低剂量镉对雌性斑马鱼卵子发生的影响

【目的】考察低剂量镉(Cd)暴露对斑马鱼(Danio rerio)雌鱼卵子发生的影响。【方法】将成年雌性斑马鱼分为两组,分别于不添加Cd2+(对照组)和Cd2+质量浓度为5μg·L-1(实验组)的水体中处理30d,而后取实验鱼卵巢进行组织学分析,并检测雌二醇(E2)的含量以及下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴和减数分裂中相关基因的表达量。【结果】1)与对照组相比,实验组的卵巢中早期卵母细胞减少而成熟期卵母细胞增多;2)实验组血浆中E2含量与对照组相比有明显下降,且两者差异具有统计学意义(p0.05);3)与对照组相比,实验组HPG轴中gnrh2,gnrh3,fshβ,lhβ,fshr及lhr基因的表达上调,但cyp19a1b和cyp19a1a基因的表达下调;4)实验组与对照组相比,卵巢中减数分裂标记基因dmc1及减数分裂起始相关基因aldh1a2的表达量均具有统计学意义上的上升(p0.05)。【结论】研究所设置的Cd暴露条件能干扰成年雌性斑马鱼卵子发生过程关键调控基因的表达,并影响性激素水平及卵母细胞的正常发育。     

光周期亚急性暴露干扰雄性斑马鱼繁殖行为及对正常雌性的协同干扰

[目的]探究不同光周期亚急性暴露对雄性斑马鱼繁殖行为的损害及对正常配对雌鱼繁殖行为的干扰效应.[方法]设置12 h光照:12 h黑暗(对照)、6 h光照:18 h黑暗(短光周期)和18 h光照:6 h黑暗(长光周期)共3种不同的光周期,连续暴露处理雄性斑马鱼成鱼7 d,在处理结束后将雄鱼与未进行上述暴露处理的雌鱼配对繁...     

不同光周期急性暴露对雄性斑马鱼攻击、焦虑和恐惧行为的干扰效应

【目的】研究了不同光周期急性暴露对雄性斑马鱼(Danio rerio)攻击、焦虑和恐惧行为的影响。【方法】设置对照组(正常光周期)、短光周期组和长光周期组,连续暴露雄性斑马鱼成鱼3 d,在暴露结束后统计斑马鱼的各种行为参数。【结果】1) 与对照组相比,短光周期组斑马鱼的近镜频次和撞镜频次明显低于对照组,差异具有统计学意义(p<0.05);2) 不同光周期组中斑马鱼焦虑行为指标无统计学意义上的差异;3) 短光周期组在斑马鱼皮肤匀浆液暴露后浮到上层的次数明显比对照组的更低,差异具有统计学意义(p<0.05)。【结论】短光周期暴露抑制了斑马鱼的攻击和恐惧反应,将对斑马鱼的种内/种间竞争、繁殖、社交行为、存活等带来不利影响。     

镉对转基因斑马鱼的急性毒性效应

采用转基因斑马鱼T_g(lyz:EGFP)-Lyz fish为模型,探讨了重金属镉对转基因斑马鱼的胚胎毒性和免疫毒性.结果表明,相比空白对照组,0.1μM和1μM CdCl_2对斑马鱼胚胎产生一定的毒性影响,并促进溶菌酶(lysozyme C,lyz)标记的斑马鱼体内的中性粒细胞的荧光表达.随着CdCl_2浓度的增加,24 h血流障碍、56 h死亡数和56 h孵化抑制等指标均呈现递增趋势;在CdCl_2诱导下的斑马鱼仔鱼体内的中性粒细胞增多并向发生炎症部位分布,主要趋向于肝脏部位聚集.因此,本研究对转基因斑马鱼在环境污染物的免疫毒性检测方面有着重要意义.     

