白血病细胞棒状小体检测的方法学研究及影响因素的探讨

Auer小体和Φ小体是急性髓性白血病诊断的形态学特征之一。本文采用瑞一姬氏染色法(W—G)、髓过氧化物酶(联苯胺)染色法(POX)和氢过氧化物酶(DAB)染色法(HPO)对93例AML病人的髓片进行研究,发现棒状小体的检出率以DAB法为最高。同时发现若在对急性白血病患者常规骨髓读片中计数至少500个细胞,并注意对不典型者的辨认,亦可大大提高小体的检出率。     

氢过氧化物酶(HPO)阳性Phi小体形态特点、超微细胞化学观察及其临床意义

本文对41例成人白血病及4例骨髓增生异常综合征(MDS)病人的骨髓标本进行氢过氧化物酶(HPO)染色,观察HPO阳性Phi小体在光镜下的形态特点及电镜下细胞化学超微结构,并初步探讨了HPO染色技术及Phi小体检测的临床意义。作者认为:该染色法特异性强,重复性好,操作简便,对于活动性AML的诊断几无假阳性,并可用于指导治疗,值得推广应用。     

AML患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的检测

目的：检测急性髓性白血病（AML）患者外周血中CR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况。方法：利用半巢式PCR扩增31例不同亚型AML患者外周血单个核细胞DNA中TCRB基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环（sjTRECs）中的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs,10例正常人外周血作为对照。结果：TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人和AML患者中均可检测到,AML患者三者的检出率分别为45．16％、41．94％和32．26％,均略低于正常人,但差别未显示出统计学意义。≤30岁的AML患者3种Vβ sjTRECs的检出率均高于30岁以上的患者,以Vβ2-Dβ1sjTRECs最明显。结论：率先提供AML患者外周血T细胞中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dp1 sjTRECs的存在情况,为研究AML患者胸腺近期各Vβ亚家族幼稚（naive）T细胞的输出情况提供资料。     

QIAquick Gel Extraction Kit提取和纯化PCR产物用于AML中GATA-2基因突变的分析

转录因子ＧＡＴＡ家族是１９８９年首次发现的锌指结构家族转录因子。其中ＧＡＴＡ２在造血干细胞的增殖和分化中起重要作用［１］。绝大多数急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞表达ＧＡＴＡ－２基因［２］。在分析ＧＡＴＡ－２基因表达中，发现ＧＡＴＡ－２突变的现象［...     

Elf-1基因在急性髓细胞性白血病中的表达情况

目的:建立实时定量PCR检测Elf-1基因表达水平的方法,了解急性髓细胞性白血病(AML)患者外周血Elf-1基因表达水平.方法:采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测33例AML患者:M2型17例、M3型6例、M5型10例和20例健康人外周血的单核细胞的Elf-1表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2~(-△Ct)×100%计算Elf-1基因表达水平.结果:AML组Elf-1表达水平(13.518±19.197)%明显高于健康对照组(2.044±1.321)%(P<0.01),不同AML亚型之间Elf-1的表达水平没有显著性差异(P=0.52),但各亚型AML的Elf-1的表达水平均与健康对照组比较均有显著性差异(P<0.01).结论:建立SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR分析外周血Elf-1表达水平的方法,检测急性髓细胞性白血病Elf-1基因高表达情况.     

血小板输注疗效影响因素探究及其与预后的关系

目的:研究影响急性白血病患者血小板输注疗效的相关因素,探究输注疗效对患者预后的影响.方法:对中山大学附属第一医院血液内科113例急性白血病(AL)患者预防性输注的1 921次血小板的影响因素进行分类分析,并依据血小板增加指数值(CCI),将患者分为血小板输注有效组和无效组,对无效组及有效组患者进行预后分析.结果:血小板输注疗效与患者起病时的血象、脾脏大小有关,而与患者的年龄、性别、血型、疾病类型等并无统计学差异.无效组患者死亡率(45.2%)高于有效组患者(25.8%),且有统计学差异(P<0.05).急性淋巴细胞白血病(ALL)患者无效组中位生存期(10.4月)远低于有效组(17.2月),具有统计学差异(P<0.05),急性髓系白血病(AML)患者无效组及有效组中位生存期均未到达,两组无统计学差异(P>0.05).结论:起病时伴有贫血(血红蛋白质量浓度<60 g/L)、血小板降低(血小板计数<20×10⁹/L)、白细胞升高(白细胞计数>50×10⁹/L)等血象异常的急性白血病患者更易发生血小板输注无效,血...     

