人源锌指蛋白ZNF24及其锌指结构域的表达、纯化及DNA结合性质的研究

转录因子是调控基因表达的关键蛋白,能够以序列特异性方式结合DNA。ZNF24是Krüppel-like锌指转录因子家族成员之一,在细胞增殖和分化中起重要作用,能促进肝癌细胞的增殖,抑制神经元细胞的分化。ZNF24蛋白N端包含一个SCAN结构域,C端为锌指区,由4个串联的C2H2型锌指结构组成。ZNF24能特异性识别和结合基因的启动子,参与基因的表达调控,但其发挥功能的具体分子机制并不清楚。本文我们在大肠杆菌中成功表达了人源锌指蛋白ZNF24全长和其锌指结构域ZNF24(243～368),ZNF24全长蛋白在溶液中以三聚体形式存在,而锌指结构域在溶液中为单体,表明ZNF24蛋白N端的SCAN结构域能够促进全长蛋白的寡聚化。凝胶迁移实验验证ZNF24全长蛋白和锌指结构域与双链DNA底物结合能力,为进一步研究锌指蛋白ZNF24调控基因表达提供理论基础,相关结果表明SCAN结构域介导的蛋白寡聚可能代表了一种新的转录活性调节机制。     

SV40T/pcDNA3.1重组质粒的构建及在肝细胞中的表达

构建重组质粒SV40T/pcDNA3.1,为建立永生化肝细胞系奠定基础。pcD2质粒经BamH Ⅰ单酶切获得SV40T基因片段,并将其捕入pcDNA3.1载体,经酶切鉴定证实,SV40T基因片段已成功插入载体中,采用常规方法分离培养肝细胞,用SV40T单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,验证其在肝细胞中的表达。     

丙酮酸制备丙酮酸钙的纯化工艺

研究丙酮酸制备生产丙酮酸钙的纯化结晶工艺的研究,以达到高品质的医药级丙酮酸钙晶体产品。     

白介素24融合蛋白的表达、纯化和促伤口愈合功能的鉴定

本研究通过优化小鼠白介素24(mIL-24)基因序列,构建以Fc-tag为标签的mIL-24-Fc融合蛋白.对CHO进行MTX分级加压筛选,获得了稳定、高表达mIL-24-Fc蛋白的阳性克隆,同时优化了CHO细胞无血清驯化与稳定表达蛋白体系.经protein A亲和层析纯化mIL-24-Fc蛋白并利用AP binding实验检测生物学活性后,小鼠皮内注射mIL-24-Fc蛋白和伤口愈合实验证明:注射mIL-24-Fc蛋白后,小鼠表皮产生2~3层细胞增生,伤口愈合速度加快.     

猪血浆纤维连接蛋白的分离纯化和抗血清的制备

纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)是一类结构上类似、免疫原性相同的高分子糖蛋白,具有广泛的生物学活性。根据在体内分布的不同,一般分为血浆型与细胞型两种,血浆型FN主要存在于血浆及体液中,又称可溶性FN。血浆FN含量对多种疾病的诊断和预后有重要意义。临床上采用FN的替代治疗血浆FN缺乏患者具有一定的疗效。为此,我们改进了从猪血浆中纯化FN的方法,制备了单价特异的兔抗猪血浆FN血清,初步探讨了免疫电泳检测FN的可能性。     

黏着斑蛋白Supervillin的抗体制备及纯化

黏着斑蛋白Supervillin（SVIL）是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究 SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒 ｐＧＥＸＫＧ ＳＶＩＬＣ３０２和ｐＨＩＳ８ ＳＶＩＬＣ３０２,并在细菌 ＢＬ ２１（ＤＥ３）中用 ＩＰＴＧ分别诱导表达 ＧＳＴ ＳＶＩＬＣ３０２和 ＨＩＳ ＳＶＩＬＣ３０２融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化 ＧＳＴ ＳＶＩＬＣ３０２蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备 ＳＶＩＬ多克隆抗体,并用 Ｎｉ ＮＴＡ柱子结合 ＨＩＳ ＳＶＩＬＣ３０２蛋白,对其进行交联,纯化抗体。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ（ＷＢ）和 Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＩＦ）实验证明该抗体可以识别外源的 ＧＦＰ ＳＶＩＬ和内源的 ＳＶＩＬ蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此ＳＶＩＬ多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白 ＳＶＩＬ在细胞内的功能奠定了坚实的基础。     

重组大鼠细胞球蛋白的制备、纯化与活性

通过聚合酶链式反应(PCR)克隆鼠源细胞球蛋白(Cytoglobin,CYGB)基因,构建原核表达载体pET22b-Cygb,转入E.coliBL21(DE3)经乳糖诱导表达CYGB,发现CYGB主要以可溶形式存在,其表达量占可溶性总蛋白的35%以上.通过DEAE阴离子交换柱层析和Sephacryl S-100凝胶过滤层析,CYGB纯度可超过95%.重组表达的可溶性CYGB不但具有过氧化物酶活性,其活性为(3.23±0.12)mkat.(g.min)-1,还能保护胎鼠原代皮肤成纤维细胞减轻氧化应激损伤(H2O2模型).     

两种质粒DNA纯化方法的比较

质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,在基因构建中常被用作基因的载体,实验中经常使用碱裂解法提取质粒.本实验对应用经典纯化方法和离心柱吸附纯化方法提取的质粒进行了对比,结果表明,离心柱吸附纯化方法提取质粒更快捷、更高效,是质粒提取的最理想方法.     

