复合诱变选育高产γ-氨基丁酸菌株

以红曲霉为出发菌株,采用紫外线和5-氟尿嘧啶对其原生质体复合诱变处理,得到一株高产γ-氨基丁酸的菌株ZL307.试验结果表明,经紫外线照射处理150s,以0.3mg/mL的5-氟尿嘧啶处理15min后,γ-氨基丁酸的产量可高达491.1mg/L.与出发菌株相比,产量提高了60%,且高产遗传特性经10次传代仍稳定.     

紫外诱变原生质体选育高产L-乳酸菌株的研究

以干酪乳杆菌ZZ-L为出发菌株,对其原生质体制备条件进行了优化.结果表明,用为0.4 mg/mL的溶菌酶溶液和0.7 mol/L NaCl溶液作为渗稳剂对菌龄为22 h的干酪乳杆菌ZZ-L酶解时间110 min,原生质体的形成率为89.5%,再生率为47.7%,达到最佳水平.并对原生质体进行了紫外诱变育种.通过平板和静置发酵实验,筛选得到8株突变株产量比出发菌株高的突变株,其中菌株ZZ-06的L-乳酸产量达78.6 g/L,比出发菌种提高了20.7%,突变株ZZ06经12次传代,其遗传性状稳定.     

复合诱变原生质体选育高抑菌活性纳豆菌

采用紫外化学复合诱变法对纳豆菌原生质体进行诱变,以期获得高抑菌活性的优良菌株.结果表明,在溶菌酶质量浓度为0.3mg/mL、酶解时间为40min、酶解温度为35℃、酶解pH为7.0下原生质体的形成率和再生率达到最高.通过紫外化学复合诱变,得到一株高抑菌活性菌株.与原菌株比较,其对金黄色葡萄球菌的抗菌作用提高了19.7%,对大肠杆菌的抗菌作用提高了19.5%.连续传代培养10代,抗菌活性稳定.     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯(DES)对由高山被孢霉出发菌株M3-18制备的原生质体进行诱变育种.实验结果表明,采用体积分数为10%的DES诱变3min,可获得高产突变株M20,其花生四烯酸产量比对照株M3-18提高了4.4倍,而且突变株的继代遗传稳定.说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法.     

利用基因组重排技术选育高产洛伐他汀红曲菌株

采用基因组重排法选育高产洛伐他汀红曲菌株.原生质体制备条件:溶壁酶1.0%(质量分数),菌丝菌龄66 h,酶解时间3 h,酶解温度30℃,高渗磷酸盐缓冲液pH值为6.0,再生培养基的渗透压稳定剂为0.6 mol·L~(-1)NaCl;原生质体灭活条件:紫外灭活120 s,微波灭活300 s;原生质体融合条件:PEG 30%(质量分数),Ca~(2+)0.03 mol·L~(-1),30℃融合12 min,原生质体融合率1.95%.以经紫外和微波诱变得到的正突变菌株为亲本进行三轮基因组重排,获得一株遗传稳定、高产洛伐他汀菌株R″-30,洛伐他汀产量较原始菌株SH2-7提高52%。     

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌的原生质体诱变育种

通过对菌株产量分布参数的统计学分析，棘抱小单孢菌７４＃被选作原生质体诱变育种的出发菌株．获得小诺霉素含量为８０％的高产突变株的概率以紫外线对原生质体悬液３０秒诱变处理为最高（２２．８％），５株高产突变株的小诺霉素组份与效价平均分别比出发菌株提高３３．３％与５１．２％．初步探讨了甘氨酸对原生质体化的作用机理以及原生质体诱变与再生处理提高小诺霉素产生菌生产能力的机理．     

北冬虫夏草原生质体的制备及诱变育种

通过对北冬虫夏草(Cordyceps militaris Link)菌种液体发酵培养,离心分离获得菌丝体菌液,分别从渗透压稳定剂、裂解酶、裂解时间及菌龄4个方面优化原生质体制备的条件.结果表明:原生质体制备的最优渗透压稳定剂为0.6 mol/L MgSO_4,最优酶解液为1%纤维素酶,最佳菌龄为5 d,最优裂解时间为2 h.L_(20)(5~4)的正交试验表明,优化条件下制备原生质体为1.46×10~7个/m L.紫外诱变实验结果表明:北冬虫夏草半致死率时的照射剂量约为40 s,诱变距离与致死率成反比,在诱变总时间相同的情况下,诱变受诱变次数影响较小,分次处理和一次处理效果基本相同.以多糖含量为指标,筛选诱变菌株,诱变株多糖含量高于普通菌株,其中17~#菌株多糖含量达6.01%,筛选菌株的稳定性实验表明:继代培养3次,筛选的菌株产多糖能力下降较少,表明筛选菌株具有较好的稳定性.     

高产2-苯乙醇酿酒酵母的选育

从8株酿酒酵母中初筛到一株2-苯乙醇产量达1.48g.L-1的菌株FD0419.以此为出发菌株,分别进行硫酸二乙酯化学诱变和原生质体紫外诱变,获得3株耐受性提高但2-苯乙醇产量下降的菌株,再与出发菌株进行原生质体融合.最终,筛得菌株R-UV3,其2-苯乙醇产量达2.51g.L-1,比出发菌株提高69.6%.     

复合诱变选育高富硒嗜热链球菌

采用紫外-氯化锂诱变法对嗜热链球菌进行复合诱变,最终筛选得到一株高富硒率的嗜热链球菌突变株ZZ-CW4.实验结果表明,在紫外诱变时间为15s,氯化锂添加量为1.0mg/mL时,复合诱变条件最佳,嗜热链球菌的富硒率达到83.43%.与出发菌株相比,富硒率提高了47.94%.突变菌株ZZ-CW4经10次传代培养,其遗传性状保持稳定.     