多通道电化学基因传感阵列用于同时检测AML相关多药耐药基因的新方法研究

本研究筛选并制备高特异性 DNA 探针,与纳米粒子标记技术相结合,设计多通道电化学基因传感阵列检测模式,建立灵敏、快速、简便、经济的AML相关多药耐药基因(MDR1和MRP)检测新方法。该方法具有较好的特异性、灵敏度和重现性,能够在1.0×10-14 ~ 1.0×10-12 M和5.0×10-14 ~ 5.0×10-12 M范围内,分别实现对AML 相关多药耐药基因序列MDR1和MRP的定量检测。该方法有望为预测肿瘤治疗效果和临床制定治疗方案提供参考依据。     

急性髓细胞性白血病生物学特性及实验分型方法的临床意义

[目的]利用患者骨髓涂片进行显微镜观察分析、细胞化学染色及免疫学方法以应用于对急性髓细胞性白血病的鉴别及分型。[方法]在对骨髓涂片中观察增生异常的病态细胞的基础上，采用一系列细胞染色方法(POX、NAE、NCE、PAS、AKP积分等)帮助鉴别急性髓细胞性白血病。[结果]在急性髓细胞性白血病FAB分型中M1—M7骨髓象，细胞化学染色结果及染色体检查异常现象均有本质的区别。[结论]骨髓象分析，细胞化学染色及免疫表型分析是诊断急性髓细胞性白血病非常有效的依据。关键词：急性髓细胞性白血病、骨髓象、细胞化学染色、免疫学检查     

Abd-Bcr/Abl原核表达载体的构建和表达

构建Bcr/Abl-Abd原核表达载体,并表达、观察对白血病细胞K562的影响.以慢性白血病PGD210质粒为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增出Abd编码区序列,克隆入pMD18t载体,经酶切测序鉴定正确.再通过酶切重组克隆入原核表达载体pET32a,构建pET32a-Abd重组表达质粒,经酶切、测序鉴定,序列、读码框均正确.通过转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化.结果PCR扩增出特异性的501bp的目的片断,以此构建的重组质粒pET32a-Abd能够在上清中表达约36.6 kd的目的蛋白,Westem blot鉴定为特异表达.证明成功构建了原核表达载体pE732a-Abd,并表达在上清中,表达蛋白约占菌体总蛋白的6%,纯化后达到74.3%,Westem blot检测为特异性表达,为进一步研究该蛋白对慢性白血病细胞的作用奠定了分子基础.     

还原型谷胱甘肽对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及其可能的作用机制。方法:采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为假手术组(SO)、缺血模型组(IR)和还原型谷胱甘肽治疗组(RG),缺血2h再灌注24h后,评价神经功能状态,测定脑梗塞体积及脑组织病理学变化,用紫外分光光度计检测脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。结果:与SO组相比较,IR组和RG组的GSH-PX和SOD活性降低,而MDA含量升高。GSH可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍,减少脑梗死体积(P<0.05);可以降低脑组织MDA含量,提高脑组织GSH-PX、SOD活力(P<0.05)。结论:GSH对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,这可能与其抑制氧自由基生成,减少脂质过氧化有关。     

磁场和Cu2+对蚕豆幼根生长、细胞分裂和过氧化物酶同工酶谱的影响

研究蚕豆种子经过磁场处理后,在不同的Cu~（2 ）浓度下对根的生长、细胞分裂及过氧化物酶同工酶的影响.实验结果表明,蚕豆种子在一定Cu~（2 ）浓度条件下,较无磁场处理的种子根生长速度快,有丝分裂指数较高,同工酶的活性也高,但伴随着Cu~（2 ）浓度的再增高时,这种现象逐渐消失.     

