地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酶的条件。应用均匀设计法优化发酵培养基组成,结果为（ｇ／Ｌ）：乳糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ｐＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍ ｉｎ 和１０％ 接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酶酶活力达１３．２Ｕ／ｍ Ｌ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

环状芽孢杆菌β-半乳糖苷酶水解乳糖和ONPG的底物特异性

在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现，OHA与LHA的比值范围 1．3－32．2之间，表明OHA与LHA差异很大，无相关性。对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现，Na^ 和K^ 能不同程度地促进OHA和LHA；Mg^2 能增强OHA，对LHA却表现出抑制作用。酶作用于ONPG和乳糖的最适pH和温度也存在差异。一定反应体系中，OHA／LHA的值随反应条件的变化而不同，因此用OHA来评价LHA会对酶的实际应用带来很大影响。     

高产芽孢杆菌MS12木聚糖酶发酵条件优化及酶学性质研究

从昆明某磷矿土壤中筛选出一株产木聚糖酶能力较强的菌株——MS12,通过单因素试验初步优化了该菌株的产酶条件.试验结果显示,该菌株最佳产酶培养基为玉米芯粉50 g/L、麸皮40 g/L、NH_4Cl 10 g/L、CaCl_2 5 g/L、NaHPO_42 g/L,pH自然;最佳产酶发酵条件为30℃,180 r/min,装样量30 mL/250 mL三角瓶,震荡培养96 h.经测定,菌株MS12所产木聚糖酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH值为7.0,具有较好的pH稳定性. 1 mmol/L Na~+、Ba~(2+)和10 mmol/L Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶活有促进作用,Ag~+对酶活有明显的抑制作用.     

嗜热芽孢杆菌β—半乳糖苷酸发酵条件研究

以嗜热芽孢杆菌为菌种,研究发酵生产β－半乳糖苷酸的条件,应用均匀设计优化发酵培养基组成,结果为：服糖０．５、蛋白胨２．０、牛肉浸膏２．０、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０１。在温度５５℃、初始ＰＨ７．０、摇床转速２００ｒ／ｍｉｎ和１０％接种量条件下,发酵２４ｈ,β－半乳糖苷酸酶活力达１３．２Ｕ／ｍＬ。在乳糖水解反应中,证实该酶能催化转半乳糖苷反应,合成半乳糖低聚糖。     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．     

椰果内生枯草芽孢杆菌YZ-21产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

[目的]分离纯化来源于内生枯草芽孢杆菌YZ-21的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质.[方法]采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系进行分离与纯化,在此基础研究它的酶学性质.[结果]比较3种纯化方法,最优方法为双水相萃取法,在双水相体系为16%(NH_4)_2SO_4、18%PEG2000、2%NaCl条件下,纯化倍数最高可以达到3.06,酶回收率达到99.26%;酶学性质研究表明,β-甘露聚糖酶的最适反应pH为7.0,最适的反应温度是40℃,pH稳定性在3.0～7.0,热稳定范围在35～55℃之间;Ca~(2+),Ba~(2+),Mg~(2+),K~+,Co~(2+)对酶都有激活作用,而Ca~(2+)激活作用最强,Cu~(2+),Na~+,Zn~(2+),Mn~(2+),EDTA对酶有抑制作用.[结论]利用双水相萃取法较好纯化了β-甘露聚糖酶,酶学性质良好,可以广泛应用于饲料添加剂、纸浆漂白和食品加工等领域.     

产纤维素酶芽孢杆菌DS1309的分离鉴定及产酶条件研究

通过唯一碳源法从来源于长白山森林的土壤中筛选到多株具有纤维素降解活力的细菌,选取其中的1株芽孢杆菌DS1309进行了鉴定及发酵条件的初步优化,结果显示该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。发酵产酶的最适条件为培养温度30℃,培养基初始p H6.0,最适碳源为葡萄糖,最适碳源为酵母粉。菌株在最适条件下培养48h达到产酶高峰,酶活力可达到1.82 IU/m L。     

产胶原酶地衣芽孢杆菌菌种的分离、筛选及发酵条件研究

从成都皮革厂等处采集的样品中,分离筛选到一株胶原酶的产生菌Ｊ－４－８,菌种鉴定为地芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）。该菌产酶的最适碳源为蔗糖,氮源为明胶,超始ｐＨ为７．５,容瓶装量为１０ｍＬ,种龄是２４ｈ,接种量为６％,在此条件下,摇瓶振荡发酵后,酶活达２５Ｕ／ｍＬ发酵液,较原发酵培养基发酵后的酶活提高３５％。     

地衣芽孢杆菌HX-12-5的鉴定及中性蛋白酶性质的研究

对一株能产生具有良好脱毛效果的中性蛋白酶的高产菌芽孢杆菌Bacillus sp。HX－12－5进行了菌种鉴定，结果表明，该菌株属地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)。中性蛋白酶的最适作用条件为：50℃，pH7.0,40℃时在pH6-9范围内稳定；EDTA和PMSF对酶活力有不同程度的抑制作用。     

产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌N16抗噬菌体菌株筛选及噬菌…

报道了噬菌体ＰＧ３对产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌Ｎ１６反复感染多次进行自然筛选，获得８株对噬菌体ＰＧ３具有稳定抗性的菌株，其产酶水平有的比出发菌株Ｎ１６高１０％左右。同时对噬菌体ＰＧ３的生物学特性进行了某些研究。     

地衣芽孢相菌高α—乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株，通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好，通过UV和NTG对BL-4进行复合诱变，获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α- 乙酰乳酸脱羧酶高产菌株，并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃，发酵时间36h，发酵液起始pH6.5。     

