铜绿假单胞菌耐药机理

铜绿假单胞菌是耐药性十分突出的一类院内感染条件致病革兰氏阴性细菌．本文从生物被膜、细胞密度依赖式毒力因子、外排系统、基因盒一整合子系统及铜绿假单胞菌噬菌体几方面对其耐药性机理进行了概述，并提出了未来对微生物耐药性研究和应用的一些策略。     

苦参与环丙沙星合用对铜绿假单胞菌生物膜的影响

采用体外复制铜绿假单胞菌生物膜模型,研究了苦参水煎液与环丙沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物膜的影响及协同杀菌效果,结果显示,1/16、1/4最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration MIC)的苦参水煎液可显著增加1/41、/2 MIC的环丙沙星对铜绿假单胞菌生物膜的抑菌活性,两药合用具有明显的协同作用.     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

584株铜绿假单胞菌的耐药性分析与研究

目的监测本单位的病原菌对抗菌药物的敏惑性与耐药性,从而提高抗生素的治疗效果,针对性地选用抗菌药物,控制医院铜绿低单胞菌感染的发生率。方法采用vitek-2的ID-GNB鉴定卡和AST-GN药敏卡,用K-B法手工药敏鉴定检测,用铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922进行质量控制。结果丁胺卡那霉素、哌拉西林/他唑巴坦抗菌作用最强;美洛培南、哌拉西林、妥布霉素、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素次之;头孢曲松、头孢唑肟、头孢噻肟、头孢他啶、四环素、复方新诺明等的抗菌作用最弱。结论单一抗生素对铜绿假单胞菌的治疗不理想,易出现耐药株,主张联合用药。     

584株铜绿假单胞菌的耐药性分析与研究

目的监测本单位的病原菌对抗菌药物的敏惑性与耐药性,从而提高抗生素的治疗效果,针对性地选用抗菌药物,控制医院铜绿低单胞菌感染的发生率。方法采用vitek-2的ID-GNB鉴定卡和AST-GN药敏卡,用K-B法手工药敏鉴定检测,用铜绿假单胞菌ATCC27853、大肠埃希菌ATCC25922进行质量控制。结果丁胺卡那霉素、哌拉西林/他唑巴坦抗菌作用最强;美洛培南、哌拉西林、妥布霉素、头孢吡肟、亚胺培南、庆大霉素次之;头孢曲松、头孢唑肟、头孢噻肟、头孢他啶、四环素、复方新诺明等的抗菌作用最弱。结论单一抗生素对铜绿假单胞菌的治疗不理想,易出现耐药株,主张联合用药。     

铜绿假单胞菌多重耐药性分子机制的研究

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌.由于各种抗生素的广泛使用,细菌耐药问题日趋严重,导致了铜绿假单胞菌产生了很强的耐药性而且多重耐药,铜绿假单胞菌通过多种途径产生耐药.而从分子水平对其耐药性机制进行研究具有重要意义.     

铜绿假单胞菌生物被膜研究进展

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是最严重的医院内获得性感染的病原菌之一,生物被膜(Biofilm,BF)多粘附在生物材料和植入的各种导管及人体组织表面,它的形成使得铜绿假单胞菌生物被膜相关感染不断上升,致使慢性感染性疾病反复发作且难以控制,给治疗增加更大的难度。临床上已有许多被证实可用于治疗PA生物被膜感染的药物,藻酸盐、密度感应系统对PA生物被膜形成的作用也为治疗生物被膜病提供了新思路。     

混凝去除铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)的效果研究

取纯培养条件下的铜绿微囊藻水样，分别用三氯化铁、聚合氯化铝、硫酸铝等3种药剂作混凝去除铜绿微囊藻烧杯试验，结果表明：聚合氯化铝混凝效果优于其他2种药剂，具有药剂投加量少(30～40mg／L)、矾花形成快、矾花沉降性能好、除藻效率高等特点．在聚合氯化铝最佳混凝条件下，投加聚丙烯酰胺助凝试验，发现添加6mg／L的聚丙烯酰胺只使除藻效率在原有基础上提高3％．铜绿微囊藻水样的pH对聚合氯化铝的混凝效果有明显影响，产生最佳混凝的pH值范围为6．0～7．0之间．     

