鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine Proteinase,CSP).性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的I型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.     

两种天然有机物对碱性蛋白酶活力的影响

探讨了两种不同天然有机物对2709碱性蛋白酶活力的影响,采用Folin法测定了该蛋白酶的最适作用条件.较系统地分别考察了不同浓度的天然有机物F、天然有机物C及这两种有机物共同作用于2709碱性蛋白酶对活力的影响.结果表明对酶活均有不同程度的激活,其中提高酶活最显著的是天然有机物F和C共同作用于蛋白酶的混合体系.     

pH渐变条件下双酶协同水解大豆蛋白

研究了在没有外加碱的pH渐变条件下．用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2．4L,酶活力2．4AU/g)和黑曲霉酸性蛋白酶(酶活力3000u／g)双酶协同水解从大豆蛋白制备寡肽(10个氨基酸以下的肽)水解物的可行性．考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对大豆蛋白降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解大豆蛋白的最佳条件：水解温度为60℃．碱性蛋白酶加入量为每g蛋白15μL,酸性蛋白酶加入量为6％,底物浓度为40g／L,水解时间为18h．在上述最佳条件下,大豆蛋白的降解率可达76％,蛋白质的水解度可达26％,水解物中相对分子质量小于1350的寡肽达到了66％．结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高大豆蛋白降解率以及蛋白质水解度．     

毕赤酵母表达重组植酸酶酶学性质的比较研究

通过酶学性质比较毕赤酵母GS115表达的E.coli K12植酸酶(appA)及其突变体植酸酶(appA NR)和黑曲霉植酸酶(phyA)的最适pH、温度、热稳定性及对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性.结果表明,在95℃,加热10 min,appA NR可残余90％左右的活力,而其他两种只残余20％～50％的活力;appAN...     

天然有机物对碱性蛋白酶活力的影响

探讨了两种不同天然有机物对2709碱性蛋白酶活力的影响,采用福林法测定了该蛋白酶的最适作用条件.分别考察了不同浓度的天然有机物T、天然有机物S及这两种有机物的共同作用对2709碱性蛋白酶活力的影响.结果表明:T、S及T和S的协同作用对酶活均有不同程度的激活,其中提高酶活最显著的是天然有机物T和S共同作用于蛋白酶的混合体系.     

不同pH对糙海参消化酶活性的影响

研究了不同pH条件下糙海参前肠、中肠及后肠的蛋白酶和淀粉酶比活力的变化.结果表明:1)糙海参前肠和中肠在pH=3,后肠在pH=10时,其蛋白酶的比活力最高;糙海参前肠和中肠蛋白酶的最适pH值在酸性范围,后肠蛋白酶的最适pH值在碱性范围;2)糙海参前肠淀粉酶在pH=3,中肠和后肠淀粉酶在pH=7时,其比活力最高,前肠淀粉酶的最适pH值在酸性范围,中后肠淀粉酶的最适pH值在中性或偏碱性范围;3)糙海参的整个肠道均能消化蛋白质与淀粉,中后肠是淀粉消化的主要场所;4)淀粉酶的比活力高于蛋白酶的比活力,这与其摄食底栖藻与腐屑的食性相吻合.     

带鱼内脏蛋白酶的性质

带鱼内脏提取液的蛋白酶活力，在ＰＨ２．２￣９．０之间有三个峰值出现，这说明提取液中存在酸性（最适ＰＨ为３．６）、中性（最适ＰＨ为６．８）及碱性（最适ＰＨ为８．４）蛋白酶；这三类蛋白酶在作用时间为３０ｍｉｎ时，最适温度分别为５０℃，５０￣６０℃，５０￣６０℃，温度对酶水解速度影响很大，内脏蛋白酶在０℃的水解速度是最适温度的１．７５％￣２．７１％。ＮａＣｌ，ＦｅＣｌ３，ＺｎＳＯ４，ＣａＣＬ２，ＥＤＴＡ     

