P转位子诱变的果蝇心脏发育基因的突变（Ⅰ）

果蝇和脊椎动物的心脏早期发育具有平行的基因控制机理，果蝇是替代人体心脏进行基因功能研究的理想模式，利用Ｐ转位子作为诱变工具，诱发果蝇第二染色体基因突变，筛选与心脏发育有关的基因，初步结果表明，有３个第二染色体隐性致死突变基因在心脏组织有ｌａｃＺ表达，并且观察到有心脏前体细胞的突变表型，这预示在这３个致死系中，Ｐ转位子可能插入到与心脏发育有关的基因中或这些基因的附近，这３个致死系是值得进一步研究的候     

单只不育果蝇未知基因的反向PCR

根据ｐ转位子诱变和ｐｏｘｎ基因双杂合子法检测化学感受器数目的变化,筛选到一系列突变个体,其中一个雄蝇腿部表现出不能形成化学感受器的突变表型;遗憾的是该只雄蝇是不良的,为了克隆该基因,研究出一种微量ＤＮＡ反向ＰＣＲ法,该法可用０．５只果蝇扩增出Ｐ转位子插入点相邻的基因组片断,方法简便可靠。     

一个与果蝇心脏基因同源的人类新基因--WNT-17基因的研究初报

利用果蝇心脏发育基因Ｗｇ的ｃＤＮＡ序列,运用计算机克隆方法,发现了一个新的人类同源基因,命名为ＷＮＴ－１７,该基因总长度为１０ｋｂ,有４个外显子和３个内含子,定位于染色体１ｐ３５．１￣１ｐ３６．２３之间。其ｍＲＮＡ全长约２ｋｂ,编码一个２９６个氨基酸的蛋白质,与小鼠Ｗｎｔ－４编码的蛋白质高度相似,该基因与Ｗｎｔ基因家族成员具有相似的同源框序列。     

建立果蝇心脏发育候选基因CG3295的基因敲除系

果蝇CG3295基因是哺乳动物基因RMND5在果蝇中的同源物,其功能未知.利用P转座子敲除技术进行果蝇CG3295基因的敲除研究,将果蝇14234系的P转座子与△2-3系中的转座酶基因组合到同一个体,使P转座子在体内敲掉目的基因.从后代挑选不含P转座子和转座酶基因的500头雄蝇分别与缺失了CG3295基因的测交系交配,从后代筛选获得20个CG3295基因敲除候选系.进一步利用Hand-GFP系使候选系的心脏表达绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下根据候选系是否表现心脏突变表型鉴定敲除系,最后获得了12个表现心脏突变表型的CG3295基因敲除系.     

Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

Pericardin 基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin 基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropyl β-D-thiogal actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot 检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin 多克隆抗体,为Pericardin 功能的进一步研究奠定了基础.     

人类新型锌指蛋白ANKZF1对AP-1信号途径抑制作用的研究

心脏发育是一个非常复杂的过程,受一系列基因的精确调控.研究表明,许多锌指蛋白参与心脏的形成和疾病的发生.为了鉴定新的与心脏发育有关的人类锌指基因,应用同源基因克隆法,通过PCR技术扩增获得了一个新的人类基因,其cDNA全长2 594 bp,编码由726个氨基酸残基组成的蛋白(相对分子质量约为80.9 kD).经国际人类基因命名委员会批准,被命名为ANKZF1.该基因是哺乳动物物种特有基因.RT-PCR分析表明,该基因在胚胎的心脏、胃、肾和脑组织中有特异性的表达,提示该基因可能与心脏等组织的发育有关.此外,通过报告基因分析发现,该基因对AP-1信号途径的转录活性有抑制作用.亚细胞定位分析表明该蛋白定位在细胞之中.     

