和代谢的影响。结果表明：维持适宜的溶氧水平对优化昆虫细胞的生长和代谢至关重要,昆虫细胞的摄氧率与其生长代谢密切相关,并可作为在线监控细胞生理状态的重要依据。     

转瓶中不同供氧状况对昆虫细胞生长的代谢的影响

对传统转瓶进行了改进,使之成为一套既可有效控制供氧又可在线检测细胞摄氧率的小型多功能培养装置,并在此基础上,系统考察了不同供氧状况对ＩＰＬＢ－Ｓｆ２１－ＡＥ昆虫细胞生长和代谢的影响。结果表明：维持适宜的溶氧水平对优化昆虫细胞的生长和代谢至关重要,昆虫细胞的摄氧率与其生长代谢密切相关,并可作为在线监控细胞生态状态的重要依据。     

昆虫细胞Sf9在四种生物反应器中的培养

昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×102/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度以及主要代谢产物乳酸、氨的浓度进行检测.昆虫细胞经转瓶和摇瓶培养,细胞密度达到最高分别为:5.5×106、7.3×106/mL,是起始密度的11倍和14.6倍.昆虫细胞经Bellocell和发酵罐培养,细胞密度达到最高分别为:8.01×106、1.52×107/mL,是起始密度的16.02倍和30.4倍.昆虫细胞经四种生物反应器中的悬浮培养之后,都达到了很高的密度,尤其是经发酵罐培养达到如此高密度,为高效大规模表达药物蛋白,奠定重要的基础.     

溶解氧控制与发酵过程摄氧率及鸟苷积累的关系

采用华东理工大学国家化工程技术研究中心（上海）生产的全自动多参数FUS－50L（A）生物反应器，在不同的控制方式下，研究了溶解氧水平对菌体代谢活力及鸟苷发酵水平的影响。结果表明：发酵过程中，用调节转速的方式控制发酵液中溶氧水平的效果比用空气流量好；发酵液中氧中溶氧水平控制在10％－20％时鸟苷积累量高，发酵液中溶氧水平低（5％）和高（30％）均不利于发酵液中的鸟苷积累。     

摇瓶发酵过程中OUR,CER和RQ的在线检测

用一种特制摇瓶可在线检测摇瓶发酵过程中Ｎ２，Ｏ２，ＣＯ２的浓度变化，继而能进一步得出过程中摄氧率，二氧化碳释放率和呼吸商随发酵时间的变化，并以酵母菌为对象菌种进行了实验研究。结果证明该实验装置和实验方法是可靠的。     

基于摄氧率的分批发酵过程阶段辨识

针对发酵阶段难以在线辨识的问题,提出了一种基于摄氧率的需氧型发酵过程阶段辨识方法.利用在线可测的摄氧率对处于特定发酵阶段的比生长率进行预估,再利用比生长率的预估值进行发酵阶段的在线辨识.由于摄氧率极易在线获得,所以这种辨识方法非常容易实现.针对诺西肽发酵过程,利用所提出的方法进行发酵阶段的在线辨识,阶段辨识结果与过程知识相一致.这不仅可以增进对当前生产状况的了解,而且可以指导适时地实施各种控制策略,从而提高产品的质量.     

一种贮存昆虫细胞系的简便方法

将６株昆虫细胞系贮存在４－１００℃冰箱中，其中２株细胞紧密贴附培养瓶壁生长的细胞系的贮存时间分别超过４个月和５个月，３株细胞疏松附壁生长的细胞系的贮存时间２个月，以上细胞系贮存后的复苏状况良好。在贮存期间更换培养液有助于延长贮存时间。细胞不贴附瓶壁的细胞系贮存６０天后不能复苏。     

倾转旋翼机直升机状态前飞时系统稳定性判定的一种方法

本文建立了倾转旋翼飞机直升机模式的非线性气弹分析模型,采用数值分析方法——纽马克法和牛顿—拉斐逊迭代法相结合的方法计算出倾转旋翼飞机直升机状态前飞时系统对初始条件的响应,通过考察系统从初始时刻到任意时刻之间的响应过程,判断系统的稳定性。     

非确定系统中可观察状态集的识别序列的一种推导方法

主要针对非确定系统（实际中的大部分系统都具有非确定性），提出可观察状态集的识别序列的定义，并对于按照观察等价关系化简的系统的实现的集合，给出一种生成可观察状态集识别序列的方法．     