实验动物绿脓杆菌的检测方法研究

目的研究和建立实验动物及环境样品绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)快速、准确的鉴定方法。方法分别用VITEK2 Compact全自动分析系统和常规生化方法对绿脓杆菌参考菌株、绿脓杆菌分离株和恶臭假单胞菌分离株进行鉴定试验,并比较不同鉴别培养基的鉴定效果。结果可以用PIA琼脂培养基/CFC琼脂培养基和乙酰胺琼脂培养基为鉴定培养基,采用以氧化酶、明胶液化和42℃生长试验为主的常规鉴定方法,也可采用VITEK2Compact全自动微生物分析系统直接鉴定绿脓杆菌或将其用于常规鉴定结果的确认。结论 VITEK2 Compact全自动微生物分析系统适于绿脓杆菌快速、准确的鉴定或用于对常规鉴定结果的确认。     

铜绿假单胞菌中RND外排泵功能的研究

目的铜绿假单胞菌的耐药性与细胞膜的低通透性和膜上存在的RND外排泵有关,而且RND外排泵起主导作用。方法利用发光杆菌的荧光素酶基因操纵子luxCDABE为报道子,对铜绿假单胞菌基因组中所有的12种已知和可能的RND外排泵基因进行了系统的研究。结果低于抑制浓度庆大霉素对PAOC和PAOI有明显的调节作用。低于抑制浓度四环素对PAOJ调节作用,但属于同一类抗生素的土霉素却没有调节作用。α-氨苄青霉素对12个RND外排泵中的11个都有明显的调节。结论这些RND受不同类型抗生素调节并将它们向外排出。外排泵所向外排出的物质如抗生素,在结构上没有可识别的相关性。其中一个由基因PA2520,PA2521和PA2522组成的RND外排泵,不仅能够向外排出锌离子,而且还能向外排出抗生素。     

北京地区2008～2011年实验动物绿脓杆菌检测结果与分析

目的了解SPF级实验动物中绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）感染现状和规律,为防止绿脓杆菌感染提供依据。方法参照国家标准,对SPF级小鼠、大鼠、豚鼠和兔进行检测。结果在2008～2011年中检测的SPF级动物中,PA感染的阳性率为8.9%（267/2988）;不同动物感染率无显著差异;不同时间（不同年份和不同季度）PA阳性检出率无显著差异;其中,免疫缺陷动物的PA阳性检出率为32.5%明显高于免疫功能正常动物的7.6%;PA检出率随着送检单位和动物数量的增加逐年升高;不同动物群体间感染率相当,且保持稳定。结论北京地区SPF级实验动物中PA检出率较高,应加强管理。     

绿脓杆菌外毒素A与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白嵌合表达质粒的构建及其免疫原性的研究

构建外毒素结构域Ⅰ a基因(EPA103)与Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白(HSV-2-gD)嵌合蛋白表达载体(pET-EgD),得到嵌合表达蛋白.利用外毒素结构域Ⅰ a基因表达蛋白的佐剂效应,以pET-EgD表达嵌合蛋白免疫Balb/c小鼠.结果显示:嵌合表达蛋白(pET-EgD)免疫小鼠,可在小鼠体内诱导产生抗HSV-2特异性抗体.嵌合表达蛋白(pET-EgD)具有较强的免疫原性,为开发研究Ⅱ型单纯疱疹核酸疫苗奠定了基础.     

紫外诱变选育优势铜绿假单胞菌菌株

采用紫外照射的方法对铜绿假单胞菌菌株进行诱变,从中筛选出一株优势正突变菌菌株B2,并对其形态,生长条件及产鼠李糖脂能力进行了研究。研究发现,相对于亲本B0,菌株B2产鼠李糖脂产量大幅度增高,从0.82 g/L增加到2.71 g/L。菌株形态为杆状菌。最佳生长条件为:温度为30℃,甘油30 g/L,酵母膏2 g/L,微量元素5 m L/L。研究结果表明从重金属含量高的制革污泥中筛选得到的铜绿假单胞菌经紫外诱变后可显著提高产鼠李糖脂产量,并进一步确定诱变后的菌株产鼠李糖脂的最佳发酵条件,为鼠李糖脂的量产提供理论基础。     

铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测铜绿假单胞菌（PA）,调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2008—2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等。从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58．9％,其次伤口分泌物标本占18．9％、中段尿16．7％,其它类型标本占5．5％。抗菌谱分型分为5型。180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98．9％（178／180）,分为9种类型：Ⅰ～Ⅸ。结论RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

铜绿假单胞菌的LexA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a( )上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a( )表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.