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD-142．该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌．在50℃条件下，以10％的接种量接种于发酵培养基中振荡培养48h后，发酵液中碱性蛋白酶活可达516U／mL．发酵培养基的组成成分为麦芽糖6％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4 0．4％、MgSO4 0．02％、CaCl2 0．02％，pH自然．对该酶的性质研究表明，其最适作用pH为9．5，最适反应温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性，并且显示了与去污剂良好的相容性．     

一株产耐热碱性脂肪酶芽孢杆菌的筛选及其所产酶性质的研究

从武汉市白沙洲沙鸥食用油总厂分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶的产生菌,经鉴定为产邪包的短杆菌、革兰氏阳性、该菌株的最适生长温度为４５℃,所产酶的最适作用温度为６０℃,最适ＰＨ为１０．０,且ＰＨ在８．０－１１．０范围内酶蛋白性质稳定。     

一株地衣芽孢杆菌脲酶生产的发酵优化和酶学性质

对中国南海海绵Halichondria regosa中分离得到脲酶产生菌Bacillus licheniformis B81进行脲酶生产的发酵条件优化;并对其脲酶特性进行测试。通过对基础培养基筛选后,对选定基础培养基进行了Plachett-Bunman重要因素筛选,最终选定的重要因素通过单因素实验得到了最终的培养基配方为:葡萄糖25 g/L,蛋白胨12.5 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母粉6.5 g/L,KH2PO42 g/L,NaCl 1 g/L,尿素0.625%(W/V),Ni(NO3)20.006 25%(W/V),H2O 1 L。优化后,使得脲酶的产量提高到了原培养基的170%。菌株所产生的脲酶的最适反应pH为7.0,最适温度为40℃,Pb2+、Cu2+对脲酶活性具有抑制作用。     

地衣芽孢杆菌JF—20菌原生质体的形成及其再生的最佳条件

以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis)JF-20菌为出发菌株,对原生质体制备及再生的各种影响因素进行了研究,在原生质体形成及再生的最佳条件下制备原生质体。结果发现：JF-20菌的原生质体形成率及再生率分别达到以86.9%和38.4%,并通过光学显微镜技术,观察了原生质体形成及再生的有关现象。     

巴伦葛兹类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的表达、酶学性质及结构解析

从克隆巴伦葛兹类芽孢杆菌CAU904中克隆得到一个β-葡萄糖苷酶基因,并在大肠杆菌中进行了异源表达,研究了重组酶的酶学性质,进一步解析了该酶的晶体结构。研究结果表明,该酶的最适温度和pH值分别为50℃和7.5。该酶底物特异性较广,能够水解β-1,2、β-1,3、β-1,4、β-1,6-糖苷键等在内的多种糖苷键,对昆布多糖、大麦β-葡聚糖和地衣多糖等聚糖均有水解作用。晶体结构信息表明,该酶呈现糖苷水解酶(GH)3家族典型的多结构域结构,其催化口袋由类似(α/β)₅的三明治结构域和(β/α)₈折叠桶结构域中间的loop构成,其中芳香氨基酸残基Trp748侧链提供-1位结合位点,Trp749侧链提供+1位结合位点,Trp131侧链提供+2位结合位点,这些芳香氨基酸残基形成了一个小的口袋和疏水性环境,不利于转糖苷反应。     

蜡状芽孢杆菌Bc-05菌株纤溶酶的酶学性质

对蜡状芽孢杆菌Bc-05茵株的发酵上清液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析所获得的纤溶酶进行性质研究.结果表明:经纤维蛋白平板法检测该酶有直接水解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用,最适作用温度37℃,最适pH=8.0,在pH=8.0条件下25℃和37℃放置24 h酶活力仍保持77.52%和78.96%,该酶体外对兔血凝块有明显的溶解作用;Ca2+,Mn2+离子对该酶具有激活作用,而Cu2+,Fe3+完全抑制其纤溶活性,PMSF,EDTA和DTT对该酶有抑制作用,说明活性中心含有二硫键、金属离子和丝氨酸;测其N端10个氨基酸序列为NH2-Val-Thr-Pro-Thr-Asn-Ala-Val-Asn-Thr-Gly,与其他生物来源的纤溶酶相比较没有同源性.     

产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌分离鉴定及酶学性质研究

对一株产纤维素酶菌株进行分离鉴定,并对其酶学特性进行了初步研究.刚果红染色法筛选产纤维素酶菌株B16,采用形态观察、生理生化指标和16S rDNA确定其菌属来源,分析纤维素酶的最适反应pH值和温度、酸碱和热稳定性、金属离子对酶活性的影响,最后考察纤维素酶系的分布.结果表明:筛选菌株为解淀粉芽孢杆菌,其较适反应温度为30℃,较适pH 8.0,在10~60℃呈高稳定性,在pH 5~8时稳定性较强,Mn2+和Ba2+是该酶的激活因子.除微晶纤维素酶活力(16.39 U/mL)稍弱外,滤纸酶(70.37 U/mL)、β-葡萄糖苷酶(131.55 U/mL)、羧甲基纤维素酶(307.23 U/mL)活力均相对较高.结果表明,该酶在饲料添加剂方面具有应用潜力.     

地衣芽孢杆菌高α-乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株,通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好,通过UV和NTG对BL4进行复合诱变,获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α-乙酰乳酸脱羧酶高产菌株,并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃、发酵时间36 h、发酵液起始pH 6.5。