乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

Inactivation and Conformational Changes of Lactate Dehydrogenase M4 during Unfolding in Urea Solutions

ＩｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌＣｈａｎｇｅｓｏｆＬａｃｔａｔｅＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＭ４ｄｕｒｉｎｇＵｎｆｏｌｄｉｎｇｉｎＵｒｅａＳｏｌｕｔｉｏｎｓＧｕｏＹｕｙｕａｎ（郭宇远），ＺｈｏｕＨａｉｍｅｎｇ（周海梦）＊Ｄｅｐ...     

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．     

变性剂作用下文昌鱼碱性磷酸酶构象与催化活力变化

研究了文昌鱼碱性磷酸酶(AKP)的变性作用,结果表明:低浓度盐酸胍(0.5 mol/l,1.0 mol/l)对该酶具有明显激活作用;酶的荧光构象变化指标随脲浓度增大呈现两个陡变区(1.0～2.0 mol/l,4.0～8.0 mol/l),蜂位因变性剂存在而明显红移,表明肽链己发生较明显的伸展,该酶的失活与变性过程均为一级反应,低浓度脲(2.0 mol/l)作用表现为构象变化略快于失活,而高浓度盐酸胍(2.0 mol/l,4.0 mol/l)及高浓度脲(4.0 mol/l,6.0 mol/l,8.0 mol/l)作用均表现为失活略快于构象变化。     

大熊猫肌酸激酶热变性中活性与构象变化的比较

比较了大熊猫肌酸激酶在各种不同温度下热变性时，活性变化与构象变化的速度常数。结果表明在较低温度下，酶的失活速度与构象变化速度相当．而在较高温度下变性时酶的失活速度快于构象变化速度。这表明酶分子的活性部位的微区构象比整个分子的构象具有更大的易变性或柔性。     

天门冬氨酸对精氨酸激酶的作用研究

应用酶活测定、荧光发射光谱等方法分析了精氨酸激酶在不同浓度天门冬氨酸中活性变化和去折叠动力学。实验结果表明：天门冬氨酸引起精氨酸激酶失活与去折叠,并且过程中没有蛋白质的聚沉;精氨酸激酶的去折叠遵循一级反应动力学的二相过程,包括快相和慢相;失活与天门冬氨酸浓度呈正相关;当去除天门冬氨酸的影响,精氨酸激酶的活力能得到恢复。通过对比实验结果暗示,天门冬氨酸是通过其解离状态的H＋改变了机体pH值而影响精氨酸激酶活性的,并且就天门冬氨酸对精氨酸激酶影响及其意义进行探讨。     

Comparison of Inactivation and Unfolding of Calf Intestinal Alkaline Phosphatase in Guanidinium Chloride Solution

IntroductionCalf intestinal alkaline phosphatase(CIP,EC3 .1 .3 .1 ) is a metalloenzyme which catalyzes thenonspecific hydrolysis of phosphate monoesters[1 ] .The X-ray crystal structure of bacterial alkalinephosphatase has been reported to0 .2 nm resolutionin the presence of inorganic phosphate[2 ] . Theactive site is a pocket containing a tight cluster oftwo zinc ions (0 .3 9nm separation) and onemagnesium ion (0 . 5 and 0 .7nm from two zincions) .CIP also contains zinc and magnesium ions…     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

金属离子和脲对背角无齿蚌碱性磷酸酶的影响

研究了多种金属离子对背角无齿蚌碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性的影响，结果表明：Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋和Ｌｉ＾＋等一价金属离子没有影响：Ｍｇ＾２＋，Ｃａ＾２＋，Ｂａ＾２＋，Ｎｉ＾２＋，Ｍｎ＾２＋和Ｃｏ＾２＋有激活作用；而Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２＋，Ｈｇ＾２＋，Ｃｄ＾２＋及Ａｇ＾＋有抑制作用，脲对ＡＫＰ的变性失活作用，按脲浓度可为低于２ｍｏｌ／Ｌ和高于２ｍｏｌ／Ｌ两种类型，低浓度脲对背角无齿蚌ＡＫＰ活性抑制的动力学表     

Expression, purification and characterization of a phyAm-phyCs fusion phytase

The phyA^m gene encoding acid phytase and optimized neutral phytase phyCs gene were inserted into expression vector pPIC9K in correct orientation and transformed into Pichiapastoris in order to expand the pH profile ofphytase and decrease the cost of production. The fusion phytase phyA^m-phyCs gene was successfully overexpressed in P. pastoris as an active and extracellular phytase. The yield of total extracellular fusion phytase activity is （25.4±0.53） U/ml at the flask scale and （159.1±2.92） U/ml for high cell-density fermentation, respectively. Purified fusion phytase exhibits an optimal temperature at 55 ℃ and an optimal pH at 5.5-6.0 and its relative activity remains at a relatively high level of above 70% in the range ofpH 2.0 to 7.0. About 51% to 63% of its original activity remains after incubation at 75 ℃ to 95 ℃ for 10 min. Due to heavy glycosylation, the expressed fusion phytase shows a broad and diffuse band in SDS-PAGE （sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）. After deglycosylation by endoglycosidase H （EndoHf）, the enzyme has an apparent molecular size of 95 kDa. The characterization of the fusion phytase was compared with those ofphyCs andphyA^m.     

