体外细胞株G_0期同步化模型建立及分析

通过对U251,QGY,Hela3个细胞株进行血清剥夺培养,建立起有较好的同步化效果的U251同步化模型.细胞同步化后,转入血清培养基培养,在24h内分10个时间点收集血清恢复培养不同时刻的细胞样品,应用流式细胞仪测定周期进行情况.结果显示,在0.25和8h,有2个重要的G1/S转变点,提示血清剥夺造成的G0期同步不是由G1/S检查点所控制,而是另有值得深入研究的控制点.     

细胞周期调控因子的研究进展

细胞周期调控是细胞周期在不同时相的调控点受到调节因子的调控，其中有二个调控点最重要，G1／S期，G2／M期，已有二类细胞周期调控因子被发现，分别是细胞周期蛋白依赖性激酶CDK（cell dependent kinase)和细胞周期蛋白（cyclin)，它们之间的相互作用调控细胞周期的进程。     

HIF-1α对宫颈癌细胞迁移能力的影响

将表达野生型HIF-1α(fl HIF-1α)和抑制性HIF-1α(dn HIF-1α)的重组质粒pcDNA3.1-fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染入SiHa细胞中表达,采用免疫细胞化学法和Western blot检测重组质粒转染SiHa细胞后其HIF-1α与CXCR4表达水平的变化;划痕试验测定细胞迁移情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果重组质粒pcDNA3.1fl HIF-1α和pcDNA3.1dn HIF-1α转染SiHa细胞后,pcDNA3.1-fl HIF-1α转染组(fl组)HIF-1α蛋白表达水平与其他三组比显著增高,差异具有统计学意义(P＜0.05),而pcDNA3.1dn HIF-1α转染组(dn组)与pcDNA3.1组和未转染组相比无统计学差异(P＞0.05).但fl组和dn组其CXCR4蛋白水平的表达与pcDNA3.1组和未转染组相比均有较明显的差异(P＜0.05).fl组迁移能力略高于对照组(P＞0.05),dn组迁移能力明显低于对照组(P＜0.05).HIF-1α能提高CXCR4蛋白的表达,从而加快SiHa细胞的迁移;而dn HIF-1α的作用正好相反.     

慢性心力衰竭患者心脏再同步化治疗后 炎症因子的改变

目的:探讨慢性心力衰竭患者心脏再同步化治疗(CRT)前后血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-27 (IL-27)水平的变化.方法:选取70例慢性心力衰竭患者,分为联合治疗组和单纯药物组各35例,其中单纯药物组行优化药物治疗,联合治疗组在此基础上行CRT治疗.比较两组治疗前以及治疗后3个月血清TNF-α、IL-1和IL-27水平及左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDd)及左室质量指数(LVMI)的变化.结果:两组治疗后TNF-α、IL-1和均明显下降,IL-27明显升高,且联合治疗组变化较单纯药物组更显著(P0.05),两组LVEDd、LVEF及LVMI均优于治疗前,且联合治疗组优于单纯药物组,有统计学差异(P0.05).结论:慢性心力衰竭患者CRT治疗后,炎症因子水平及心功能均得到改善.TNF-α、IL-1和IL-27水平指标可以作为评价CRT效果的指标之一.     

P15INK4b对人黑色素瘤细胞周期及G1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15INK4b缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15INK4bcDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15INK4b稳定表达细胞模型MLIK6.流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1%和76.8%,而G1期的比例分别为74.3%和76.4%.3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱.进一步探讨P15INK4b对G1/S相关调控基因的影响,发现G1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G1→S全部时间进程中.说明P15INK4b是通过对G1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G1/S进程.     

应用流式细胞术研究乳腺癌MCF-7细胞周期同步化

目的筛选出适宜的血清及秋水仙碱的作用浓度及时间,使乳腺癌MCF-7细胞分别达到G0/G1和G2/M期同步化。方法采用血清饥饿法诱导MCF-7细胞G0/G1同步化,秋水仙碱诱导细胞G2/M期同步化,流式细胞仪检测细胞各期分布情况。结果处理24 h后,1%血清浓度组G0/G1期细胞分别达到(72. 96±0.84)%,1. 0μg/mL秋水仙碱处理组G2/M期细胞分别占总细胞数(73. 67±1. 77)%。处理36 h后,1%血清浓度及秋水仙碱实验组细胞发生凋亡。结论MCF-7在血清浓度为1%处理24 h后完成G0/G1同步化,在1. 0μg/mL的秋水仙碱处理24 h后完成G2/M期同步化。     