内分泌扰乱化学物质对斑马鱼生长发育影响研究进展

随着内分泌扰乱化学物质研究的逐渐深入,人们越来越关心其对脊椎动物生长发育的影响。斑马鱼具有胚胎透明、性成熟周期短、繁殖力强等优点,是研究脊椎动物发育生物学的重要模式物种之一,被广泛地应用于内分泌扰乱化学物质的研究。本文综述了内分泌扰乱化学物质对斑马鱼胚胎发育、生长、性别分化、繁殖的影响及其机制,展望了该领域的发展方向。     

汞镉联合暴露对斑马鱼性腺组织学和抗氧化酶基因表达的影响

【目的】评估水体中汞镉联合暴露对斑马鱼性腺组织学和抗氧化酶基因表达的影响。【方法】设置3个组,对照组中Hg2+ 和Cd2+ 质量浓度均为0,其 余 两 组 中Hg2+ 和Cd2+ 质 量 浓 度 分 别 为5,50μg·L-1 (低 剂 量 联 合 暴 露 组)及15,150μg·L-1(高剂量联合暴露组);以此暴露成年斑马鱼21d,取性腺进行组织学观察及抗氧化酶基因表达分析。【结果】与对照组对应指标相比:1)汞镉联合暴露对雌鱼和雄鱼的体质量、成活率及雌鱼的性腺成熟系数(GSI)无明显影响,但导致雄鱼的GSI明显降低;2)汞镉联合暴露导致卵巢和精巢组织结构出现明显的病理损伤;3)高剂量汞镉联合暴露上调了卵巢中sod1 和gstr 基因的表达水平,但下调了cat1 基因的表达水平;4)高剂量汞镉联合暴露上调了精巢中sod1 和gpxla基因的表达水平,但对cat1 和gstr 基因的表达水平无统计学意义上的影响。【结论】汞镉联合暴露可诱导斑马鱼精巢和卵巢组织学损伤和氧化应激,而抗氧化系统发挥了重要的保护作用。
     

镉对斑马鱼卵巢的毒性效应和子代响应

为探讨重金属镉慢性暴露对斑马鱼卵巢的毒性效应及子代响应,将斑马鱼暴露于0,0.062,0.124,0.248,0.620,1.240 mg/L 6个镉体积质量.暴露21 d后,以脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、卵巢组织超氧化物歧化酶(SOD)水平、过氧化氢酶(CAT)水平为终点评价慢性镉暴露对斑马鱼卵巢的毒性效应;以子代受精率、孵化率和96 h幼鱼体长为终点评价慢性镉暴露下斑马鱼的子代响应.结果表明:MDA含量随镉浓度的增加而显著升高,抗氧化防御体系被抑制.当ρ(Cd)≥0.248 mg/L时,子代的受精率和孵化率显著降低;当ρ(Cd)≥1.240 mg/L时,斑马鱼不育;当ρ(Cd)≥0.620 mg/L时,子代斑马鱼孵化失败.孵化成功后的幼鱼96 h体长随镉浓度的增加而显著降低.     

镉诱导斑马鱼肝脏的组织学损伤和氧化应激

【目的】评估镉暴露对斑马鱼(Daniorerio)肝脏的组织学结构和抗氧化状态的影响。【方法】将成年斑马鱼分为对照组、低剂量暴露组和高剂量暴露组,分别暴露于Cd2+ 质量浓度为0,5和25μg·L-1的水体中30d后,取肝脏进行组织学分析,并检测肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)的活性,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量,以及抗氧化酶基因sod1,cat1 和gstr 的表达水平。【结果】镉暴露导致雌、雄斑马鱼肝细胞空泡化和细胞核固缩。低剂量暴露组雄鱼肝脏中仅MDA含量与对照组雄鱼肝脏中MDA含量相比有统计学意义上的升高(p<0.05);而高剂量暴露组雄鱼肝脏中SOD,CAT和GPX的活性,GSH和MDA含量,以及cat1基因的表达水平均高于对照组雄鱼肝脏中的相应指标,比较结果均具有统计学意义(p<0.05)。低剂量暴露组雌鱼肝脏中的SOD和CAT的活性、MDA含量以及sod1 和cat1 基因表达水平均高于对照组雌鱼肝脏中的相应指标,比较结果具有统计学意义(p<0.05);但高剂量暴露组雌鱼肝脏中的GSH含量和gstr基因表达水平与对照组雌鱼肝脏中的相应指标相比有统计学意义上的下降(p<0.05)。【结论】镉暴露可诱导斑马鱼肝脏的组织学损伤和抗氧化反应,且呈现出性别差异性。
     