浅谈药用纯化水制备系统的设计

制备出符合GMP标准的药用纯化水是制药生产的首要保障,两级RO＋EDI的制水方式满足了现今生产用水需要。本文对二级RO＋EDI的系统设计进行了简要介绍。     

Daxx-C抗血清的制备与纯化及初步应用

将含有Daxx-C端的融合蛋白6His-DM626-740纯化物免疫小鼠,分析抗血清效价并将其纯化,为进一步分析Daxx在人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌组织中的分布奠定基础。将6His-DM626-740纯化物以皮下多点注射和腹腔注射方式免疫接种4只8周龄雌性BALB/c小鼠,初次免疫3周后,加强免疫1次,以后每周加强免疫1次;共免疫4次。每次免疫前及末次免疫后7天取血,ELISA测定抗体效价。饱和硫酸铵盐析沉淀法初步纯化抗血清,并用Western blot检测之。培养Caski细胞,利用间接免疫荧光试验观察Daxx在细胞中的分布与定位。纯化物免疫小鼠后,制备的Daxx-C多克隆抗体效价为1:6400。纯化的抗血清能够与IPTG诱导表达的6His-DM626-740及其纯化物发生结合反应。在Caski细胞,显绿色信号的Daxx主要分布于胞浆,少数分布于胞核且在核膜附近荧光较强,呈区域性聚集。6His-DM626-740纯化物具有良好的免疫原性;纯化的抗血清可用来检测细胞中的Daxx。     

WINDOWS3.1与8031下位机通信的一种新方法

在ＷＩＮＤＯＷＳ编程中,通过对ＡＮＳＩＣ某些库函数的合理使用,将其嵌入ＷＩＮＤＯＷＳ并实现以ＷＩＮＤＯＷＳ３．１编程为主体的程序同８０３１下位机串行通信．解决工业系统中通过主机控制下位机的适时控制问题     

基因重组融合蛋白的纯化

本文论述了基因重组融合蛋白纯化过程和存在的问题.     

桃耳七中鬼臼毒素的分离与纯化

来自太白山的小檗科植物桃耳七(Sinopodophyllum emodi Wall.)中含有一种抗肿瘤的木脂素--鬼臼毒素.为了通过简便的方法从桃耳七中制得纯度较高的鬼臼毒素,对分离纯化鬼臼毒素的方法进行了研究.发现鬼臼毒素在苯中析出时能生成一种苯加合物,根据这一特性,在不使用柱层析法的情况下,只通过普通的化学分离法制得了质量分数大于95%的鬼臼毒素,总产率为1.7%.     

真核表达载体pcDNA3.1(+)-MyoD-HA-His的构建及功能检测

为了便于检测和纯化转染到非肌肉细胞的生肌因子MyoD,同时为能够与转染的其他生肌因子的表达量进行比较,将MyoD编码区克隆在真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-His。测序表明克隆的MyoD序列正确,并与标签序列构成一个开放阅读框;Western blot显示在起始密码子前添加kozak序列GCCGCCACC,可使融合蛋白能够以较高水平表达;生肌转化实验表明,融合蛋白MyoD-HA能够有效激活靶基因的表达。     

纳米TiO2的制备及其在环境净化方面的应用

综述了近年来TiO2粉体及薄膜光催化剂的制备方法,及光催化在环境净化和其它方面的应用进展,展望了TiO2光催化剂的发展研究方向.     

脉孢菌纤溶酶的纯化和性质初步研究

应用超滤、盐析、凝胶过滤和疏水相互作用层析对脉孢菌产纤溶酶初步纯化后,活性电泳证实获得单一的纤溶活性组分。对该纤溶组分的基本酶学性质作了进一步的研究,结果表明该纤溶酶的最适作用温度和最适pH分别是46℃和7.8,在40℃以下和pH6.2~7.8时稳定,该纤溶酶具有直接和间接的纤溶活性。     

即刻早期基因Arc/Arg3.1的表达及其与学习记忆关系概述

Arc/Arg3.1基因为即刻早期基因(Immediate-early genes,IEGs)中的一种,相对于其他作为转录因子的IEGs,Arc/Arg3.1是可以直接作为效应因子的细胞结构元件.Arc/Arg3.1基因在神经元的突触可塑性方面起重要的作用,如果它的蛋白表达受阻则会损坏LTP的维持,从而损坏长期记忆的巩固.就Arc/Arg3.1基因的序列克隆与表达及其与学习记忆之间关系的研究进展进行了阐述.     

反相柱层析制备去乙酰真菌环氧乙酯

研究不同条件下反相柱层析对去乙酰真菌环氧乙酯分离纯化的影响.通过RP-18中压柱层析对从红树林内生真菌拟茎点霉(Phomopsis sp.)A-1-2-3诱变后突变株G1-1固体发酵提取物中的去乙酰真菌环氧乙酯进行了纯化精制.对RP-18柱层析纯化去乙酰真菌环氧乙酯操作条件进行了考察,使去乙酰真菌环氧乙酯的含量从28%左右提高到81.5%左右,回收率大于90%.采用RP-18直接洗脱,溶析结晶,重结晶,结晶残液RP-18分步洗脱的总工艺路线,去乙酰真菌环氧乙酯的总回收率为87.7%,产品最终纯度达到99%以上.     

稻壳活性炭的制备及在水质净化中的应用

以稻壳为原料制备了高比表面积的粉末活性炭,对其进行了表征,并将其用于自来水源水净化．研究结果表明,稻壳活性炭的碘吸附值和比表面积分别为1010mg/g和1923m^2／g;稻壳炭和商品炭对水中浊度的去除效果基本相同,对高锰酸盐指数的去除率分别为61％和50％;水样处理前后的GC-MS测试结果表明,稻壳炭和商品炭对自来水源水中有机物的去除率分别为71％和45％．制备的稻壳活性炭具有优良的吸附能力．