产环氧化物水解酶菌种的筛选及发酵条件优化

以外消旋苯基环氧乙烷为唯一碳源,从土壤中筛选出编号为G7的菌株,能选择性水解外消旋苯基环氧乙烷而得到(S)-苯基环氧乙烷,对映体过量值(e.e)达到99.3%。经鉴定菌种G7属于枯草芽胞杆菌。对该菌株的发酵条件进行了优化,结果表明,当培养基成分为蔗糖10g/L,胰蛋白胨10g/L,Na₂HPO₄·12H₂O 2g/L,KH₂PO₄ 2g/L,MgSO₄ 0.2g/L,CaCl₂ 0.01g/L,pH 6.5,30℃培养25h,环氧化物水解酶活力达到最高值372.2U/mg。     

响应面法优化黑曲霉产葡萄糖氧化酶条件

运用响应面法对黑曲霉(Aspergillus niger)产葡萄糖氧化酶以及发酵条件进行了优化。根据单因素实验结果,利用Plackett-Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的3个因素：葡萄糖,玉米浆和碳酸钙。用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用Box-Behnken设计以及响应面分析法,确定其优化后发酵条件为(g/L)：葡萄糖172.11、玉米浆11.05、碳酸钙52.29、牛肉蛋白胨3.5、（NH₄）H₂PO₄ 0.5、KCl 0.15、MgSO₄·7H₂O 0.125、FeSO₄·7H₂O 0.125,220r/min,30℃培养48h。优化后的葡萄糖氧化酶酶活达786.3U/g,比在种子培养基中酶活350.5U/g提高了2倍左右。     

林可霉素菌种选育及摇瓶培养基的优化

以林可霉素生产菌L10-18林可链霉菌(Streptomyces linloinensis)为出发菌株,采用紫外线(UV)、甲基磺酸乙酯(EMS)进行双重复合诱变处理,以终点产物林可霉素的产率为选择压力进行菌株筛选,结果表明,诱变得到的林可霉素抗性突变株L13-6-3发酵水平比出发菌株提高14.1%.再经过培养基优化,其组成为葡萄糖12 g/L,豆饼粉3.0 g/L,(NH_4)_2S0_40.6 g/L,玉米浆0.2 g/L的条件下,诱变菌株发酵水平再提高5.2%.     

利用原生质体融合提高酿酒酵母赖氨酸含量的研究

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)为出发菌株，经N-甲基-N‘-亚硝基胍（NTG）和紫外线（UV）诱变，选育出抗S-（2-氨基乙基）-L-半胱氨酸（AEC）和抗氯化理（LiCl)的抗药性菌株作为融合新株的细胞质基因标记。用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体，两亲株的原生质体在35%PEG（MW6000），0.01mol/L CaCl2条件下被诱导融合，融合频率为10^-6 - 10^-7。试验表明，这些融合菌株具有杂种性质。其中一株产胞外赖氨酸的能力比亲株明显增强。     

铜抗性菌株的原生质体诱变选育及其吸附能力检测

将酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)菌株Y1单倍体化，筛选得到单倍体出发菌株SY1，通过紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)复合诱变，获得1株高抗性突变菌株，其Cu^2 抗性水平为8mmol／L，是出发菌株的8倍，其Cu^2 吸附量是出发菌株的4．6倍。50世代培养结果表明，其遗传稳定性在96％以上。     

吡咯喹啉醌生产菌的发酵条件优化

对一株产吡咯喹啉醌(PQQ)假单胞杆菌Pseudomonas 0813的发酵条件进行了优化,通过单因素试验确定碳源、氮源及无机盐成分,之后用正交试验法优化各成分配比,考察了发酵温度、初始pH值和转速对该菌产PQQ的影响。结果表明,最优的培养基配方为：酵母粉5g/mL、蛋白胨1g/mL、KH₂PO₄ 0.5g/mL;最适的发酵条件为：发酵温度30℃、初始pH 6.5、发酵转速150r/min。在此条件下,Pseudomonas0813菌株在250mL体系摇瓶发酵中的PQQ产量为448mg/L,在1.5L体系发酵罐扩大培养后的最高产量可达 695.mg/L,这是目前报道未经优化或基因改造菌株的较高产量。     

