吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶关系的同工酶研究

用细胞质雄性不育系小麦和普通小麦中国麦与鄂恩１号为材料，用Ｄａｖｉｓ和Ｒｅｉｓｆｅｌｄ不连续聚丙烯酰胺垂直析以凝胶电泳技术进行吲哚乙酸氧化酶和阴、阳离子过氧化物酶同工酶分析，并用ＳＣ９１０型双波段薄层扫描仪进行扫描，记录其谱带数及强弱，结果表明阳离子过氧化物酶同工酶谱与ＩＡＡ－氧化酶同工酶谱十分相似，而阴离子过氧化物酶酶谱相差甚远，由此表明具有吲哚乙酸氧化酶活性位点的过氧化物酶，应主要是阳离子过氧     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶的分离及其对底物的特性

用CM-纤维素柱从花椰菜的游离型过氧化物酶提取液中分离得到6个酶峰,分别出现于不同洗脱浓度的NaCl洗脱液中,它们都具有过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶活性。从结合型过氧化物酶提取液中分离得到5个酶峰,其中被115mmol.l~(-1)NaCl洗脱的为一高活性吲哚乙酸氧化酶峰,它的过氧化物酶活性很低。其余的酶峰都具有两种酶的活性。用不同的底物测定同工酶的活性,得到很不相同的结果。不同的同工酶的最适pH因底物不同而异,愈创木酚为pH5.0～6.0,咖啡酸为pH4.5～5.0,阿魏酸为pH8.5～9.0,但各同工酶之间没有明显差异。     

吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶同工酶的分离及其对底物的特性

用CM-纤维素柱从花椰菜的游离型过氧化物酶提取液中分离得到6个酶峰,分别出现于不同洗脱浓度的NaCl洗脱液中,它们都具有过氧化物酶和吲哚乙酸氧化酶活性。从结合型过氧化物酶提取液中分离得到5个酶峰,其中被115mmol.l~(-1)NaCl洗脱的为一高活性吲哚乙酸氧化酶峰,它的过氧化物酶活性很低。其余的酶峰都具有两种酶的活性。用不同的底物测定同工酶的活性,得到很不相同的结果。不同的同工酶的最适pH因底物不同而异,愈创木酚为pH5.0～6.0,咖啡酸为pH4.5～5.0,阿魏酸为pH8.5～9.0,但各同工酶之间没有明显差异。     

采后‘伏’苹果吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性的变化

随‘伏’苹果成熟衰老，果肉硬度迅速下降，吲哚乙酸氧化酶和过氧化物酶活性呈双峰曲线变化。在果实的不同部位，以果肉的吲哚乙酸氧化酶活性最高。     

辣根过氧化物酶的提取

辣根过氧化物酶(HRP)属血红素蛋白质,是目前酶工业中使用最普遍的一种酶,它既可用于定位检测,又能用于定量测定。精制HRP售价达2200元/克。HRP广泛分布于植物体中,尤其在鲜辣根(十字花科蔬菜)中含量极高。我国辣根资源极为丰富,本方法即介绍以新鲜辣根或辣根皮为原料提取HRP技术。     

辣根过氧化物酶酶学特性及应用进展

辣根过氧化物酶(HRP)是一种以亚铁血红素为氧化还原中心的过氧化物酶,从植物辣根的根部提取,目前被广泛地应用在污水处理、食品工业、有机合成和分析检测等领域.本文综述了辣根过氧化物酶的结构、固定化及辣根过氧化物酶在各个领域的应用,并对其工业应用前景及未来研究方向进行了探讨.     