白腐真菌对邻苯二甲酸二甲酯的降解与机理研究

文章以黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)作为白腐真菌的代表,研究其对邻苯二甲酸二甲酯(dimethyl phthalate, DMP)的降解效果与机理。实验结果表明,在最佳条件(pH=5.6,温度为30℃,DMP初始质量浓度为10 mg/L)下,7 d后DMP的去除率为75%。进一步优化反应条件发现：体系中初始葡萄糖质量浓度为5 g/L时,反应结束时DMP降解效率为95%;当反应中加入20μg/L H₂O₂或27.0 mg/L Mn²⁺,反应7 d后DMP的降解效率显著提升到100%。此外,过氧化物酶在DMP降解过程中起重要作用,实验证明DMP的降解更多地由锰过氧化物酶(manganese peroxidase, MnP)驱动;傅里叶红外光谱证实氨基、羧基、羟基等还原性官能团参与了DMP的去除。文中通过液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)联用仪确定DMP的降解产物,并讨论3种可能的降解途径。     

苹果果实大小与膜透性、过氧化物酶活性及丙二醛含量关系的研究

本文分析了苹果果实后熟衰老期间膜透性、过氧化物酶活性及丙二醛含量。结果表明,苹果果实大小不影响其过氧化物酶活性高低,但大果具有较大的过氧化物酶活性变化幅度,中等果具有较低小的过氧化物酶变化幅度。大果比中等果具有较高的膜透性与丙二醛含量。     

采油及炼油厂废水的可生化性研究

采用BOD5/CODCr法和瓦勃呼吸仪分别对炼油废水、聚合物驱采油废水和高含盐采油废水的可生化性进行了分析评价.结果表明:炼油废水和聚合物驱采油废水具有可生化性,而高含盐采油废水可生化性极差.在两种评价方法中,BOD5/CODCr法方法简单,易于操作,但可靠性差;瓦勃呼吸仪法通过测定微生物的呼吸曲线,能更加准确地反映废水的可生化性,为废水能否采用生物处理提供了一定的实验依据.     

甲醛对运动大鼠脑组织的氧化损伤及刺五加保护作用的实验研究

目的：通过实验观察甲醛对运动大鼠脑组织抗氧化系统的影响及服用刺五加后的情况,探讨甲醛对运动大鼠的神经毒性及刺五加的保护作用.方法：采用人为模拟不同程度甲醛染毒环境进行动式染毒,甲醛剂量分别为0.8mg/m3,2.4mg/m3.每天染毒30min,每周6次,连续4周,刺五加的灌胃剂量为104.17mg/kg,测定运动大鼠脑组织的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）的活力和丙二醛（MDA）的含量.结果：染毒组与对照组相比,2.4mg/m3剂量染毒组大鼠脑组织CAT、GSH-PX、SOD活性明显低于对照组（P＜0.01）,MDA含量明显高于对照组（P＜0.01）.服药染毒运动组与染毒运动组相比,0.8mg/m3剂量染毒服药组大鼠脑组织CAT、GSH-PX、SOD活性明显高于染毒运动组（P＜0.01）,MDA含量明显低于染毒运动组（P＜0.01）.结论：甲醛可以降低染毒大鼠脑组织抗氧化酶的活性,造成脑组织氧化性损伤,而灌服中药刺五加可以有效缓解其毒性.     

CMC-g-PAA/AM/ATP水凝胶对水体中Cd(Ⅱ)的吸附性能及机理研究

在凹凸棒黏土(ATP)的存在下,以羧甲基纤维素(CMC)为主链,过硫酸铵(APS)作为引发剂,以N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)作交联剂,与丙烯酸(AA)和丙烯酰胺(AM)进行接枝共聚,合成羧甲基纤维素-接枝-聚丙烯酸/丙烯酰胺/凹凸棒黏土(CMC-g-PAA/AM/ATP)复合水凝胶。采用该种材料吸附去除水体中的Cd(Ⅱ),考察溶液初始p H、金属离子浓度、反应时间、反应温度、吸附剂投加量等因素对吸附反应的影响,并借助傅里叶转换红外光谱(FT-IR)和X射线光电子能谱(XPS)探究吸附机理。结果表明,初始p H范围在4.0~8.0内吸附效果佳,吸附反应在40分钟内达到平衡,整个吸附过程更符合准二级动力学模型,吸附过程中放热。CMC-g-PAA/AM/ATP可以快速、有效地去除水溶液中的Cd(Ⅱ),吸附机理包括静电作用、络合作用和离子交换作用。     

