不同转移能力的人鼻咽癌细胞CNE-2Z克隆株在scid小鼠体内的验证和比较

报道将从人类鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)分离出的不同克隆株细胞悬液,分别移植于严重联合免疫缺陷(scid)小鼠和BALB/c裸鼠的背侧皮下,于56天后处死所有小鼠,进行了大体和组织学检查。结果发现当每只scid小鼠移植2×10~6个瘤细胞时,CNE2-L2克隆株为高转移株,其淋巴转移率为100％,肺转移率为71％;而CNE2-L4克隆株为低转移株,其肺转移为13％,淋巴结未见转移;而当每只小鼠移植2×10~5个瘤细胞时,CNE 2-L2也为高转移克隆株,但比上者为低,其淋巴结转移率为71％。肺转移率为14％;CNE2-M2克隆株为中转移株。其淋巴转移率为43％,肺转移率为14％。与其裸鼠相比,当给每只BALB/c移植2×10~6个瘤细胞后56天时,尚未查见转移。说明两种免疫缺陷动物对恶性瘤细胞表型的表达,scid小鼠比BALB/c裸鼠为敏感。另外,皮下移植瘤细胞的数量也可能与转移出现的时间有密切关系。在相同时间内移植瘤细胞数越多,转移率也相对地增高,反之亦然。     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤增殖的影响

目的 研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤生长和增殖的影响.方法 复制人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤模型,观察姜黄素对移植瘤生长的影响.结果 裸鼠体内实验显示姜黄素可以抑制移植瘤的生长.不同浓度姜黄素组移植瘤瘤重与溶剂对照组比较有降低趋势,高剂量组降低更明显,差异有极显著性(P＜0.001),抑瘤率达59.75%.结论 姜黄素可以抑制CNE-2Z-H5细胞裸鼠移植瘤的生长,其可能在鼻咽癌的治疗中具有一定的价值,值得进一步深入研究.     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤增殖的影响

目的研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤生长和增殖的影响。方法复制人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤模型,观察姜黄素对移植瘤生长的影响。结果裸鼠体内实验显示姜黄素可以抑制移植瘤的生长。不同浓度姜黄素组移植瘤瘤重与溶剂对照组比较有降低趋势,高剂量组降低更明显,差异有极显著性(P<0.001),抑瘤率达59.75%。结论姜黄素可以抑制CNE-2Z-H5细胞裸鼠移植瘤的生长,其可能在鼻咽癌的治疗中具有一定的价值,值得进一步深入研究。     

鼻咽癌转移灶细胞裸鼠体内演进中转移及增殖动力学研究

将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）移植于裸鼠皮下，待裸鼠发生转移时，取其淋巴结和（或）肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代，如此用转移灶癌细胞重复传２－４代后，观察各代裸鼠的转移率和转移途径；同时观察各代癌细胞生长曲线、增殖指数及移植瘤瘤重和体积倍增时间的变化。结果显示：随着鼻咽癌转移灶癌细胞裸鼠体内的演进，各代裸鼠的转移率增高，且转移途径更为单一；各代癌细胞的增殖能力不断增强。提示：鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强，且二者关系密切。     

人和动物肿瘤移植于免疫缺陷和正常小鼠脾内后肝转移形成及其机制探讨

为了探讨肝转移形成机制和生物学特性,用人类鼻咽癌(CNE—2Z)和小鼠子宫颈癌(U14)分别在裸鼠和615近交系小鼠脾内移植。结果人类鼻咽癌脾内移植后43—50天有8/10例(80％)在脾一端形成瘤结节的同时肝内也形成转移瘤,其中4例合并肺转移;小鼠子宫颈癌在615小鼠脾内移植后,13—14天处死,结果1和3天切除原发瘤,分别有11％和63％发生了肝转移,而未切除原发瘤有73％发生肝转移。同时有程度不等的肺和淋巴结转移。结果表明凡有足够的癌细胞接种到脾内均可发生原发瘤,继而沿血流系统进入肝脏,在肝内形成转移瘤。     

裸鼠LMLM转移癌模型的鉴定

建立了一株裸鼠淋巴道转移的LMLM瘤系,通过体外培养,建立了稳定的、可长期传代的LMLM癌细胞株,经染色体核型、LDH同功酶染色和Southern blotting分析,确定了LMLM癌的小鼠来源,并通过一系列抗体免疫病理鉴定,进一步确定LMLM是上皮组织来源的小鼠自发性肿瘤。裸鼠自发性皮下肿瘤,经体内皮下接种传代,取转移灶瘤块进行原代培养,得到稳定的可传代的细胞株,形态小而圆,大小一致,贴壁生长,每周传两代,群体细胞倍增时间48小时,经数月的体外传代培养,细胞形态及传代特性无明显变异。体外培养的LMLM癌细胞按常规方法制备染色体标本,可见典型的小鼠“V”形染色体,染色体数范围为36—59,平均数为40.76,有52％细胞染色体数为40条。LMLM癌原位灶及腋下淋巴结转移灶的LDH同功酶电泳行为完全相同,证实淋巴结转移癌细胞确实来源于原位肿瘤的转移,以小鼠肾脏的LDH同功酶谱作为对照,LMLM癌以LDHs为主,而与人小细胞肺癌NCI-H_128的比较,二者LDH的电泳行为完全不同,推论LMLM癌和H_128是两种来源无关的癌系。进一步用Soushern blotting方法鉴别LMLM癌的种系来源,人小细胞肺癌H_128在放射自显影中和人DNA探针呈强阳性杂交,并不受小鼠DNA预杂交影响,而LMLM原位灶和转移灶均不能和人DNA探针杂交。用人DNA预杂交,小鼠肺DNA作为探针,LMLM原位灶和转移灶呈强杂交,人H_128不能与之杂交,这从DNA水平证明,LMLM是小鼠来源的肿瘤。用一系列抗T、B淋巴细胞抗体,抗上皮细胞标志物抗体,抗间叶组织标志物抗体及抗神经内分泌标志物抗体进行免疫组化综合比较分析,结果为LMLM与抗淋巴细胞抗体、抗神经内分泌标志物抗体和抗间叶组织标志物抗体均呈阴性反应,而与部分抗上皮细胞标志物抗体EMA,Keratin反应阳性,故可排除淋巴系统肿瘤可能,不支持小细胞肺癌类的神经内分泌肿瘤,而是一种上皮来源的肿瘤。本实验通过染色体核型、LDH同功酶谱分析及Southern blotting杂交都较肯定地鉴别了LMLM癌的种系来源,并相互验证了实验结果的可靠性,并通过免疫组化鉴定提示该癌为上皮组织来源,LMLM癌的建立和鉴定为肿瘤转移机制研究和肿瘤转移的诊断、治疗提供了一个较好的动物肿瘤转移模型。     

人类肿瘤治疗实验研究

<正> 一个高转移的人肺巨细胞癌移植瘤PG已在无胸腺裸鼠体内建立。在各种遗传背景的裸鼠体内,包括BALB/cA、NIH、C57BL/6J、615/PBI等,PG肿瘤细胞皮下接种后,均可发生自发转移,局部淋巴结转移率为94％(110/117),肺转移率为83％(97/117)。这种高转移特性在五年多时间内连续100多代移植过程中仍保持不变。为了研究肿瘤转移的遗传机制,我们从PG瘤细胞中提取高分子量DNA片段,用磷酸钙共沉淀的方法转染NIH/3T3小鼠纤维母细胞。经过连续两轮转染,获得的转化细胞能在裸鼠体内成瘤。其中一个转化克隆TF87-2-10皮下接种裸鼠后,能自发转移至肺。DNA分子杂交显示该细胞基因组中整合有人DNA序列。说明该转化细胞转移表型的     

气功外气对人鼻咽癌细胞株裸鼠成瘤的影响

应用细胞培养技术,以裸鼠为实验动物,按双盲法进行了两次实验,第一次实验由气功师发放外气作用于人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2),然后将受功组和非受功组(对照组)细胞分别接种于裸鼠(NC-Z裸鼠),结果受功组成瘤受到明显抑制,两次实验的抑制率均为100％(3/3和4/4)。两次实验组织病理检查证实:受功组裸鼠接种癌细胞部位的组织均未见癌,肝、肺组织也未见癌;非受功组裸鼠瘤组织均为低分化鳞癌,除第一次实验的2号鼠见肺转移癌外,其余各鼠肝,肺均未见癌。本研究提示有进一步研究气功外气抑瘤及其机理的必要性和可能性,同时也为气功外气治疗鼻咽癌提供有意义的资料。     

GSNO对人鼻咽癌细胞增殖的影响

采取GSH和NaNO2(1∶1)在酸性避光条件下反应的方法合成GSNO,用已构建的人鼻咽癌细胞(CNE-2)为模型,研究GSNO对CNE-2细胞增殖的影响.结果表明:NO能明显抑制CNE-2细胞增殖,200μmol/L GSNO作用CNE-2细胞,12h抑制率为19.1%,24h抑制率为30.4%.在一定浓度范围内,GSNO抑制CNE-2细胞的生长增殖效果与作用时间和浓度相关.     