文昌鱼碱性磷酸酶赖氨酸基团的研究

关于文昌鱼碱性磷酸酶(AKP)的基本性质及功能基团等,本实验室作了系统的研究,判定1个色氨酸残基为酶活性中心所必需,赖氨酸残基(Lys)是AKP活性必需基团之一,而每分子AKP上含有36个Lys。在此基础上,采用化学修饰剂对Lys基团进行定量研究,并探讨其它功能基团的性质,为酶的结构与功能关系提供进一步的信息。     

Inactivation of Lactate Dehydrogenase from Pig Heart by o—Phthalaldehyde

IntroductionLactate dehydrogenase( EC1 .1 .1 .2 7,LDH) playsa vital role in the energy flow of higher organisms.It is a tetrameric enzyme that catalyzes thereversible dehydrogenation of lactate,converting itto pyruvate.The enzyme exists in five isozymicforms which are not usually found all together inone tissue or organ.At least three different typesof LDH subunits( M,H and X) are known invertebrates,butthe X subunits are usually presentin only one or at mosta few tissues[1,2 ] .　Variou…     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究

通过酶学性质比较毕赤酵母GS115表达的E.coli K12植酸酶(appA)及其突变体植酸酶(appA NR)和黑曲霉植酸酶(phyA)的最适pH、温度、热稳定性及对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性.结果表明,在95℃,加热10 min,appA NR可残余90％左右的活力,而其他两种只残余20％～50％的活力;appAN...     

不同比生长速率对毕赤酵母发酵生产植酸酶的影响

不同比生长速率控制条件下毕赤酵母代谢流流向不同,从而导致产酶量的不同。为了得到毕赤酵母发酵生产植酸酶的最适比生长速率,对毕赤酵母工程菌50 L发酵生产植酸酶的工艺条件进行了研究。结果表明,通过调节甲醇的流加速度,控制菌体比生长速率为0.02 h^-1,发酵结束时,植酸酶酶活17 445 U/mL,比对照提高69.7 %,该比生长速率对发酵生产植酸酶最有利。     

脲引起反相胶束酵母醇脱氢酶的紫外与荧光变化

比较了ＡＯＴ－异辛烷及水相两种体系中脲引起的酵母醇脱氢酶（ＹＡＤＨ）紫外和荧光变化。在水相反应系统中随着脲浓度增加（至３．０ｍｏｌ／Ｌ），酶活性迅速下降并全部失活，构象发生重大改变，２２０ｎｍ处的紫外吸收增加，荧光强度减小，３３６ｎｍ处的荧光峰红移１２ｎｍ至３４８ｎｍ，在Ｒ＝１５的反相胶束体系中，酶浓度相同时ＹＡＤＨ活力相当于水相ＹＡＤＨ的６３％左右，但脲浓度增至３．０ｍｏｌ／Ｌ时ＹＡＤＨ的活力基本无变化，２４０ｎｍ和２７０ｎｍ处的紫外吸收峰、３５７ｎｍ处的荧光发射峰均随着脲浓度的增加有所升高。上述结果表明脲对两种体系中ＹＡＤＨ的分子构象和活力的影响是不同的     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变化的研究

十二烷基硫酸锂(LDS),脲(Urea)等变性剂作用于ACPase,以荧光法跟踪该酶的构象变化,随着LDS浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移,而在Urea中,荧光强度随着变性剂浓度上升而下降,发射峰明星红移,由330～350nm,分别测定其变性及失活的动力学常数,比较酶构象及催化活力的关系,结果表明:变性与失活为快相和慢相的一级反应,在LDS作用下,失活速度大于变性速度,属于快活力慢构象变化的模式,Urea的作用为变性速度大于失活速度,属于快构象慢活力变化的另一种模式,Urea作用后的变性酶,在测定其活力的10min内,没有观察到底物对变性酶的修复作用,以及稀释对变性酶的复活效应。     

产植酸酶菌株的筛选、诱变及酶学性质初探

从富含有机质的环境中采集土样,通过植酸钙平板透明圈法初筛和维生素C-硫酸-钼酸铵-酒石酸锑钾法测定植酸酶酶活复筛,共筛选到5株产植酸酶的霉菌,对这5株菌株进行紫外线和亚硝基胍复合诱变处理,最终获得一株高产植酸酶突变株NTG-506,酶活达到112 U/mL,比原始出发菌株的酶活提高了3.2倍.突变株NTG-506在250mL三角瓶中发酵培养,在装液量60 mL,接种量2%时,培养4 d后酶活达到最高,为124.5 U/mL.植酸酶的最适反应温度35℃,经50℃处理10 min后剩余酶活为原来的57%.     

Contributions of a Position Amino Acid Residues to the Conformational Stability of GCN4 Leucine Zipper

Introduction Coiled coils[1] are widespread structures found in many natural proteins, such as structural proteins, transcrip- tion factors, receptor proteins, and enzymes[2,3]. Coils are the dominant structure in many fibrous proteins and the oligomeriza…     

外源植酸酶对杂交水稻种子萌发的影响

以杂交水稻两优288为材料,用外源植酸酶处理种子,测定萌发后种子中α-淀粉酶活性、可溶性糖含量、植酸酶活性.结果表明,种子由休眠转入萌发状态的过程中,经过植酸酶处理后的种子较对照组,α-淀粉酶活性增强,可溶性糖含量剧增,新陈代谢活跃,但随着萌发时间的延续,α-淀粉酶活性减弱,可溶性糖含量有所降低,而外源植酸酶处理过的种子α-淀粉酶活性、可溶性糖含量以及内源植酸酶活性高峰期较对照的早,且持续时间长.说明植酸酶在杂交水稻种子萌发过程中起着重要作用.