联合检测血清中CYFRA21-1、NSE对肺癌诊断和预后的意义

目的 :评价肿瘤标记物CYFRA2 1- 1、NSE对肺癌诊断和预测预后的价值。方法 :将肺癌患者分为非小细胞性肺癌组 (NSCLC)和小细胞性肺癌组 (SCLC) ,良性疾病患者为对照组。采静脉血 ,按RIA方法检测CYFRA2 1- 1、NSE。采用STATA统计软件进行结果分析。结果 :CYFRA2 1- 1水平在NSCLC中明显高于SCLC和良性疾病患者 ,分别为 15 .45± 4.0 1、6.14± 3 .88、1.86± 0 .89。NSE则在SCLC中显著高于NSCLC和良性疾病组 ,分别为 3 .90± 1.47、2 .65± 1.47、2 .16± 0 .74。CYFRA2 1- 1、NSE联合检测与各单项指标相比 ,正确率增高 (P <0 .0 1) ,而且NSE是提示SCLC预后的有价值的指标 ,CYFRA2 1- 1则是提示NSCLC预后的有价值的指标。结论 :联合检测血清中CYFRA2 1- 1、NSE的含量诊断肺癌的阳性率最高 ,准确性达 87.41% ,同时显示 ,NSE、CYFRA2 1- 1分别是提示SCLC、NSCLC预后的有价值的独立指标 ,在临床上有重要的应用价值     

GW1929对小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞的形成及MMP-2、MMP-9分泌的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂(GW1929)对小鼠腹腔巨噬细胞源泡沫细胞的形成及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)分泌的影响.方法:氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)(50μg/mL),过氧化酶体增殖物激活受体γ激动剂1929(GW1929)(20 μmol/L)作用于小鼠腹腔巨噬细胞24 h后,油红O染色观察各组泡沫细胞的形成.并用ELISA法测定各组培养液上清中MMP-2、MMP-9的浓度.结果:对照组及GW1929组细胞几乎未被油红O染色,oxLDL组大量细胞胞质被油红O染成暗红色,而oxLDL+GW1929组细胞胞质染色明显浅于oxLDL组细胞.oxLDL组MMP-9的浓度明显高于对照组及GW1929组(P<0.05).而oxLDL+GW1929组MMP-9的浓度明显低于oxLDL组(P<0.05).而各组间MMP-2的浓度并没有差别(P>0.05).结论:GW1929可能具有稳定粥样斑块的作用,其机制可能与其抑制泡沫细胞的形成及MMP-9的生成有关.     

Se~(4+)浸种对玉米幼苗生长及吸收Cu、Zn、Fe、Mn的初步研究

采用亚硒酸钠对玉米进行浸种处理,研究硒对玉米幼苗生长及Ｃｕ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｎ吸收积累的影响。盆栽试验结果表明,在所试验的质量浓度条件下,硒对玉米幼苗的生长表现抑制作用,使茎叶和根系干物质产量下降,根系对Ｃｕ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｎ的吸收能力降低,同时使幼苗茎叶中Ｃｕ、Ｆｅ元素含量下降,Ｚｎ、Ｍｎ元素含量增加。研究提出,硒抑制玉米幼苗生长是其影响根系对养分吸收及离子代谢平衡所致。     

人白细胞介素32的真核表达、纯化及生物学活性鉴定

摘要:目的：构建人白细胞介素32（IL-32）和IgG4基因Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DG44）克隆,并检测重组蛋白的表达及相应的生物学功能.方法：采用聚合酶链反应(PCR)从LPS激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32基因,并克隆到构建IL-32融合基因的真核表达载体 IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC.经脂质体法转染CHO/DG44 细胞, 通过RT-PCR检测,筛选出实验组细胞,并对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤（MTX）加压筛选,利用ProteinG-Agarose亲和纯化培养上清中表达的融合蛋白,并通过SDS-PAGE、免疫印迹鉴定检测目的蛋白的表达,最后以 HeLa细胞为靶细胞测定重组蛋白的生物学活性.结果：构建了一个IL-32融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC;筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆; 亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在SDS-PAGE电泳后与预期分子质量大小相符,能够与羊抗人IgG-HRP 抗体特异结合,并能促进HeLa细胞的死亡.结论：成功构建了人IL-32融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc) 融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆.