应用噬菌体随机肽库研究抗溶藻弧菌及其外膜蛋白单抗识别的特异性表位

用噬菌体随机七肽库筛选制备的抗溶藻弧菌及其外膜蛋白的纯化单抗，经3轮淘洗，获得较高程度富集的噬菌体，效价较高，第3轮淘洗比第1轮淘洗的产量高出近百倍。同时获得的阳性噬菌体经ELISA检测能与Va抗原发生强的阳性反应，确证了淘洗筛选的结果。     

污水处理系统中噬菌体的浓缩分离和宏合格基因组DNA的提取

以城市污水活性污泥为材料,经分级粗滤、超滤、等密度梯度离心等方法获得高纯度噬菌体悬液,常规SDS方法提取噬菌体DNA.荧光显微镜观察和计数表明浓缩液中噬菌体的纯度和丰度都显著提高;利用透射电镜对浓缩液进行观察,噬菌体的形态呈杆状、线状等多样;基因组提取结果显示,得到的DNA样品纯度高,大小介于20~25kb之间,电泳条带清晰,整个泳道没有弥散现象;利用细菌通用引物对提取的噬菌体DNA进行16SrDNA扩增阴性,说明所得到的噬菌体纯度较高,没有细菌污染.通过实验获得一种高效快捷的从污水处理系统中纯化浓缩噬菌体并进一步获得噬菌体宏基因组DNA的方法,同时为研究环境噬菌体生态分布、多样性组成奠定基础.     

南昌链霉菌与放线菌噬菌体ΦC31相互关系的研究

经点滴法和平板法检测,放线菌噬菌体ΦC31及大部分衍生噬菌体能感染南昌链霉菌,但这些噬菌体的DNA却不能南昌链霉菌。通过比较来自不同宿主的KC515噬菌体悬液对为铅青链霉菌和南昌链霉菌的侵染效率,发现南昌链霉菌对ΦC31及衍生噬菌体具有很强的限制性。Southern杂交实验表明,ΦC31衍生噬菌体KC301（C^ attP^ ）可以整合到南昌链霉菌NS－32－26的染色体上形成溶源,其溶源菌自发释放KC301,但热激诱导后并没有提高释放频率。通过脉冲电泳技术和Southern杂交的方法定位了KC301在南昌链霉菌NS－32－26染色体上形成溶源的附着位点（attB)。这些结果均有利于利用以ΦC31为基础的载体对南昌链霉菌进行分子生物学的研究。     

鸡白痢沙门氏菌O_(12)特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O12(宿主菌)的噬菌体(Ph-1),并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究.试验结果显示,纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm;经高于60℃温度处理1h后噬菌体失活;PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性;该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为0.01-0.001;一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min,裂解期持续60min.     

鸡白痢沙门氏菌O12特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O12 (宿主菌)的噬菌体(Ph-1), 并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究. 试验结果显示, 纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm; 经高于60℃温度处理1h 后噬菌体失活; PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性; 该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为 0.01-0.001; 一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min, 裂解期持续60min.     

鸡白痢沙门氏菌O12特异性噬菌体的分离及生物学特性研究

采用双层平板培养法从成都某养鸡场的污水样本中分离得到一株鸡白痢沙门氏菌O₁₂(宿主菌)的噬菌体(Ph-1), 并对菌斑形态及理化特性进行了初步研究. 试验结果显示, 纯化后该噬菌体的噬菌斑直径约3mm; 经高于60℃温度处理1h 后噬菌体失活; PH5-7时该噬菌体可保持较高效价和较强的紫外线耐受性; 该噬菌体的最佳感染复数(MOI)为 0.01-0.001; 一步生长曲线显示该噬菌体的潜伏期为40min, 裂解期持续60min.     

兔抗Ｍ１３噬菌体酶标抗体的制备

M13噬菌体已被广泛地应用于噬菌体展示技术.M13的酶标抗体,是在噬菌体展示技术筛选结果ELISA检测中不可缺少的试剂.我们制备了兔抗M13抗血清,其效价高于1:6000;经两步饱和硫酸铵沉淀,初步纯化了兔抗M13抗体;用过碘酸钠法对抗体进行了辣根过氧化酶的标记,酶标记抗体活性为1:6400.     

抗噬菌体谷氨酸生产菌的选育——细胞融合技术在细菌育种方面的应用

本文利用紫外线诱变的方法获得了抗噬菌体谷氨酸生产菌株.为提高抗噬菌体菌株的产量,作者对谷氨酸生产菌进行了属间融合试验,结果获得了产酸为5.8—6.0％的抗噬菌体谷氨酸生产菌.在适量青霉素存在下可获得99.9％的原生质体。选用最佳条件再生率达20％。在选择培养基上获得融合子,其融合率达1.15×10~(-(?))量级,其中具噬菌体抗性的菌株占22.2％.     