局灶性脑梗死后缺氧诱导因子-1α基因的治疗作用及机制研究

目的:构建携带缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,探索HIF-1α在成年大鼠局灶性脑梗死中的治疗作用及可能机制.方法:应用腺病毒表达系统AdEasy System构建携带缺氧诱导因子-1α和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒(Ad-HIF-1α)并行PCR鉴定.建立大鼠线栓法大脑中动脉缺血再灌注模型.分为Ad-HIF-1α、腺病毒空载体(Ad)、生理盐水(NS)三组;将Ad-HIF-1α、Ad和NS分别注射到模型鼠梗死侧侧脑室.通过大体脑解剖和Nissl染色检测模型是否成功,原位杂交检测脑组织HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、SDF-1αmRNA的表达差异,三组大鼠神经功能缺失评分和2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色评价Ad-HIF-1α对脑缺血的治疗效果.结果:大体脑解剖标本和Nissl染色均证明大脑中动脉缺血再灌注模型成功建立.经氯化铯梯度离心法纯化后Ad-HIF-1α的滴度为8.2×108pfu/ml,PCR鉴定表明Ad-HIF-1α构建成功.三组大鼠脑梗死后HIF-1αmRNA、VEGFmRNA和SDF-1αmRNA的表达均有明显增加,且均于72h达最高峰.Ad-HIF-1α组HIF-1αmRNA、VEGFmRNA和SDF-1αmRNA在72h的表达与Ad和NS组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而Ad和NS组比较则差异无统计学意义(P＞0.05).Ad-HIF-1α治疗组72 hAd-HIF-1α治疗组神经功能缺失评分分别为1.6±0.7和0.9±0.6,与Ad组(分别为2.9±0.6和3.2±0.6)和NS组(分别为3.0±0.7和3.2±0.8)比较差异均有统计学意义(P＜0.05).72 h时脑组织TTC染色显示Ad-HIF-1α治疗组梗死体积为81.2 mm3±1.4mm3,与Ad组(173.9 mm3±1.3mm3)和NS组(171.7mm3±6.2mm3)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HIF-1α基因在成年大鼠局灶性脑梗死中具有积极的治疗作用,其作用机制不仅是通过上调抗缺氧基因或脑保护基因如VEGF的表达使缺氧的组织细胞保持氧稳定及耐受低氧状态,而且还通过上调修复基因如SDF-1α的表达达到修复受损的神经组织和重建神经系统的作用.     

血清饥饿法诱导人角质细胞HaCaT细胞周期同步化的研究

探讨血清饥饿法对人表皮细胞HacaT细胞周期的影响．采用无血清和低血清浓度的DMEM培养基饥饿HaCaT细胞,分别培养6h,12h,22h时,用倒置显微镜观察细胞形态,并且收集各组细胞,用流式细胞仪分析细胞周期各个时相细胞百分比．结果发现HaCaT细胞系在含0．2％FBS的DMEM培养基中培养12h,细胞仍然贴壁生长,并且可以使G0／G1期细胞百分率达到66．5％．因此,血清饥饿法可以应用于人表皮细胞HaCaT同步于G0／G1期,从而为后期药物筛选打下基础．     

细胞不对称分裂机制--芽殖酵母接合型不对称转换

芽列酵母的母细胞与子细胞呈不对称接合型转换，其原因是只有母细胞可表达编码核酸内切酶的基因HO，使相反接合型的缄默基因转位到活动位点取代了原来的接合型基因。HO的不对称表达是因在细胞分裂的末期至G1早期，子细胞核中存在有Ashlp转录抑制因子。Ashlp的不对称分布是由其mRNA的定向转运而实现的：ASH1 mRNA在有丝分裂期被转录出之后，通过接头蛋白She2p和She3p与肌球蛋白Myo4p结合成核糖核蛋白颗粒，经肌动蛋白纤维转运到子细胞远端皮层而锚定并翻译。     

芽殖酵母Sik1蛋白在纺锤体定位中的功能

为了探究芽殖酵母蛋白Sik1在有丝分裂纺锤体定位中的功能,利用同源重组技术将SIK1的内源启动子替换成GAL1启动子,得到基因组位点过表达SIK1的菌株,同时使菌株表达GFP-Tub1,以便观察纺锤体;接着在12℃低温条件下培养细胞以促进双核细胞的产生,细胞经乙醇固定、DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核分裂及纺锤体...     