乳腺癌四个分子亚型与腋窝淋巴结转移的相关性研究

目的探讨乳腺癌四个分子亚型与腋窝淋巴结转移的相关性.方法选取乳腺癌患者264例,根据雌激素受体、孕激素受体、表皮生长因子受体2(Her-2)的表达,将其分为Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型、Triple-negative型四个分子亚型,比较不同分子亚型之间腋窝淋巴结转移率的差异,并对影响腋窝淋巴结转移的相关因素进行多因素Logistic回归分析.结果 HER-2过表达型腋窝淋巴结转移率最高,其次为Luminal B型,不同分子亚型乳腺癌的腋窝淋巴结转移率之间差异具有统计学意义(P0.05).年龄和月经状态在腋窝淋巴结转移率之间差异无统计学意义(P0.05),浸润性小叶癌和导管癌较其他病理类型乳腺癌的淋巴结转移率明显增高;肿瘤直径大于5 cm后,淋巴结转移率明显增加,差异均具有显著统计学意义(P0.01).多因素回归分析显示:肿瘤大小、是否为Luminal A型、是否为浸润性导管癌、浸润性小叶癌为腋窝淋巴结转移的独立危险因素.结论 HER-2过表达型和Luminal B型乳腺癌腋窝淋巴结转移率较高;肿瘤大小、分子分型、病理类型为影响腋窝淋巴结转移的独立危险因素.     

胃癌淋巴结转移度对预后的影响

背景:淋巴结转移影响胃癌预后,惯常方法是依淋巴结所在部位划分转移级站,而这在实际工作中很难实施。有必要寻求切实可行方法确定病期早晚。方法:≥D_2手术64例,相似文献   

赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响

探讨了赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响.采用体外培养的人肝癌细胞HepG2细胞株,接种入96孔板,24 h后加入赤参水提物,MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法,计算肝癌细胞生长存活率;Acridine orange/ethylene dibromide(AO/EB)荧光染色法,检测细胞形态学变化;RT-PCR法检测细胞Bcl-2、Bax、p53基因表达变化.结果表明,赤参水提物可剂量-时间依赖性地抑制HepG2细胞增殖;1.0 mg/mL赤参水提物处理HepG2细胞24 h后,细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞;赤参水提物处理HepG2细胞后,Bcl-2 mRNA表达量剂量依赖性地减少,而Bax和p53 mRNA表达量剂量依赖性地增加.     

应用图像分析技术评估胃腺癌细胞增殖、DNA倍体与淋巴结转移的关系

目的:应用图像分析技术观察胃腺癌细胞DNA倍体平均含量、细胞增殖状况,评估其与胃腺癌淋巴结分期、淋巴结转移数目的关系。方法:收集根治性手术切除的胃腺癌标本69例,经Feulgen染色,采用计算机图像分析系统对胃腺癌细胞DNA倍体平均含量、细胞增殖状况进行定量分析,观察其与胃腺癌淋巴结转移的关系。结果:N_0、N_1、N_2、N_3组胃腺癌细胞DNA异倍体平均含量、增殖期细胞数量随淋巴结转移数目增高而依次升高,在有无淋巴结转移以及转移淋巴结个数之间差别有统计学意义(P<0.05)。结论:胃腺癌细胞DNA异倍体含量高、进入S/G2/M期细胞多者,淋巴结转移发生率高,且与胃腺癌UICC/AJCC的淋巴结转移分期呈正相关,评估胃腺癌细胞增殖、DNA倍体状况对提示淋巴结转移的程度有重要的指导意义。     

