牛血超氧化物歧化酶(bovine superoxide dismutase)生产工艺研究

将红细胞连续分离、热变性以及超滤技术应用在牛血SOD生产制备中，使SOD生产成本大幅降低，实现牛血SOD生产工业化，实现表明，冷冻血球和新鲜血球在酶的收率、纯度以及比活等方面无明显差别；热变性、超滤、丙酮沉淀等各工艺步骤酶的活性以及收率基本稳定；通过重组SOD技术使失去铜锌离子失活的酶蛋白恢复酶的催化活性。     

超氧化物歧化酶新制备方法的研究

研究了制备超氧化物歧化酶的一种新方法．通过加热、盐析和中空纤维超滤,得到高纯度的产品．1000mL猪血,可得到94mgSOD,比活为6312μ／mg,产率为70．8%．     

大豆β－淀粉酶的纯化和性质研究

主要介绍大豆β－淀粉酶的分离纯化。首先通过酸抽提得到粗提物，再经过乙醇沉淀，百里香草酚吸附和超滤技术进行纯化，纯化的酶用聚丙烯酰凝胶电泳检测为三条带。回收率为３５．８％；酶的比活为３４１ｕ／ｍｇ蛋白。分子量为５．３万，等电点为５．２；最适ｐＨ５－６，最适温度４０—５０℃．     

大豆β—淀粉酶的纯化和性质研究

主要介绍大豆β－淀粉酶的分离纯化。首先通过酸抽得到粗提物，再经过乙醇沉淀，百里香草酚吸附和超滤技术进行纯化。纯化的酶用聚丙烯酰凝胶电泳检测为三条带。回收率为３５．８％；酶的比活为３４１ｕ／ｍｇ蛋白，分子量为５．３万，等电点为５．２；最适ｐＨ５－６，最适温度４０－５０℃。     

细胞用胰蛋白酶制备的新工艺研究

用新鲜牛胰脏,采用盐析、层析、超滤方法对胰蛋白酶的提取和纯化工艺进行优化,探索一套胰蛋白酶制备的新工艺.结果表明:此工艺比传统工艺的操作相对简单,周期短,只需一星期;酶比活和收率比传统工艺高,酶比活可达2 368.5 BAEE/mg,收率为0.48%.可为细胞用胰蛋白酶的产业化生产提供一定的理论和实验依据.     

超滤法纯化超氧物岐化酶

研制了适合纯化猪血超氧物岐化酶(Cu.Zn-SOD)溶液的醋酸纤维素(CA)超滤膜,其截留分子量约为16 000。研究了溶液浓度、操作压力等因素对通量的影响。结果表明,自制CA膜超滤纯化SOD溶液性能优于一些市售膜。收率为86～89%,比活提高25%,纯化因子1.35。利用透析过滤法,基本上能除去溶液中游离铜离子。     

木棉花超氧化物歧化酶分离工艺的研究

探究优化木棉花超氧化物歧化酶(SOD)的提取条件,建立木棉花SOD生产工艺.以木棉花花瓣为原料,采用正交实验优化超声波提取的技术参数,结合丙酮等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析提取纯化SOD,经真空冷冻干燥获得SOD成品.超声波提取的最佳工艺为料液比1∶30,功率180 w,超声波处理总时间9 min,浸提时间8 h.沉淀杂蛋白条件为2 mol/L的HCl将粗提液调节至pH为5.0,提纯SOD条件为pH 4.0丙酮等电点沉淀法,纯化倍数达到5.59,经Sephadex G-75纯化,获得SOD成品,纯化倍数达到18.46.为木棉花SOD的规模化生产提供理论依据.     

猪血过氧化氢酶的纯化及其性质研究

采用乙醇-氯仿去血红蛋白、硫酸铵分级沉淀、CM-32 DEAE-Sephadex A-50柱层析和超滤等步骤,从猪血红细胞中获得了高纯度的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CTS),纯化后的CTS比活达7580u/mg,分子量为229 646。紫外检测CTS在280,405,505,535,583和620nm均有光吸收,经测定CTS有18种氨基酸组成,最适pH为7.0,K_m为22mmol,K_(cat)为0.18/min,金属离子对酶活性的影响与金属的浓度及所带电荷有关。     

盐地碱蓬超氧化物歧化酶的提取及抗氧化活性的研究

以盐地碱蓬为原料提取超氧化物歧化酶(SOD),采用邻苯三酚自氧化法对其酶活进行测定。实验结果表明:10g盐地碱蓬中提取的SOD,经硫酸铵分级沉淀、氯仿/乙醇沉淀、丙酮沉淀及热处理后,酶活分别为427.035U/mg、648.6736U/mg和1181.856U/mg。     

超滤法分离浮萍多糖的工艺

探索超滤法分离浮萍中免疫活性成分浮萍多糖的工艺.通过煎煮、超滤、脱蛋白、乙醇沉淀等步骤对浮萍多糖进行提取分离,硫酸-苯酚法和硫酸-蒽酮法测定提取液和样品中的总糖含量,考马斯亮蓝G250比色法测定其蛋白质含量.得到浅褐色粉末,纯度53.5%,蛋白质含量1.2%,收率6.43%.该方法可以简单、快速、有效地对浮萍多糖进行分离.     

玉米超氧化物歧化酶(SOD)的分离及纯化

用硫酸铵分级沉淀、葡萄糖凝胶过滤及离子交换柱层析从玉米中分离纯化SOD,并采用考马斯亮蓝G-250法测蛋白含量,NBT光还原法测定SOD酶活性,得到酶比活力为115.522U/mg.Pr,回收率为1.02%,提纯倍数7.77的SOD.同时进行了蛋白染色、SOD酶活性染色及非变性凝胶电泳(PAGE)研究,得到了电泳均一的SOD酶.     