人类心脏特异表达基因pygo1的克隆与功能研究

心血管疾病已经成为危害人类健康和生命的头号杀手．研究发现,各种心血管疾病与心脏心律失常和心力衰竭有关．wg信号途径直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程．pygo基因是近几年在果蝇市新鉴定的一个参与wg信号途径的基因,但pygo是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知．利用RT-PCR的方法,克隆出人类pygo1基因的全长．该基因位于15q21．1,蛋白342～396区域包含一个PHD结构域．亚细胞定位分析表明,pygo1蛋白分布在细胞核中．利用心力衰竭果蝇模型,通过电场对正常和突变基因的成蝇瞬间中断其心脏功能,记录果蝇心衰率的表现,研究pygo的功能．结果表明,果蝇pygo基因突变杂合子的心脏停止跳动和心脏纤维性颤动的比例达32．3％,比对照的高15．6％,表明pygo与心力衰竭的发生有关．     

果蝇Nrt基因的一个人同源异型基因NLGN-4的研究初报

运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因，经国际人类基因命名委员会批准命名为NLGN－4（Neuroligin4）。该基因位于X染色体，有一个含有TATA框的典型启动子序列，mRNA全长约5．6kb,3‘末端含有ATAAA的加尾信号，编码一段长816个氨基酸的蛋白质，相似于其家族成员的NLGN－3基因产物，其神经系统（主要是大脑）的EST数目占正常组织EST总数的45%,表明它在大脑和其他神经组织中有高度表达，可能与大脑的功能有关，这与其家族成员的功能相一致。而它在胎儿心脏中也有较多表达（占正常组织的20％），提示该基因可能与心脏发育有关。     

人类新基因RHBDL8的研究初报

运用计算机克隆的方法获得了一个新的人同源基因，经国际基因命名委员会批准命名为Rhomboid，veinlet-like8(RHBDL8)．该基因位于7号染色体q11．23区域，mRNA全长约1．8kb，3’末端含有ATAAA的加尾信号，编码一段长434个氨基酸的蛋白质．该蛋白质含有一个rhomboid保守区，且高度相似于一个未有研究的小鼠蛋白．其表达在胚胎期(23周)主要集中在大脑、心脏、骨骼肌，而在成体，除脑部依然有大量表达外，上述的其他部位表达量均大大降低．这种在发育过程中的表达变化提示我们该基因可能在这些器官的发育中起到了一定的调控作用．     

果蝇nulp1特异性多克隆抗体制备及检测

为了利用果蝇模型研究nulp1蛋白在早期心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出果蝇nulp1基因的部分编码区并插入到pET28a表达载体中.之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)Rosetta( DE3);通过IPTG诱导表达His-nulpl融合蛋白,该融合蛋白采用Ni2+金属螯合层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多...     

果蝇血液标记基因srp原核表达质粒构建及多克隆抗体制备

果蝇基因srp是血液发育的早期标记基因,为了研究果蝇这一模式动物中血液发育的详尽过程,通过提取野生型成体果蝇的总RNA,反转录获得其cDNA文库,设计引物克隆出srp基因,将所得片段插入原核表达载体pET28a中,经酶切和序列鉴定,成功构建重组质粒,并通过IPTG诱导表达出His-srp融合蛋白,经Ni-IDA凝胶柱纯...     

人类心脏特异表达基因pygol的克隆与功能研究

心血管疾病已经成为危害人类健康和生命的头号杀手.研究发现,各种心血管疾病与心脏心律失常和心力衰竭有关.wg信号途径直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程.pygo基因是近几年在果蝇中新鉴定的一个参与wg信号途径的基因,但pygo是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知.利用RT-PCR的方法,克隆出人类pygo1基因的全长.该基因位于15q21.1,蛋白342～396区域包含一个PHD结构域.亚细胞定位分析表明,pygol蛋白分布在细胞核中.利用心力衰竭果蝇模型,通过电场对正常和突变基因的成蝇瞬间中断其心脏功能,记录果蝇心衰率的表现,研究pygo的功能.结果表明,果蝇pygo基因突变杂合子的心脏停止跳动和心脏纤维性颤动的比例达32.3%,比对照的高15.6%,表明Fygo与心力衰竭的发生有关.     