利用基因组重排技术选育高产洛伐他汀红曲菌株

采用基因组重排法选育高产洛伐他汀红曲菌株.原生质体制备条件:溶壁酶1.0%(质量分数),菌丝菌龄66 h,酶解时间3 h,酶解温度30℃,高渗磷酸盐缓冲液pH值为6.0,再生培养基的渗透压稳定剂为0.6 mol·L~(-1)NaCl;原生质体灭活条件:紫外灭活120 s,微波灭活300 s;原生质体融合条件:PEG 30%(质量分数),Ca~(2+)0.03 mol·L~(-1),30℃融合12 min,原生质体融合率1.95%.以经紫外和微波诱变得到的正突变菌株为亲本进行三轮基因组重排,获得一株遗传稳定、高产洛伐他汀菌株R″-30,洛伐他汀产量较原始菌株SH2-7提高52%。     

发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co60诱变选育

【目的】选育能够利用木糖高产乙醇的酵母菌株。【方法】采用Co60诱变树干毕赤酵母(Pichia stipitis),筛选乙醇产量高的突变菌株,并对原始菌株、突变菌株的生长发酵特性和两个菌株对高浓度木糖、乙醇的耐受性进行比较。【结果】在YPX培养基上筛选获得1株能够高效发酵木糖的突变菌株1K-9。该菌株在50mL 15%FM发酵84h,发酵液乙醇含量最高达(51.034±0.112)g/L,比原始菌株提高10.05%;在500mL 15%FM发酵96h,乙醇含量最高达(51.390±0.119)g/L;在500mL 20%FM发酵156h,乙醇含量最高达(52.496±0.513)g/L。菌株1K-9在HSM培养基或含4%~5%乙醇的YPX培养基中生长良好,在含6%~7%乙醇的YPX培养基中生长缓慢。【结论】Co60诱变对于树干毕赤酵母(Pichia stipitis)菌株是有效的,能选育出木糖高产乙醇酵母菌株1K-9。     

糖化酵母在酒精工业中应用的研究 (Ⅱ)——原生质体融合构建能分解淀粉的高温酒精酵母

利用ＰＥＧ诱导原生质体融合技术，进行糖化酵母单倍体２６００７（α，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｄｅ）和去除了ＩＮＨ１基因的耐高温酒精酵母单倍体菌株Ｚ６－１０（α，ＳＴＡ，ｉｎｈ，ａｒｇ）的同型原生质体融合实验，在再生基本培养基上挑选融合子，获得一株既具有较强糊精利用能力，又耐高温和个产酒精的融合株Ｆ４１。经与亲本酒精酵母二倍体菌株２１００２５玉米发酵性比较，使用Ｆ４１菌发酵可减少４０％的糖化酶用量。     

优良啤酒酵母菌株UN41的选育

以啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) W作为出发菌株,用亚硝酸和紫外线连续诱变,在含双乙酰150 μg/mL(亚硝酸诱变)或200 μg/mL(紫外线诱变)的麦芽汁琼脂平板上分离抗双乙酰的菌株,通过三角瓶发酵筛选得到一株优良的啤酒酵母菌株UN41.该菌株在500 mL三角瓶装300 mL 12°Bx麦芽汁的培养基中,12℃下发酵8 d,发酵液的发酵度为65.0%;双乙酰、高级醇和乙醛的含量分别为0.076 8 mg/L、92.15 mg/L和9.33 mg/L,比出发菌株W的降低了37.6%、19.9%和27.6%.     

