聚β-羟基丁酸酯解聚酶的分离纯化及性质研究

研究了青霉Penicillium sp.DS9713a产聚β-羟基丁酸酯(PHB)解聚酶的情况,并通过超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀及Sepharose CL-6B凝胶色谱对PHB解聚酶进行了分离纯化,获得了解聚酶的纯酶组分,纯化倍数为59.1,回收率为20%。经检测该酶的分子量约为18000Da,等电点为7.6,化学试剂EDTA、SDS及巯基乙醇对酶活均有较强的抑制作用,而H2O2和尿素对酶活的抑制不明显;同时,对该纯酶组分的蛋白性质进行了测定,结果显示该酶天冬氨酸和谷氨酸含量较高,推测与底物结合作用相关,二级结构以α螺旋为主,不含β折叠;降解产物的质谱分析显示,该酶的作用产物为3HB单体,暗示其以外切模式对PHB进行降解。     

镰孢菌属Q7-31菌株产耐碱性木聚糖酶的酶学性质

对镰孢菌属Q7-31菌株所产木聚糖酶的粗酶液和部分纯化后的酶液进行了酶学性质比较试验。其粗酶液的最适反应pH为6.0,温度50℃;稳定范围:pH6.0,温度30℃。粗酶液经部分纯化后酶液的最适反应pH5.0～6.0,温度为40～50℃;稳定范围:pH5.0～6.0,温度30～40℃。纯化后酶液的酶学性质明显优于粗酶液。     

聚β-羟基丁酸酯的微生物降解

简要地综述了近年来关于聚β-羟基丁酸酯（polyhydloxybutymte以下简称PHB）的微生物降解方面的一些研究成果，包括：降解PHB的菌种及降解能力；PHB的降解过程和分子机制；PHB解聚酶的生物化学与分子生物学研究等。     

P(3-co-4)HB解聚酶的分离纯化及酶学性质研究

聚(3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯)(P(3-co-4)HB)解聚酶是由微生物所分泌的一种胞外酶,可以将P(3-co-4)HB降解为水溶性小分子物质,为了阐明P(3-co-4)HB材料的生物降解机理并建立其生物循环系统,P(3-co-4)HB降解菌和降解酶的研究越来越受到关注。本论文以Penicillium sp.DS-04菌株为材料,对其产生的P(3-co-4)HB解聚酶进行了分离纯化,发酵液经过冻干和分子筛层析得到了P(3-co-4)HB解聚酶的纯酶组分,纯化倍数和回收率分别为3.15和10.44%,SDS-PAGE显示该酶分子量为44.0kDa。本文还对P(3-co-4)HB解聚酶的酶学性质进行了测定,并初步探讨了解聚酶的作用模式。     

降解聚β-羟基丁酸酯的真菌的研究

从不同来源的活性污泥中分离筛选出一株可降解聚β－羟基丁酸酯（PHB）的真菌，初步鉴定为青霉（Penicillium.sp）。编号DS9713。降解特性研究表明，DS9713菌株对PHB膜的降解可分为两个阶段，即迟缓阶段和等速降解阶段。PHB的非晶部分易于被降解。该菌降解PHB膜的最适温度为30℃，最适pH值为6．0－6．8。     

胡芦巴半乳甘露聚糖酶法改性的工艺条件

采用正交实验法优选纤维素酶降解胡芦巴半乳甘露聚糖的最佳工艺条件,以黏均分子质量和还原糖得率为指标,考察了酶解温度、酶解时间、酶用量及pH对降解效果的影响.结果表明,纤维素酶降解最佳工艺条件为:酶用量1500U/g,酶解温度50℃,pH 5.0,酶解时间150min,影响降解工艺的主次因素顺序为:酶解温度>酶用量>酶解时间＞pH.所得产物的黏均相对分子质量1.2×105,还原糖得率5.1%.     

四川白魔芋球茎中甘露聚糖酶部分酶学性质

从萌发的四川白魔芋球茎中分离纯化β-甘露聚糖酶,该酶的最适pH为5.1,最适温度为50 ℃,有较好的热稳定性和较宽的pH适宜范围( 5.0～9.0),其米氏常数Km=5.49×10-2%.该酶可将球茎中所含的甘露聚糖降解成二糖、三糖、四糖和五糖等水溶性的甘露低聚糖.     

一株降解PHB菌株的分离、鉴定及特性

本研究从活性污泥中分离筛选出一株高效降解聚–3–羟基丁酸酯(PHB)的菌株PHBd-1,通过形态学和ITS序列分析比对,确定为草酸青霉(Penicillium oxalicum).在以PHB为唯一碳源的培养基上接种培养4 d后,菌落周围出现透明圈.在以PHB为唯一碳源的液体培养基中接入PHBd-1孢子悬浮液,4 d后PHB颗粒降解率达到90%以上,培养液pH由7.20降至2.67,3–羟基丁酸含量在第4天达到最高值.在pH4.5和温度30℃条件下,培养液中PHB降解酶活力最高.     

酯酶基因Est2的异源表达及酶学性质研究

对来自α/β水解酶超家族的酯酶基因Est2进行了克隆、异源表达及纯化,然后对其酶学性质进行了研究.研究结果显示:酯酶Est2的最适底物为对硝基苯乙酸酯(p-NPC2),最适反应温度为50℃,最适pH为8.0;Est2具有较好的pH稳定性,在pH 5.0～10.0范围内,其相对酶活性保持在50％以上;在40℃条件下具有最...     

β-琼脂糖酶(AgaA7)在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

为研究重组β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其酶学性质,根据GeneBank中β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体pET-22b( )中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并测定其酶学性质.结果表明:重组酶的相对分子质量为~5.0×104,与预期相符.此酶最适反应pH是7.0,在pH58的缓冲液中最稳定;最适反应温度为50℃,在低于50℃时比较稳定.Na ,K ,Ca2 ,Mg2 对重组酶活性影响不大,而Zn2 ,Hg2 ,Pb2 则对酶活性具有不可逆抑制作用.