辣根过氧化物酶酶学特性及应用进展

辣根过氧化物酶（HRP）是一种以亚铁血红素为氧化还原中心的过氧化物酶,从植物辣根的根部提取,目前被广泛地应用在污水处理、食品工业、有机合成和分析检测等领域。本文综述了辣根过氧化物酶的结构、固定化及辣根过氧化物酶在各个领域的应用,并对其工业应用前景及未来研究方向进行了探讨。     

辛伐他汀联合5-FU对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨辛伐他汀(Sim)联合5-FU对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养人白血病K562细胞,用MTT法观察Sim联合5-FU对细胞的增殖抑制作用,实时荧光定量RT-PCR观察对bcr/abl融合基因mRNA表达水平的影响。流式细胞术、Hoechst33258染色观察Sim与5-FU联合应用诱导细胞凋亡的作用。结果:低浓度的Sim与5-FU联合应用在抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡,均较各单一高浓度用药组的作用明显增强,并且下调bcr/abl融合基因mRNA表达。结论:Sim与5-FU联用具有明显的协同抑制细胞增殖的作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡,下调bcr/abl融合基因的表达有关。     

辣根过氧化物酶活性的电化学研究

将辣根过氧化酶固定在铜电极的表面制成酶电极,利用循环伏安法从pH值、富集时间、H2O2浓度三方面寻求酶活性的最佳条件,得出pH=6.7,富集时间为25 min时,酶的活性最大,且H2O2浓度在1.0×10-4~4.0×10-3mol/L之间呈良好的线性关系.     

辣根过氧化物酶修饰电极的研究进展

过氧化物酶修饰电极在H2O,芳香胺,酚类,葡萄糖等物质的测定中有着很重要的作用,所以近年来得到了较为广泛的研究和发展,本综述重点介绍了辣根过氧化物酶修饰电极的检测原理,制备方法及其应用,比产全面地总结了近十几年来辣根过氧化物酶修饰电极的研究和应用情况,并展望了其发展前景,引用文献73篇。     

石蒜碱对人白血病细胞K562凋亡作用的研究

为了研究石蒜碱对人白血病细胞K562的凋亡作用,采用MTT法检测石蒜碱对K562细胞的细胞毒作用,数据表明石蒜碱对K562细胞的IC50为16.000μmol/L.流式细胞仪检测石蒜碱对K562细胞凋亡率的影响,数据表明给药剂量越大,其凋亡率越高,凋亡率与给药剂量呈依赖关系.激光共聚焦扫描显微镜检测石蒜碱对K562细胞膜电位的影响,数据表明随着给药剂量增大,膜电位逐渐降低,且成剂量依赖关系.结果显示石蒜碱能够诱导K562细胞凋亡并使其膜电位降低.     

Apoptosis induced by （DIPP-L-Leu）2-L-Lys-OCH3 in K562 cells

Apoptosis as a mechanism of deleting cells from tissues plays an important role in physiological and varieties of pathological situations, especially cancer conditions. In order to search for tumor cells apoptosis inducers, the inhibition effects on K562 cells of N-phosphoryl dipeptide methyl esters were studied by MTT assays, and (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 was the compound which had the best activity. From the studies of the typical apoptotic morphologic changes, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry analysis, it could be concluded that (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 could induce apoptosis of K562 cells in a dose-dependent manner, and the IC50 was 22.66 μmol/L according to MTT assays.     

3-MA 对阿霉素诱导 K562、K562 / ADM 细胞凋亡及其相关基因 mRNA 表达的影响

目的：通过自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对阿霉素（ADM）诱导白血病K562细胞及K562／ADM细胞的细胞效应和自噬基因Beclinl、凋亡抑制基因SurvivinmR．NA表达的变化观察,探讨自噬在细胞凋亡中的作用和机制．方法：体外培养K562和K562／ADM细胞,采用MTT法分别检测ADM及3-MA预处理对K562、K562／ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时RT—PCR法检测细胞自噬及凋亡相关基因（Beclinl、Survivin）mRNA表达的变化．结果：ADM可抑制K562与K562／ADM细胞增殖,且抑制作用呈现浓度与时间依赖性．ADM诱导组K562与K562／ADM细胞在24h、48h、72h细胞凋亡率均较空白对照组明显提高（P〈0．05）．在ADM诱导前,经3-MA预处理可使ADM诱导的K562与K562／ADM细胞抑制率和细胞凋亡率均较单用ADM显著提高（尸〈0．05）,Bedin1、SurvivinmRNA相对表达量均较单用ADM明显下降（P〈0．05）,呈正相关（r=0．827,P〈0．01）．结论：ADM可抑制K562、K562／ADM细胞的生长,并诱导细胞凋亡．3-MA通过抑制细胞的自噬可增强ADM诱导白血病细胞K562、K562／ADM的凋亡,其机制可能与下调BeclinlmRNA表达,而使Survivin表达受抑制有关．     