食用菌原生质体融合研究

以具有黑色分生孢子与抗N_aN_3遗传标记的鲍鱼菇原生质体,经碘乙酰胺灭活后与佛罗里达侧耳、Cr02原生质体融合,已取得种间融合子。同时,以佛罗里达侧耳与香菇Cr02采用碘乙酰胺双灭法,取得属间融合子,并经酯酶同工酶酶谱分析证实。     

热和碘乙酰胺灭活Saccharomyces carlsbergensis原生质体的融合

本文选择了S. carlsbergensis Ⅰ和Ⅱ,分别用热和碘乙酰胺(CIA)双灭活原生质体,在聚乙二醇(PEGMW6000)诱导下进行融合,得到了双亲株融合子,并对形态观察、发酵性能、凝集性作了测定,以及对细胞可溶性蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带进行了分析,认为获得的融合子具双亲特性。     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

3种杜鹃属植物原生质体制备纯化条件的研究

以云锦杜鹃、西洋杜鹃、锦绣杜鹃的组培苗叶片为试验材料,研究了酶液组成、酶解时间、酶液pH值、材料生理状态对其原生质体分离效果的影响以及离心速度和离心时间对原生质体收集纯化的影响,实验结果表明:杜鹃组培苗叶原生质体分离最佳条件是酶液组成为2%纤维素酶+1%果胶酶,酶解总时间为14 h,酶液pH值为6.0;杜鹃原生质体收集纯化的离心适宜条件为1 000 r/min转速下离心6 min,能收集到大量有活力的原生质体,有活力的原生质体达79.27%.     

抗药标记酿酒酵母菌株间原生质体融合的研究

酵母属中的一些种是生产单细胞蛋白的主要菌株,通过遗传工程选育高赖氨酸酵母有重要的理论意义和价值,采用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体,在35%聚乙二醇(MW6000)的作用下,成功地获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的株间融合重组子,融合频率为10~(-8)-10~(-7),经过五代的移接验证,融合子稳定,融合子抗药性产生叠加效应,个体形态发生了变化,DNA含量加倍,赖氨酸含量有所提高.     

马铃薯叶肉细胞感染Phytophthorainfestans（Mont.）dby的变化

Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ游动孢子在０．４ｍｏｌ／Ｌ甘露醇溶液的Ｒｏｓｓ原生质体培养基中生长表明。在最初几小时生长的差别不大，只有经过２０ｈ之后，在培养基中游动孢了孢芽长度比对照（水中）较长。在液体培养基中共同培养原生质体和孢芽，没有发现游动孢子孢芽营养趋向。同时，Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ不同生理小种菌丝体潜育的原生质体的存活率，经过５－６ｈ有显著差别。贝拉（Ｂｅｅｌｌａ）（Ｒ１）品种原生质体在生理小种     

Screening and characterization of a high taxol producing fungus by protoplast mutagenesis

The preparation,regeneration and mutagenesis of the taxol-producing fungus UV40-19 protoplasts werediscussed in the experiment.Totally 42 strains displayed hygromycin resistance.Six strains were found tobe positive mutants when screened on plate containing 90/ig/mL hygromycin.One hereditarily stablestrain UN0.5-6 was obtained,which raised the taxol yield from(376.38 ± 8.41)μg/L to(493.12 ± 11.36)μg/L.The optimal conditions for the preparation,regeneration and mutagenesis of the taxol producingfungus UV4...     

酮羰基紫外吸收能量与分子拓扑指数关系研究

研究了14种酮 R1 R2-C=O的C=O紫外吸收能量△E与分子拓扑指数^0T、^1T的关系,发现。^0T、^1T与这些化合物的紫外吸收能量△E有良好的相关性，线性回归方程为：△E=7．47＋0．0847^0T-0．0787^1T，相关系数R=0．9823。     

一株黄河三角洲盐碱地耐盐菌的分离、鉴定及耐盐能力分析

从黄河三角洲盐碱地土壤分离到一株耐高盐菌株NM-1.对该菌株生理生化性质、耐盐性以及系统分类位置进行了分析.结果表明:菌株NM-1为长杆状,革兰氏阴性,菌落黄色,呈圆形,湿润、光滑.能利用葡萄糖、乳糖和蔗糖,不能利用淀粉和明胶.生长pH范围为8.0~10.0,最高耐盐浓度(NaCl)为30%,为中度嗜盐微生物,最适生长的Na2CO3浓度为0.25 M.16SrDNA序列分析表明:该菌株与Halomonas variabilis(JN645866)以及Halomonas variabilis(AY204638)序列的相似性均为98%,结合其形态、生理生化性质,认定该菌株属于耐盐单胞菌属,暂命名为Halomonas sp.NM-1(AB917466).