洱海下游肠道致病菌噬菌体分离与鉴定

目的:分离洱海下游水体中的肠道致病菌噬菌体,了解肠道致病菌污染情况。方法:通过噬菌斑法从洱海下游水体中分离和鉴定各种肠道致病菌噬菌体。结果:成功分离出了痢疾杆菌噬菌体、伤寒杆菌噬菌体、乙型副伤寒杆菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体4种肠道致病菌噬菌体。结论:洱海下游水体存在痢疾杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、大肠杆菌污染,提示需进一步加强大理周边生活污水排放的治理工作。     

致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离与效价测定

鉴于临床分离的致病性大肠杆菌的耐药谱很广,常规抗生素的治疗效果较差,死疫苗往往存在毒力返祖的问题.实验从污水中分离得到了5株噬菌体,采用自行分离和鉴定的大肠杆菌为宿主菌,经纯化增殖提高效价后进行裂解试验,取得了比较满意的效果.     

1株盐湖噬菌体CJL-7的分离及其生物学特性研究

以嗜盐菌为宿主,从山西省运城盐湖湖水中分离出1株噬菌体,经浓缩纯化后用电镜观察其形态,并进行限制性酶切、蛋白组成分析及生物学特性研究.研究结果表明:分离获得的CJL-7为双链DNA烈性噬菌体,属微小噬菌体科;其头部为正多面体结构,直径约为80 nm,在其衣壳中至少含3种主要结构蛋白;该噬菌体含有脂质包膜,宿主范围较广;...     

Foreign peptides displayed on the major coat protein of filamentous bacteriophage

The genome of filamentous bacteriophage can be engineered to display foreign peptides on the surface of the major coat protein. This display system offers an effective approach to researching the immunological recognition of protein. Studies show that this system has several advantages: 1) the specificity of the immune response; 2) the ability to recruit helper T cells; 3) needs no external adjuvants; 4) the structural mimicry of peptide epitopes. These suggest that this technology could be developed into a simple and inexpensive means to produce new biological reagents and vaccines. The development of this technology and the main property of filamentous bacteriophage are introduced in this paper. Some novel results about foreign peptides display using the main coat protein of filamentous bacteriophage are also summarized.     

236例儿科抗菌素使用对比分析

目的为了解儿科抗菌素应用的变化及现状,探讨改善儿科抗菌素滥用趋势的途径。方法分别随机抽取时间跨度10年两组儿科住院病历,对其诊断,用药指征、用药时间、用药种类、用药量进行对比分析。结果住院病例全部使用抗菌素、X线、实验室检查支持使用抗菌素分别为75%和47.1%,抗菌素越用越新,用量偏大。结论必须建立系统的到位的干预措施,强化继续教育,加强知识更新和病原微生物的临床研究。     

抗生素Bagremycin生产菌Streptomyces sp. Tü4128接合转移系统的建立

基于噬菌体φC31 att/int系统,采用属间接合将来自大肠杆菌的DNA有效地导入菌株Tü4128的孢子中。通过条件优化,当融合温度为37℃时,在含80mmol/L MgCl2的ISP4培养基上使每个受体细胞的接合频率显著提高到7.3×10-3。Southern blot分析显示在受体菌染色体上存在单一的染色体附着位点(attB位点)。整合位点的DNA序列测序显示为保守。采用优化的方法建立了大肠杆菌和菌株Tü4128间高效的属间接合系统。     

浅议发酵乳生产中噬菌体的污染与防治

噬菌体污染是发酵工业普遍存在的问题。分析了发酵乳生产中噬菌体的类型,污染途径和表现症状,针对其特性提出了检查办法和防治措施,从而保证生产的安全。     

免疫亲和层析纯化兔抗人IgG

用人IgG-Sepharose 4B亲和柱,3mol/L氯化镁洗脱,一步纯化免抗人IgG血清,获得了SDS-PAGE电泳纯,免疫双扩散法效价达1/256,收率62.6%;用8mol/L脲洗脱,效价为1/128,收率34.1%.与硫酸铵多步沉淀法比较,纯度和效价大大提高,为获得高度特异、高亲和力兔抗人IgG提供了一条简便途径.     

可控性自裂解乳球菌的构建

为阐明发酵乳杆菌温和噬菌体φPYB5编码的由穿孔素(Hyb5)和裂解素(Lyb5)组成的裂解盒在乳酸菌中的作用特征,将hyb5-lyb5基因克隆到E. coli/L. lactis穿梭质粒pSEC的nisin诱导型启动子下游,构建了重组质粒pSEC-hyb5-lyb5。将pSEC-hyb5-lyb5电转入Lactococcus lactis NZ9000,获得重组菌株NZphl。经nisin诱导表达后,Hyb5-Lyb5表现出高的裂解活性,使NZphl菌液的浊度（OD600）急剧下降,并释放出大量胞内蛋白,为利用自裂解菌株生产优质乳制品奠定了基础。     

重组碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测方法的建立

小鼠或家克经重组bFGF免疫后产生高滴度的抗血清,用此血清建立了间接ELISA检测方法,检测bFGF的灵敏度达10ng/ml.