牛胚胎体外生产技术的应用研究

利用屠宰牛卵巢抽出的卵母细胞，以卵裂率和囊胚发育为标准，对牛胚胎体外生产过程进行了简化试验，结果显示：不加卵丘细胞的高密度卵母细胞体外成熟（１００－２００枚／平皿）可代替加卵丘细胞标准密度培养，其卵裂率和囊胚发育率没有显著变化，体外授精时间可从成熟培养后２２小时延长至２７小时，卵裂率和囊胚发育率均没有显著变化。卵母细胞体外成熟后可以不经洗涤直接移入受精滴，原成熟培养皿内残留孵丘细胞再培养４８小时形     

牛细胞核移植试验初报

体外成熟培养（ＩＶＭ）２３－２４ｈ的牛卵母细胞，去核后用８０Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激活２次（Ｉ组）或不激活（Ⅱ组），然后注入８－３２细胞期体外受精（ＩＶＦ）牛胚胎的卵裂球，再用８０－１００Ｖ／ｍｍ，４０μｓ电激两次诱导卵母细胞与卵裂球融合，两组的融合率（６２．８％与６５．１％）和卵裂率（５５．４％与５１．９％）无显著差异（Ｐ〉０．０５）。全部４１２枚重组卵电激后的融合率是６３．８％（２６３／４１２）     

冷冻保存2年的体外受精胚胎移植产犊报道

１４０枚利用完全体外化培养技术生产、经常规方法进行冷冻保存两年后的良种肉牛胚胎，通过非手术法移植到７０头本地母牛，每头受体牛移入２枚胚胎以繁殖纯种后代。结果受体母牛２个情期不返情率为５０％（３５／７０）；１２０ｄ后经直肠检查确诊怀孕率为２７．１％（１９／７０）；９头受体母牛足月产下犊牛１０头，产犊率为１２．９％（９／７０），双胎率为１１．１％（１／９）。受体母牛平均妊娠期为２８０．８天（２６６￣２     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

体外受精——胚胎移植在不孕症治疗中的应用

对 6 0例不孕症患者采用GnRH -a FSH HCG超促排卵方案治疗 ,应用HTF培养基培养胚胎。采样 6 0个取卵周期 ,5 8个周期进行胚胎移植。移植周期妊娠率达34.5 %。从临床效果可见 ,体外受精—胚胎移植是解决输卵管因素不孕最直接的方法     

完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，     

漫长而艰辛的“试管婴儿”之路——2010年度诺贝尔生理学或医学奖成果简介

 “试管婴儿之父”罗伯特·爱德华兹（Robert G. Edwards）获得2010年度诺贝尔生理学或医学奖,以表彰他在体外受精（IVF）技术方面的杰出贡献。早在20世纪50年代,爱德华兹便提出通过体外受精治疗人类不育的设想：即从女性卵巢内取出卵子,与精子在细胞培养皿中完成受精,然后再移植回母体子宫内发育。他们经过漫长而艰辛的努力实现了这一目标,1978年世界第一例“试管婴儿”出生。这项技术给全世界大约10%的不育症夫妇带来希望。一门新的医学领域（辅助生殖技术）由此诞生,开启现代医学的新世界。     

人输卯管组织与小鼠胚胎共培养的初步观察

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响,将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养,或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养。培养液为Ham's F10+10％FCS,并以其作为对照培养液。实验结果显示:无论是组织共培养或是条件培养液共培养,胚胎体外发育达囊胚率,胚胎逸出透明带率及胚胎的发育速度都较F10对照组高。其中输卵管壶腹部组织共培养及其条件培养液共培养对胚胎发育的促进作用较峡部大,而且其条件培养液共培养是以组织培养一周内所得的条件培养液效果最好。组织共培养和条件培养液共培养发育的胚胎正常分裂,没有差别,形态也均正常。实验提示人类输卵管上皮可能分泌某种因子能促进胚胎发育。     

生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究探讨了在成熟培养液和发育培养液内添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α对牛体外受精卵发育的影响，在成熟培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，经体外受精处理后卵裂率分别为７８．３％和８２．６％，显著高于对照组６０．２％的卵裂率；三个处理组囊胚发育率分别为１９．６％、２４．５％和１８．７％，三者间无显著差异．在发育培养液内分别添加ＥＧＦ和ＴＧＦ－α，其囊胚发育率分别为３０．０％和２３．４％，与对照组２１．０％的囊胚发育率相比差异不显著．在成熟培养液内添加ＴＧＦ－α，在发育培养液内添加ＥＧＦ，经这两种生长因子分别作用后，体外受精卵翼胚发育率为２１．０％，与单独使用其中一种生长因子相比囊胚发育率无明显提高．     

供卵与激素替代治疗卵巢早衰妊娠成功（附2例报告）

报道了２ 例卵巢功能早衰患者采用供卵与激素替代治疗,通过体外受精－ 胚胎移植成功地获得妊娠,并分娩存活新生儿３ 名．文中对卵巢早衰的诊治和受卵成功因素进行了讨论     

小鼠孤雌生殖的胚胎干细胞的初步研究

比较去透明带孤雌桑葚胚和留透明带孤雌囊胚、体内受精胚胎、体外受精胚胎在饲养层上囊胚的扩张率、岵壁生长率．结果表明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚的扩张率显著（p〈0．05）提高,而贴壁率则极其显著地（p〈0．01）提高,此外前者还发生增殖．但孤雌胚胎的囊胚扩张率、贴壁率和增殖率均极其显著地（p〈0．01）低于体内受精胚胎和体外受精组;体内受精胚胎的体外发育最佳．说明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚更利于在饲养层上贴壁生长,为建立孤雌生殖的胚胎干细胞系提供了基础．     

克服昆明小鼠早胚2-细胞阻滞的研究

目的：评价两种培养液对昆明小鼠胚胎２－细胞阻滞的克服效果。方法：用添加１５％ＦＣＳ或ＢＳＡ的Ｍ１６和ＣＺＢ培养液培养昆明小鼠２－细胞胚胎和体外受精卵,以观察这两种培养液对昆明小鼠早胚发育的影响及在克服昆明小鼠２－细胞阻滞中的作用,并通过ＣＺＢ培养液中葡萄糖成份的增减,了解其作用及效应的时间。结果：添加ＦＣＳ的Ｍ１６和ＣＺＢ培养注均能较好地支持２－细胞胚胎发育到囊胚（７８．９％,７２．７％）,当进行     

银杏成熟胚的离体培养研究

用银杏成熟胚为材料,在含不同激素或添加物的培养基上进行萌发出苗培养,结果表明：以６,７－Ｖ＋活性炭１．０ｇ／Ｌ＋水解乳蛋白１．０ｇ／Ｌ＋抗坏血酸１００ｍｇ／Ｌ为最适宜培养基;光照培养比黑暗培养好,培养基中添加０．１ｍ,ｇ／Ｌ的ＮＡＡ能有效地促进萌动胚的胚根伸长和发育成苗;植物激素６－ＢＡ不适合成熟胚的萌发,当其浓度为０．１－１．０ｍｇ／Ｌ时会抑制胚根生长并致胚芽发育畸形。     

猪卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰场收集卵巢,用注射器从卵泡中吸出卵丘－卵母细胞复合体,对猪卵母细胞体外成熟的条件进行研究,根据卵母细胞体外成熟时的核成熟率、胞质成熟及体外受精时精子的穿卵速度,合适的体外成熟培养时间为４２～４５ｈ．卵母细胞周围卵丘细胞的多少及其排列紧密状态与卵母细胞的体外成熟率密切相关。卵泡大小与卵母细胞的体外成熟率有关,大卵泡卵优于小卵泡卵。ＰＭＳＧ促进猪卵母细胞体外成熟。     

Cloned pigs derived from somatic cell nuclear transfer embryos cultured in vitro at low oxygen tension

Great progress have been made in animal cloning in China, as evidenced by the live births of cloned cat- tle[1,2], goats[3,4], and sheep[5]. In contrast, pig cloning is still in its infancy though limited fundamental studieshave been conducted[6]. It is g…