二异丙氧基磷酰化亮赖叉肽甲酯诱导K562细胞凋亡

为寻找能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的小分子诱导剂,研究了二异丙氧基磷酰化亮赖叉肽甲酯((DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3)对K562细胞的促凋亡作用。合成了(DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3,通过质谱、磷谱、氢谱和碳谱进行结构鉴定。通过MTT比色实验得到:该样品对K562细胞的半抑制浓度为22.66μmol.L-1。AO荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和Annexin -FITC/PI双染实验表明:该样品对K562细胞的增殖抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的。Caspase活性分析实验证明该样品是通过线粒体途径启动细胞凋亡。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞影响

观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞增殖的影响.采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖的影响,采用Wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱.高剂量LQC含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.灵芪胶囊含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关.     

用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响

以人红白血病K562细胞株为材料，应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K562细胞作用前后基因表达的差异，以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照，分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA，使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质；然后与由1632条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交，经扫描及对获得的数据用相关软件分析，确定K562细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因48条，有41条与羧基脲处理相同，其中上调表达的基因有32条，下调表达的基因有16条，这将为进一步建立基因芯片技术药物筛选模型奠定基础。     

Binding and endocytosis of monoterbium transferrin by K562 cells

Human serum apotransferrin is the major iron-tran- sport protein in blood. The protein binds iron as Fe3+ at two similar, but not identical, high-affinity binding sites. Although iron bound to human serum apotransferrin is less then 0.1% (~3 mg) of the total body iron, dynamically it is the most important iron pool with the highest rate of turnover. The turnover of transferrin iron is in the order of 30 mg per day and, normally, about 80% of this iron are transported to the bone marrow for hem…     

不同分子质量软骨多糖对K562细胞的增殖抑制作用

研究不同分子质量的软骨多糖对慢性髓系红白血病K562细胞的增殖抑制作用。用不同浓度的酒精对软骨提取物进行分级沉淀，得到不同分子质量的软骨多糖，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测所得软骨多糖的纯度及分子质量；采用噻唑蓝（MTF）比色法测定细胞的增殖活性；用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA电泳特征。结果显示，短链软骨多糖（分子质量约为30ku）对K562细胞具有明显的增殖抑制作用，这种抑制作用呈现明显的时间依赖性，且琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯状条带。     

Sorafenib联合重组人可溶性TRAIL蛋白对K562细胞增殖抑制和凋亡诱导的研究

目的观察比较联合应用重组人可溶性TRAIL蛋白及Sorafenib于人慢性髓系白血病细胞株K562与单独应用时细胞增殖抑制及诱导凋亡的差异。方法通过CCK-8法检测两者对K562细胞的增殖抑制作用;Western-Blot分析TRAIL或与Sorafenib联用对K562细胞的凋亡诱导作用。结果 Sorafenib与TRAIL联合作用于K562细胞时,其细胞的增殖抑制率及凋亡率均显著高于二者单独应用。结论 Sorafenib与TRAIL对K562细胞的增殖抑制及凋亡诱导有增敏及协同作用。     

铁氰化钾化学发光体系测定吲哚-3-乙酸

在碱性介质中,铁氰化钾可以直接氧化吲哚-3-乙酸（IAA）产生化学发光.基于此,结合流动注射分析技术,建立了一种化学发光测定IAA的新方法.该方法的线性范围为2.0×10^-7mol/L-1.0×10^-5mol/L,检出限为3.0×10^-8mol/L.对5.0×10^-7mol/L,1.0×10^-6mol/L,1.0×10^-5mol/L的IAA连续平行测定11次,测定的相对标准偏差分别为2.4%,2.5%和1.2%.将该法直接应用于土壤和池塘水中的IAA的测定,回收率在95.0%-104.8%之间.