栽培大豆（Glycinemax）花粉母细胞减数分裂染色体的观察

本文观察了栽培大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ）、绥农４号、黑农２６号、黑河３号、东农４号、东农３３号、６２９６—３六个品种的花粉母细胞减数分裂中染色体的行为和形态。观察结果表明：这六个品种均为二倍体，花粉母细胞在减数分裂终变期和中期工观察到２０个二价体，对不同品种栽培大豆染色体的行为进行了比较分析，绘制出了染色体亲和力曲线。测定了绥农４号和６２９６－３两个品种的染色体长度，染色体总长度，绥农４号为４３．８２μ，６２９６－３为４８．１１μ，平均长度绥农４号为２．１９μ，６２９６－３为２．４１μ。     

斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备

loc558117基因是trim45在斑马鱼中的同源基因,小鼠及果蝇研究结果表明该基因与血细胞发育有关.利用PCR技术扩增斑马鱼loc558117基因部分编码区,并将其插入到原核表达载体pET-28a中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pET-28a-loc558117)转入Rosseta感受态细胞,通过IPTG诱导...     

利用中国春小麦Ph突变体为太谷核不育小麦籽粒附加蓝色标记性状的研究

本文研究的目的是对太谷核不育小麦籽粒进行颜色标记,以便进一步利用太谷核不育小麦。以蓝粒小麦4D-4E二体异代换系作为标记性状供体,利用中国春小麦Ph突变体诱导部分同源染色体联会,增加同祖染色体间的交换,使4D染色体上的Tal基因与4E染色体上的蓝胚乳基因连锁,在本实验杂交组合[(Taltal×phph)×蓝粒小麦]×phph~2F_3中得到一个蓝粒高不育穗行,经分析与继代观察,初步认为这一穗行为4E带有蓝胚乳基因的染色体片段转移到4D染色体上使蓝胚乳基因与Tal基因发生不完全连锁。同时对Ph突变体诱导部分同源染色体联会的作用等问题进行了探讨。     

转录因子SIX2研究进展

SIX2是SIX转录因子家族的成员，对多种组织的发育具有重要的作用．近年来的研究发现，SIX2在肾脏早期发育中调节细胞的增殖和凋亡，保持后肾间充质祖细胞处于未分化状态，从而实现肾脏细胞的自我更新．同时，SIX2在心脏、腭、颅面骨等组织器官发育中也发挥着调节性作用．此外，在肿瘤及癌症研究方面，SIX2被证明在参与肿瘤的形成过程、调控肿瘤细胞干性方面发挥作用．总结了SIX2基因在组织器官发育及相关疾病、癌细胞干性、神经系统发育等方面的最新研究进展，为该基因和家族的深入研究提供了新的思路．     

药物流产早期胎儿的胚胎学观察

以人类药物流产的早期胚胎为材料，根据多项判断胚龄的标准，准确估测其实际胚龄并观察心脏早期胚胎发育过程；在所收集的121个胚胎中，胚胎畸形占18.2％，胚胎早期致死占33.9％，其与遗传物质的突变及环境中致畸剂的作用有关。     

甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox启动子的克隆及序列分析

甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势.在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的eDNA全长.通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库.根据基因BvM14-MADSbox cDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列.经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CCAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件.该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础.     

人类新基因ZNF322的研究进展

根据计算机克隆的ZNF322基因序列设计引物,从人类胚胎心脏文库中克隆了ZNF322基因.该基因位于染色体6p22.1,编码由402个氨基酸残基组成、含有9个连续排列的C2H2型锌指蛋白质.Northern杂交的结果表明该基因在成人所有被检测组织中表达。亚细胞定位研究证明ZNF322蛋白分布在胞核和胞质中.报告基因分析显示ZNF322是一种潜在的转录激活因子.     

CRISPR/Cas9系统对斑马鱼fhl1a基因敲除有效性的研究

为研究fhl1a基因在心脏发育中的作用,利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼fhl1a基因.在斑马鱼fhl1a基因的三号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体.将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中以期实现对目的靶基因fhl1a的敲除.随后收集部分72 h胚胎进行PCR检测和产物直接测序,确定有无突变.为进一步验证突变是否可稳定遗传,选择具有敲除了的F_0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F_1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序分析.结果显示F_1获得了不同程度的插入、缺失等突变类型.研究结果证明所设计的fhl1a基因CRISPR/Cas9敲除系统能在斑马鱼体内有效地形成基因突变,该突变能稳定地遗传到下一代个体,这为进一步研究fhl1a基因在心脏发育中的具体调控机制打下了基础.