碱性蛋白酶提取牦牛皮胶原蛋白的工艺研究

为了改变牦牛原料皮传统制革的利用方法,实现其经济效益最大化和利用方式绿色化。文中对牦牛皮的基本组成进行了分析,且通过单因素试验法,并在其基础上设计了正交试验,从效率、资源、能源、经济等方面对碱性蛋白酶提取牦牛皮胶原蛋白的最佳工艺进行了研究。结果表明:牦牛皮中含有丰富的胶原蛋白,占到其干重的74.98%;同时碱性蛋白酶酶解牦牛皮制备胶原蛋白的最佳工艺条件为碱性蛋白酶用量为1.5%、温度36℃、液比1∶35和浸提时间12 h。由此可使碱性蛋白酶提取牦牛皮胶原蛋白的提取率达到68.3%。     

许氏平鲉Sebastes schlegelii“特定发育期”主要酶的活力和激素含量的研究

在人工池养条件下,对许氏平鲉早期A~P期16个发育阶段中初产仔鱼期(A期)、4个"危险期"(B、E、L、N期)、2个"生长转折期"(G、O期)和幼鱼期(P期)等8个"特定发育期"开展实验,研究了各期鱼苗主要酶(酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶)的活力和激素(三碘甲状腺原氨酸(T_3)、甲状腺素(T_4)、生长激素(GH)、类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ))含量的变化.结果表明:6种酶均在A期被检测到.其中,酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、脂肪酶、淀粉酶在A期已表现出较高活力,但均呈现下降趋势,且在L期出现一个波峰(p0.05),脂肪酶下降趋势整体较缓,其他3种酶在G期之前下降趋势较急.酸性蛋白酶和碱性蛋白酶活力在A期较低,其中酸性蛋白酶活力在N期之前无显著变化,N期后显著升高,而碱性蛋白酶活力在G期前显著升高,G期后保持相对稳定.GH和IGF-Ⅰ含量均呈现先上升后下降再上升的趋势,且IGF-Ⅰ含量明显高于GH含量;2种激素均在G期呈现一个波峰(p0.05),在L期呈现一个波谷(p0.05).T_3和T_4含量均呈上升趋势,且变化趋势相似,但T_3含量始终低于T_4含量;T_3含量的变化滞后于T_4含量的变化,T_4含量的峰值出现在G期(p0.05),而T+3含量的峰值出现在L期(p0.05).对许氏平鲉早期阶段"特定发育期"主要酶的活力和激素含量变化规律的研究,可为提高鱼苗"特定发育期"的投饵效率及育苗成活率提供参考.     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex-75,Sephadex-100凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌（Vibrio pacini)X4B-7菌株产生的碱性蛋白酶，得到电泳纯酶制品，并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示：纯酶的分子量为27KD，等电点pI=8.7,最适反应pH9.0-10.5，最适反应温度50－60℃。EDTA对酶活力没有影响，高酶浓度可以降低SDS对酶的抑制作用，该酶可用于解聚组蛋白。DNA琼脂糖凝胶电泳证明：酶对DNA酶有降解作用，而对DNA没有降解作用，该酶有希望应用于核酸的提取。     

鱼类基质金属蛋白酶研究进展

基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)是一类高度保守的生物活性依赖于金属离子的内切酶家族,是参与降解细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)的重要蛋白酶,MMP几乎能降解细胞外基质的所有成分.研究发现,MMPs参与鱼类胶原蛋白的降解,是导致鱼类死后肌肉软化的重要原因.综述了基质金属蛋白酶的分类、结构、调节机制以及它们对鱼类肌肉胶原蛋白的作用.     