细胞钙浓度的变化对周期信号的响应及胞间同步

 钙离子是细胞中一种很重要的第二信使,通常它以钙离子浓度振荡的方式转导多种生理学信息,影响细胞分化、成熟和凋亡等各种生理过程,最终导致生物效应。通过实验研究了细胞钙浓度的变化对周期信号的响应和建立在多细胞模型的基础上,从肝细胞内钙离子振荡的动力学模型出发,以胞间耦合因子作为影响因子,数值分析单细胞、耦合的多细胞下的胞内钙振荡形式。实验结果表明：细胞钙振荡对不同频率和强度的周期信号的响应是不同的：对有的参数周期信号能产生强烈响应,有的不能。数值分析结果表明：细胞间的差异性导致钙振荡不同,胞间耦合影响多细胞钙振荡的同步性。     

芽殖酵母细胞周期过程不同时期的定量观测

在芽殖酵母中构建CDC10-mCherry和SPC42-mCherry荧光蛋白, 作为酵母细胞周期不同时期的报告系统。根据酵母细胞中芽环(CDC10-mCherry)的产生和消失以及纺锤体极体(SPC42-mCherry)的复制和分离,可以测量细胞周期中 G1期、S期、Early M期和Late M期的时间长度。在此报告系统的基础上, 分别构建S期细胞周期蛋白CLB5-GFP和M 期细胞周期蛋白CLB2-GFP菌株, 实现单细胞观测, 检验报告系统工作的稳定性和准确性。该报告系统可作为研究酵母细胞周期不同时期时间长度等定量生物学问题的背景菌株。     

大鼠肝癌细胞株细胞的同步化及其检测

细胞增殖分裂是细胞最基本的生理活动。影响细胞增殖分裂归根到底是影响细胞周欺遥运行,细胞周期失控的超常快速运行将导细胞癌变;停滞不前则常是细胞衰老,凋亡的前奏,以大鼠肝癌细胞株（ＨＴＣ）的细胞为研究对象,探讨了ＨＴＣ细胞的同步化方法,并经流式细胞仪测定同步率,结果表明：在ＨＴＣ细胞对数生长期,以胸腺嘧啶核苷和秋水仙碱顺序阻断法及胸腺嘧啶核苷双阻断法可分别获得同步率为７２．１０％的Ｇ１期和９８．９４％     

酵母诱导子对肉苁蓉细胞悬浮培养影响的研究

目的:以酵母诱导子对肉苁蓉细胞悬浮培养及其抗氧化活性成分苯乙醇苷的合成动力学的影响进行研究.方法:从肉苁蓉种子诱导出愈伤组织,在MS培养基上进行细胞悬浮培养.首先考察肉苁蓉细胞生长和苯乙醇苷合成的动力学,在此基础上就酵母诱导子对细胞生长和苯乙醇苷合成的影响进行研究.结果:肉苁蓉悬浮细胞培养经过三天的延滞期后进入对数生长期,21天后细胞生长进入稳定期,最大生物量和苯乙醇苷产量分别达到8.03g DW/L和97 mg/L.在对数生长期后期,即培养的第18天加入0.8 mL/瓶浓度的酵母诱导子,诱导三天的效果最好,苯乙醇苷的最高产量为237.7 mg/L,为对照的239%.结论:合适浓度的酵母诱导子不但能够有效提高肉苁蓉细胞悬浮培养液中的苯乙醇苷含量,同时对细胞生长也具有促进作用.     

带脉冲影响2层网络的同步

该文考虑带脉冲影响2层网络的同步问题.首先,根据Lyapunov函数方法和脉冲微分方程理论,给出该网络的同步准则; 然后,根据该准则实现同步需要的脉冲增益和脉冲间隔可以被估算出; 最后,通过数值例子验证所得结果的有效性和正确性.     

TD-SCDMA下行同步算法设计与FPGA实现*

针对TD-SCDMA系统下行同步快速高效需求,在分析TD-SCDMA物理帧结构的基础上,提出了一种利用功率比检测作为粗同步,并结合频域相关确定精确同步的TD-SCDMA下行同步算法与FPGA实现方案。利用Modelsim和Matlab对算法的可行性和有效性进行了仿真验证。最后在Altera Cyclone III FPGA硬件平台进行了板级调试和实时数据验证。结果表明该同步算法具有较好的实时性和较高的稳定度。     

混沌同步在保密通讯中的应用

首先简述了混沌同步的基本内容,然后用变量替代法实现了２个交叉耦合映象格子系统的混沌同步,最后将此混沌同步信号作为加密信号,成功地实现了保密通讯,模拟计算表明,此法具有较高的保密程度。     

几种无机离子和氨基酸对酿酒酵母酒精耐性的影响

研究了几种无机离子和氨基酸对酿酒酵母的生长和发酵的乙醇耐性的影响。结果表明,镁离子和锌离子都能提高酵母菌在乙醇存在下的生物量,并增加发酵的酒精度和缩短发酵时间;镁离子作用强于锌离子;钙离子对酵母菌生长的乙醇耐性有促进作用,但高浓度的钙离子对酵母菌生长有抑制作用;钙离子对发酵的乙醇耐性无影响;甘氨酸和脯氨酸对酵母菌生长的乙醇耐性无影响,但能提高酵母菌发酵的酒精度和缩短发酵时间,而谷氨酸则显示相反的结果。无机离子和氨基酸对酵母菌的生长和发酵的乙醇耐性体现不一致的效果表明酵母菌的生长和发酵的乙醇耐性机制不同。