人胃癌裸小鼠体内原位移植浸润转移特征的研究

观察人胃癌原位移植至裸小鼠体内后的浸润转移特征,并探讨其发生机制,ＢＡＬＢ／Ｃ－ｎｕ／ｎｕ裸小鼠１２只,以ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料,通过手术将瘤组织块移植到裸小鼠胃壁,待动物濒临死亡时进行系统解剖,观察其浸润转移的部位及特征,原位移植瘤全部成功,且所有动物均出现局部浸润及淋巴结转移,肝脏转移率为６６．７％,癌性腹水的发生率为５０％,移植肿瘤晚期还可向脾脏,胰腺及肾脏等处浸润     

甲状腺乳头状癌中央区食道旁淋巴结清扫的临床意义

目的探讨中央区淋巴结清扫在甲状腺乳头状癌治疗中的临床意义.方法选取128例甲状腺乳头状癌行同侧中央区淋巴结清扫的患者作为观察对象,按照手术方式将其分为健康观察组(65例,行单侧或双侧甲状腺腺叶+峡部切除+中央区淋巴结清扫术)与对照组(63例,行单侧或双侧甲状腺腺叶+峡部切除术),随访2 a,对比两组患者的中央区食道旁淋巴结转移、外侧区淋巴结转移、复发及并发症情况.结果 1)随访期间,两组均未出现死亡病例;观察组随访期内发生中央区淋巴结转移5例,转移率为7.69%;颈侧区淋巴结转移3例,转移率为4.62%;对照组随访期内发生中央区淋巴结转移11例,转移率为17.46%;颈侧区淋巴结转移7例,转移率为11.11%;对照组明显高于观察组,两组比较具有统计学意义(P0.05).2)观察组术后并发症发生率为13.85%,对照组术后并发症发生率为15.38%,两组之间比较无统计学意义(P0.05).结论甲状腺乳头状癌的中央区淋巴结转移率较高,行中央区食道旁淋巴结清扫治疗术后复发率与并发症发生均较低,值得在临床中推广应用.     

人肝癌HepG2细胞异质性亚系的建立及生物学行为初探

目的：从人肝癌细胞株HepG2母系克隆分离异质性亚系，探讨肝癌异质性机理。方法：应用有限稀释法对培养人肝癌细胞株HepG2进行单细胞克隆分离异质性亚系，并应用细胞计数法、流式细胞仪检测其细胞周期和DNA含量，MTT法检测其对不同抗癌药物敏感性，同时应用裸鼠脾种植肝转移在体实验模型探讨其生物学行为的差异。结果：分离到HepG2—D3及HepG2—F4两个细胞亚系。HepG2—F4亚系细胞呈长梭形，体外增殖能力强，但脾脏内种植后不成瘤，不转移(0／10)；HepG2—D3亚系细胞呈多角形、多突起，脾脏内种植成瘤率高(10／10)，并在肝脏形成广泛转移(10／10)。结论：从人肝癌细胞株HepG2母系成功分离建立了两个异质性细胞亚系，两在形态学、增殖能力及其对不同抗癌药物敏感性、成瘤和转移能力方面均存在差异，该亚系可为进一步研究肝癌异质性尤其是转移的确切机制提供良好的素材。     

人胃癌裸鼠原位接种模型的建立及其在实验治疗中的应用

报道在裸鼠体内建立人胃原位癌模型的结果。裸鼠经麻醉后,在近前胃处的胃粘膜下接种人胃癌细胞SGC-790l悬液0.02ml(含癌细胞约10~6)。种后三天可见接种部位苍白、僵硬,种后一周 ,胃粘膜接种部位隆起小结节并向周围浸润。种后二周,胃部隆起肿块明显,胃粘膜皱襞消失,局部淋巴结肿大,腹腔内可见少量腹水。种后三周,胃部肿块增大质硬,与周围结肠、脾脏等粘连成团块状,腹壁及大网膜可见散在小球形癌灶,腹腔内有明显血性腹水,荷瘤鼠呈现蛙形腹、恶液质。存活期为16～25天,局部肿瘤直径超过1cm,病理证实癌细胞在粘膜与肌层浸润性生长并累及浆膜。接种后第八天注射~(125)I标记的胃癌单克隆抗体MGB_2(~(125)I-MGB_2)进行生物学分布研究。注射四天后肿瘤/非瘤组织的放射性比值(T/NT):血2.01,肝3.57,脾,3.98,肺3.67,正常胃4.11。SPECT放射免疫显像可见肿瘤局部放射性浓聚。上述结果表明:已建立的人胃癌裸鼠胃原位接种模型,再现了临床胃癌的局部浸润、淋巴结转移、腹腔内播散等病理过程,为胃癌研究提供了一种新的与人体更为接近的动物模型。我们用此模型对临床常用抗胃癌药物进行实验治疗研究:在裸鼠胃原位接种PSGC-7901后,分别予以每周一次或两次的给药治疗。连续给药三周,以荷瘤鼠存活期评价疗效。结果表明,以MMC的疗效为最好,治疗组小鼠与对照组比较,存活时间延长90％以上,其次为cis-DDP,而5-FU及CTX的效果较差,Me-CCNU则无效。     