利用紫外线诱变原生质体选育糖化酶高产菌株的研究

利用紫外线诱变原生质体选育糖化酶高产菌株的研究苟兴华（生物工程系）在原生质体形成及再生的最佳条件下制备Ａ．ｎｉｇｅｒＵＶ—ＧＧ原生质体，然后对原生质体进行紫外线诱变处理。经再生培养原生质体和发酵筛选再生菌株，获得了高产稳定株Ｐ＿（４７）—３。其糖化酶...     

灰树花紫外诱变育种研究

应用原生质体紫外诱变技术,对灰树花菌株Gr1进行了紫外诱变处理.经过粗筛和精筛后,从50株诱变株中选出两株多糖含量和产量明显优于原始菌株的突变株Gr1a和Gr1g,其产量分别为1.74%和1.62%,多糖质量含量(w)分别为11.67%和12.01%.经过摇瓶试验以及发酵试验,两株诱变菌株Gr1a和Gr1g菌丝得率和多糖含量都很稳定,表明所得突变株是比原始菌株更优秀的稳定高产、高多糖含量的新菌株.     

纳豆芽孢杆菌原生质体制备条件的研究

以纳豆芽孢杆菌ZJ-zx为出发菌株,利用溶菌酶进行原生质体制备,并对其制备条件进行了优化.结果表明:在溶菌酶质量浓度为0.6mg/mL、酶解时间为40min、酶解温度为35℃、渗透压稳定剂为0.7mol/L的条件下,制备原生质体的形成率为95.46%,再生率为15.83%,为下一步的诱变育种工作奠定了基础.     

花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）对由高山被孢霉出发菌株Ｍ３－１８制备的原生质体进行诱变育种,实验结果表明,采用体积分数为１０％的ＤＥＳ诱变３ｍｉｎ,可获得高产突变株Ｍ２０,其花生四烯酸产量比对照株Ｍ３－１８提高了４．４倍,而且突变株的继代遗传稳定。说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法。     

链霉素抗性突变理性筛选链霉素高产菌株

以灰色链霉菌(Streptomyces griseus) CICC11002为出发菌株,采用紫外诱变并结合链霉素抗性筛选法育种,以期获得高产菌株.灰色链霉菌孢子悬液经90％紫外致死剂量诱变后,在含有链霉素最小抑制浓度(0.8μg/mL)的培养基平板上,分离得到105株链霉素抗性突变菌.其中链霉素产量高于出发菌株的有19株,正突变率高达18.1％,同时获得了产链霉素能力约为出发菌株2倍的突变株SM-55.     

紫外诱变原生质体提高脂肪酶活力

以粗壮假丝酵母CJ-1为出发菌株,对其进行原生质体紫外诱变选育.筛选得到10株脂肪酶活力比出发菌株高的突变株,其中菌株CJ-1-09的酶活达35.78 U/mL,比CJ-1提高了4.58倍.突变株CJ-1-09经10次传代,其脂肪酶活性保持稳定.     

辅酶Q_(10)生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生研究

研究对辅酶Q10生产菌株粟酒裂殖酵母原生质体制备和再生条件进行了优化,确定了原生质体制备及再生的最佳条件为:茵龄20 h,蜗牛酶浓度2 g/L,酶溶液pH值6.5,酶解温度25℃,酶解时间2 h.通过对粟酒裂殖酵母原生质体制备及再生条件的研究,建立了制备粟酒裂殖酵母原生质体的方法,以期进一步通过原生质体诱变获得辅酶Q10高产菌株.     

高产胞外植酸酶酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到 5株胞外植酸酶活性较高的野生型酵母菌 ,其中 1 1酵母的酶活性最高 ,胞外植酸酶活为 16 .6 8U /mL .1 1菌株经单倍体分离 ,得到单倍体Sp1 1,胞外植酸梅活为 11.2 0U/mL .以Sp1 1为出发菌株 ,经过原生质体紫外诱变和EMS诱变 ,选育得到一稳定突变体Msp 382 6 ,胞外植酸酶活性为 2 6 .6 5U /mL ,较出发菌株提高了 138%.     

液体发酵高产纳豆激酶菌株的复合诱变选育

从市售豆豉和保藏的固体发酵产纳豆激酶(NK)高活性的菌株中,筛选出5株诱变育种出发菌株.经紫外-亚硝基胍-Co60复合诱变后,获得5株液体发酵产NK高活性的菌株LJJ-1-13-12-4、PXDBJ-13-9-7-18、DNS-17-3-15-7、CBL-2-7-10-6和L-5-8-15,其产NK活性,分别为1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23 U/mL,分别是诱变前出发菌株的1.62、1.81、1.98、1.61和1.62倍.高产纳豆激酶菌株的选育为纳豆激酶液体发酵的进一步工业化奠定了良好的基础.     

发酵法生产京尼平菌株的筛选与培养

从土壤中筛选到一株产β-葡萄糖苷酶的菌株FYS-9,其发酵可将京尼平苷转化为京尼平。通过菌落形态特征、孢子和菌丝显微观察及18S rDNA基因序列分析,初步鉴定该菌株为泡盛曲霉（Aspergillus awamori）。以FYS-9为出发菌株,通过紫外线、原生质体诱变,选育得到一株高产β-葡萄糖苷酶的突变株70C-3,该突变株发酵产酶平均酶活力达到36.15IU/mL,比FYS-9提高39.4%。对突变株70C-3发酵转化京尼平苷条件的优化结果表明,在京尼平苷添加量1.5%,30℃、150r/min转化24h的条件下,京尼平苷的转化率达到97.7%,京尼平的产量可达8.5g/L。