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

桐粕降解菌DBTM6培养条件及降解酶活性的研究

采用单因素试验法对桐粕降解菌DBTM6菌发酵的主要影响因素碳源、氮源、温度、转速、初始pH值等进行了研究,通过正交试验对其发酵培养基在摇瓶阶段进行了优化,并在优化后的条件下测定了该菌的生长曲线及其产生的蛋白酶、果胶酶和纤维素酶的活性.结果表明:该菌株最适培养基各成分质量分数为:玉米粉2.0%,蛋白胨0.5%,NaCl 0.5%,最适条件:温度为40℃,pH为6.0,转速为200 r/min.在最适培养条件下测定了DBTM6菌的纤维素酶活力为3.5717 U/mL,果胶酶活力为1.1415 U/mL,蛋白酶活力为36.358 3 U/mL,比活力分别为13.8545U/mg,4.4279 U/mg,141.0331 U/mg.     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究…

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９￣１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶，酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０￣１１，在ｐＨ８．５￣１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

B.cereus MBL13-U产牛骨胶原蛋白酶工艺优化

为了获得能够高效降解牛骨胶原蛋白的新型胶原蛋白酶,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U)为出发菌种,以胶原蛋白酶活力为检测指标,对影响发酵的4个因素(菌种接种量、发酵温度、p H、发酵时间)进行单因素试验。通过四元二次正交旋转组合试验,确定了B.cereus MBL13-U菌株发酵制备胶原蛋白酶的最佳工艺。当菌种接种量4%(体积分数)、发酵温度35℃、初始p H6.4、发酵时间46 h时,胶原蛋白酶活力达(92.31±1.13)U/m L。将其作用于牛骨胶原蛋白,通过扫描电子显微镜对酶解过程中的牛骨胶原蛋白进行结构分析。分析结果表明:酶解破坏了牛骨胶原蛋白原本完整的表面结构,使其所含的Ⅰ型胶原蛋白更多地暴露在表面,加快水解。     

流加发酵法生产碱性蛋白酶

采用流加法生产碱性蛋白酶,与分批发酵法相比,产酶活力提高10％以上,特别是以糊精为碳源时,产酶活力可提高20％以上。     

蛋白酶对脂肪酶活性影响的研究

为了弄清洗涤剂中碱性蛋白酶及金属离子对碱性脂肪酶稳定性的问题，对加酶洗涤剂中的碱性蛋白酶及金属离子对圆弧青霉ＰＧ３７所产碱性脂肪酶的活力影响进行了研究。在碱性脂肪酶溶液中分别添加不同量的碱性蛋白酶和金属离子，并在２５℃保温３０ｍｉｎ，分别测定保温前后的脂肪酶活力。结果表明：在一定浓度范围内的蛋白酶对ＰＧ３７碱性脂肪酶活力的影响较小，可同时应用于洗涤剂中；金属离子对脂肪酶活力无明显影响，甚至在一定浓度范围内对酶活有激活作用。总之，ＰＧ３７菌株所产碱性脂肪酶具有良好的酶学特性，非常适合于洗涤剂用酶。     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究──1出发菌株的筛选及产酶条件的研究

从土壤中筛选到一株嗜碱性地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３－Ａ６．，该菌株能在ｐＨ１０以上６０℃的环境中良好生长，４５℃ｐＨ９～１２的条件下均可产生活力较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适条件：６０℃，ｐＨ１０～１１，在ｐＨ８．５～１１之间较稳定。６０℃保温１ｈ剩余酶活在２０％以上。     

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原(胶原蛋白),依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液(胃蛋白酶)消化15 min出现较为明显的降解,消化1 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰蛋白酶)消化30 min出现较为明显的降解,消化3 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰凝乳蛋白酶)消化1~4 h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.     

高温芽孢杆菌碱性蛋白酶发酵条件及酶性质研究

从西藏尼木卡如林温泉附近土样中分离到一个碱性蛋白酶产生菌株SD-142．该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌．在50℃条件下，以10％的接种量接种于发酵培养基中振荡培养48h后，发酵液中碱性蛋白酶活可达516U／mL．发酵培养基的组成成分为麦芽糖6％、豆饼粉3％、麸皮3％、Na2HPO4 0．4％、MgSO4 0．02％、CaCl2 0．02％，pH自然．对该酶的性质研究表明，其最适作用pH为9．5，最适反应温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性，并且显示了与去污剂良好的相容性．