减少细胞自动机城市空间演化模型中待定参数的一种方法

针对目前细胞自动机城市空间演化模型中存在较多待定参数的情况,通过引入定量描述土地功能值的方法,有效地减少模型中的待定参数,提高模型的实用性．该模型用于桂林市区1973～1993年城市空间演化的重建过程,模拟结果与实际的卫星图片基本符合．     

人脐血造血干细胞在转瓶中的悬浮培养

考察经分离纯化后的人脐血CD34+富集细胞在转瓶中的扩增特性,细胞因子为SCF+IL-3+IL-6。实验发现,无论24孔板静态培养还是转瓶悬浮培养,孔板和转瓶内总细胞数分别扩增了(658.7±98.0)倍和(107.3±15.0)倍,说明CD34+具有很大的扩增潜能。对比两种培养体系下细胞集落扩增倍数发现,培养初期孔板内的集落形成能力要大于转瓶,但到培养后期,孔板内集落形成能力下降速度远大于转瓶。孔板中的CFU-GM(粒细胞-巨噬细胞集落形成单位)扩增倍数在第14天为(5.6±0.4)倍,第21天为(1.7±0.5)倍,转瓶中在第14天为(2.1±0.7)倍,第21天为(1.8±0.5)倍。对比两者的CD34+扩增情况,孔板在第14天CD34+含量达到最大值,而到第21天则大大降低,而转瓶内CD34+含量仍可保持在原第14天的水平,转瓶内的CD34+细胞的扩增也比孔板保持较长时间。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在昆虫细胞中的胞内表达

通过基因重组的方法,在昆虫细胞胞内表达了猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）S基因B和C抗原位点片段.表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性.本研究为TGEV的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础.     

一种改进的昆虫基因组DNA的提取方法

就昆虫总DNA的提取,介绍了一种简便、快速的提取方法,此方法既可对新鲜标本进行DNA提取、也可对冷冻标本、干标本、酒精泡制标本进行DNA提取,均能得到较完整的大分子DNA片段,并且得率较高.改进的昆虫总DNA提取方法简便、快速,对设备和试剂的要求都不高.     

几种诱导昆虫细胞RNA干扰质粒的构建和效果比较

构建了四种可以在昆虫细胞中表达形成dsRNA的质粒,比较了其诱导RNA干扰,抑制目标基因———绿色荧光蛋白(GFP)基因表达的效果.四种质粒都不同程度地抑制了质粒介导的GFP表达,其中尤以单个果蝇hsp70启动子表达反向重复序列,并带有杆状病毒AcMNPV增强子hr5的质粒效果最佳,使GFP表达量下降到原来的3.9%.当用于抑制由杆状病毒介导的GFP表达时,以两个相向排列的AcMNPV ie1基因启动子的构造有明显的抑制效果.这些结果对于在昆虫细胞中有效地利用RNA i研究基因功能有参考意义.     

导向溶栓分子scFv-UK32中连接肽的引入和在昆虫细胞中的表达

为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu36I digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达。表达产物分泌到上清中,共转染后第5d(天)用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107 IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性(25 IU/mL)高。ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力。Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合。     

昆虫飞行特性的视觉测量方法

该文提出了一种应用立体视觉技术测量昆虫飞行特性的方法。针对昆虫飞行的图像,尤其是对翅脉,进行预处理、分割和特征提取。指出采用区域匹配和特征匹配相结合的匹配方法,对图像进行立体匹配。最后提出对二维图像进行三维重构,计算昆虫空间坐标。通过这些步骤,可以获得描述昆虫飞行特性的信息。该文对方案进行了初步的仿真验证。使用立体视觉这种非接触性测量手段,可以不需要翅膀截面只有一次变形的假设,测量得到昆虫自由飞行时的飞行特性。     

简易经济的肝星状细胞的分离培养方法

为建立一种简易、经济的肝星状细胞(hepatic Stellate Cell,HSC)分离方法,为肝纤维化研究提供一种细胞模型。采用胶原酶、链霉蛋白酶灌注肝脏,单层密度梯度离心方法分离HSC。Desmin免疫组化染色鉴定。HSC的得率为1×107~3×107,纯度为90%以上。该方法简化了HSC的分离过程,简单、经济,适合广泛开展。     

一种确定原子基态的简易方法

本文在洪特定则的基础上,给出一种在某支壳层上有未满电子情况下,计算原子基态谱项的公式。并给出两个支壳层中有未满电子时,计算电子基态谱项的方法。     

斜抛物线状态方程式的一种简易推导法

架空线的斜抛物线状态方程式是导线应力和弧垂计算中常用的计算公式 ,但是该公式利用线长公式进行推导的方法繁琐复杂 ,采用坐标变换法 ,能给出一种简单的公式推导方法