siRNA沉默survivin增强hNIS转染的鼻咽癌细胞株对~(131)碘的敏感性

目的:研究Survivin特异性小片段干扰RNA(siRNA)能否增强人钠碘同向转运体(hNIS)转染的鼻咽癌细胞株(CNE-2-hNIS)对131碘的放射敏感性.方法:设计并合成针对survivin基因的特异性siRNA,利用脂质体法转染CNE-2-hNIS细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Westernblot方法检测细胞survivin基因沉默效果.CCK-8、克隆形成实验和Annexin VFITC/PI双染流式细胞仪检测131碘孵育后对细胞增殖和凋亡的影响.结果:SurvivinsiRNA转染CNE-2-hNIS细胞72h后,细胞的survivin基因mRNA和蛋白表达明显降低,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,131碘孵育后,Si-survivin组较SiRNA-NC组细胞增殖率降低,凋亡率增高,差别有统计学意义(P0.05).结论:Survivin特异性siRNA能显著沉默CNE-2-hNIS细胞的survivin基因的表达,增加CNE-2-hNIS对131碘的放射敏感性.     

紫杉醇对低分化鼻咽癌细胞株CNE-2生长凋亡的影响及Survivin mRNA的表达变化

目的:探讨紫杉醇对低分化的鼻咽癌细胞株CNE-2生长抑制率、凋亡的影响以及凋亡抑制基因Survivin的变化.方法:通过MTT法计算紫杉醇作用CNE-2细胞后的生长抑制率,通过流式细胞仪检测紫杉醇对CNE-2细胞凋亡及细胞周期的影响并应用One Step RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化.结果:观察到CNE-2细胞对紫杉醇具有时间和剂量的依赖性.10-9～10-7 mol·L-1的紫杉醇作用后,随着时间的增加,细胞的凋亡率也明显增加.低浓度的紫杉醇(10-9～10-8 mol·L-1)作用细胞后,并没有出现G2/M期的累积.而当浓度达到10-7 mol·L-1作用24 h后便出现明显的G2/M期阻滞,但48 h后这种阻滞又出现下降.CNE-2细胞被高浓度的紫杉醇(10-7～10-6 mol·L-1)作用24 h后,Survivin mRNA的表达反而显著增加(P＜0.05),低浓度紫杉醇则对Survivin mRNA的表达无影响.10-7 mol·L-1紫杉醇作用CNE-2细胞后,Survivin mRNA表达明显增加并持续到48 h,72 h后则又降至对照组水平.结论:紫杉醇作用CNE-2细胞后可以出现早期明显的G2/M期累积,这种现象可能与Survivin基因表达上调有一定关系.     

MMP-2在胃癌组织中表达及意义

目的探讨MMPs在胃癌组织中的表达及意义.方法 SP免疫组化法检测胃癌组织、区域淋巴结、正常胃黏膜中MMPs的表达,同时分析其与胃癌患者人口学特征、疾病特征、病理学特征的关系.结果与正常胃黏膜比较,胃癌组织中MMP-2的阳性表达率明显升高,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌区域淋巴结组织中,有转移淋巴结组MMP-2的阳性表达率明显高于无转移淋巴结组,差异具有统计学意义(P0.05);胃癌区域淋巴结组织中,MMP-2表达阳性组淋巴结转移率明显高于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌组织中MMP-2的表达随着分化程度降低、浸润深度加深、淋巴结转移、临床分期增加而明显增强,差异具有统计学意义(P0.05).胃癌组织中MMP-2表达阳性组患者5 a生存率明显低于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.01);胃癌区域淋巴结组织中MMP-2表达阳性组患者5 a生存率明显低于表达阴性组,差异具有统计学意义(P0.01).结论 MMP-2异常表达在胃癌的侵袭、转移中发挥关键作用;区域淋巴结组织中MMP-2表达异常与淋巴结转移及患者预后有关.