一种小牛凝乳酶制备的新工艺

利用新生小牛皱胃,通过吸附、离心、超滤浓缩等方法提取凝乳酶,结果表明,该方法提取工艺简单、耗时短、产品纯度高、酶活可达102万U/g,比目前市场销售的Sigma凝乳酶产品2万U/g高出50倍,产品收率为1.71%,是一种生产成本低,适合于产业化生产凝乳酶的新工艺.     

猪心肌乳酸脱氢酶的提纯工艺及酶反应最适条件

研究了适合于工业化生产的猪心肌乳酸脱氢酶的初步提取工艺，经硫酸铵分级沉淀得到酶的比活为86．5U／mg，再经DEAE离子交换层析比活可达525．0U／mg，酶活总收率为54．5％．并对酶促反应的最适条件进行了研究，其最适反应pH为7．6～7．8，最适反应底物浓度分别为NADH5mg／mL和丙酮酸钠25mmol／L。     

自制纤维素金属螯合亲和膜的部分吸附性能及纯化牛血SOD

×10-6 g/cm2,但蛋白解吸率前者低于后者,表明一定浓度的NaCl有助于亲和膜对蛋白质的吸附,同时也使被吸附的蛋白的解吸率有所降低.吸附-解吸方式(静态法)分离纯化SOD,解吸样品比活达8 770 U/mg,纯度为81%;吸附-洗脱方式(动态法)分离纯化SOD,穿柱流出样品比活达12 418 U/mg,纯度为85%.自制纤维素亲和膜有较好的吸附性能和纯化效果,重复使用性能良好,制备和纯化过程简便易行,具有广阔应用前景.     

PEG-磷酸盐双水相体系纯化Cu.Zn-SOD研究

利用聚乙二醇（PEG）与磷酸盐的合理配比组成的双水相体系能够使猪血超氧化物歧化酶（SOD）粗酶得到进一步纯化,研究结果表明,6％PEG-6000与24％磷酸盐（pH7,0）组成的双水相体系一次成相萃取,使猪血SOD粗酶的纯度提高3-5倍,活力回收70～95％,而且发现SOD在PEG／磷酸盐双水相体系中的分配行为有一定规律,使用双水相处理粗酶能有效、快速、大量使样品达到一定纯度．     

粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的分离纯化及酶学性质

采用DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Butyl-Sepharose CL 4B疏水层析,从重组大肠杆菌DH5a菌体中分离纯化得到粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA).经纯化,AfPGA纯度较粗酶提高50.6倍、比活达到212.7 U/mg,经HPLC测定纯度为92.8%,收率为78%.理化性质分析表明:AfPGA含有2个亚基(α亚基和β亚基,其Mw分别为2.90×104和5.92×104;AfP-GA等电点约为7.9～8.0,最适pH约为10.0,并在pH>7.0时表现出了稳定的催化活力.     

猪凝血酶的制备和部分性质的研究

以猪血为材料离心制取血浆.采用-20℃冻存血浆,离心,等电点沉淀,(NH4)2SO4盐析得凝血酶原.经Ca2+激活,DEAE-52阴离子交换柱层析纯化,可获得比活性958.9IU/mg的电泳纯凝血酶,收率为56.3%.研究发现,室温(25℃)下放置20小时以上,凝血酶酶活力下降82%;pH大于或小于7.2,酶活力下降明显.     

rPA(K)原核表达产物的复性与纯化

为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X - 100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2mol/L脲、1mL/L Triton X - 100、200mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0% 提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S·TagTM rEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS - PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段.     

三相分离甾短杆菌胆固醇氧化酶及其性质

三相分离(TPP)是将硫酸铵与叔丁醇混合后形成有机相、中间沉淀相和水相。在20°C,调节发酵上清液的pH至6.0,加入硫酸铵使终浓度为400 g/L,溶解后加入与上清液等体积的叔丁醇,静置1 h分相,胆固醇氧化酶在有机相和水相之间形成蛋白沉淀,12 000 r/min离心10 min收集中间蛋白相,用pH 7.5,10 mmol/L的磷酸缓冲液溶解。结果表明:利用三相分离技术从乳化体系中分离纯化胆固醇氧化酶,比酶活提高了3.49倍,收率达93%。回收的酶液进一步经过DEAE-Sepharose Fast Flow纯化,比酶活从3.56 U/mg提高到30.15 U/mg。该酶最适反应温度为60°C,最适反应pH为7.5,酶的等电点为8.5,该酶在37°C,pH 6.0~8.0较为稳定。Hg2 和Ag 离子完全抑制胆固醇氧化酶的活性。     

辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清IgM

使用辛酸沉淀-凝胶过滤法提取猪血清中免疫球蛋白IgM,并通过其纯度鉴定等探讨提纯效果.通过辛酸沉淀法粗提免疫球蛋白,再结合Sephadex G200凝胶过滤法纯化获得IgM,利用SDS-PAGE电泳法和AlphaEaseFC凝胶成像分析软件测定其分子量和纯度、Bradford法测定提取蛋白浓度并计算其得率.结果显示辛酸粗提能够去除大部分杂蛋白,凝胶过滤获得两个洗脱峰,其中第一峰通过电泳鉴定含有IgM,纯度63.8%,得率1.28 mg/ml血清.利用辛酸沉淀-凝胶过滤法能够获取纯度和得率都较高的IgM,纯度可满足普通要求的实验和应用.