环境剂量的多种环境雌激素长期暴露阻断斑马鱼成鱼精子发生

【目的】研究多种环境雌激素长期暴露对斑马鱼精子发生的影响。【方法】联合使用环境剂量的雌二醇(E2)、乙炔基雌二醇(EE2)、己烯雌酚(DES)、4-叔辛基苯酚(4-t-OP)、4-壬基苯酚(4-NP)、双酚 A(BPA)等6种环境雌激素以及单独使用低剂量(5.65ng·L-1)EE2连续暴露斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼60d。【结果】单独使用 EE2暴露处理对斑马鱼性腺成熟度、精巢质量、精子数量和精巢的组织结构均无统计学意义上的影响;而联合使用6种环境雌激素暴露处理则降低了斑马鱼精子数量,与不进行环境雌激素处理的对照组的精子数量相比差异具有统计学意义(p<0.05),并改变了精巢组织结构。单独使用 EE2暴露处理上调了基因20β-hsd 和cyp26a1 的表达;联合使用6种环境雌激素暴露处理则上调了雌激素和孕激素合成相关基因cyp17a1,cyp17a2,cyp19a1a 和20β-hsd 的表达,并明显抑制雄激素合成酶基因cyp11b2的表达。联合使用6种环境雌激素暴露处理还上调了减数分裂起始相关基因aldh1a2 和cyp26a1 和减数分裂标记基因sycp3 的表达,表明这一处理抑制减数分裂起始,并增强减数分裂。【结论】多种环境雌激素的实际雌激素效应可能远强于各种环境雌激素效应的叠加。与单种环境雌激素相比,环境雌激素混合物可能具有更强的生殖风险。
     

IGFs系统对鱼类生殖内分泌调节的影响

类胰岛素生长激素(IGFs)属于古老而多样化的胰岛素基因家族,是一类具有促细胞分裂效应的蛋白类激素,主要功能是促进细胞生长、分化,调节细胞代谢。近年来的研究发现,IGFs还是一类促性腺物质,对动物的生殖功能具有重要调节作用,本文简述IGFs对鱼类生殖内分泌调节的影响。     

环境内分泌干扰物对男(雄)性生殖系统的影响

动物实验和人群流行病学调查表明，环境内分泌干扰物对男(雄)性生殖系统的影响主要包括精子数量和质量、生殖器官发育、睾丸肿瘤以及子代生殖系统造成危害。文章就以上几方面国内外研究的现状进行综述。     

白藜芦醇对CdCl_2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性干预作用及机制的初步研究

为考察天然抗氧化剂白藜芦醇(Res)对Cd Cl2暴露所致斑马鱼胚胎发育毒性的干预作用,并初步探讨其作用机制。采用单独应用Res联合Cd Cl2共同处理受精后2 h(2 hpf)的斑马鱼胚胎,观察至96 hpf胚胎死亡率和孵化率;采用荧光探针DCFH-DA、Mito SOX、JC-1分别检测胚胎总体活性氧、线粒体源ROS水平和胚胎线粒体的膜电势;采用吖啶橙(AO)染色法检测细胞凋亡情况;采用Real-time PCR方法检测胚胎线粒体单链DNA结合蛋白(mt SSBP)、OPA1的表达水平。结果显示,100μmol/L Res持续暴露96 h可明显增加斑马鱼胚胎死亡率(P0.05)。20~100μmol/L Res与20 mg/L Cd Cl2联合暴露较单独Cd Cl2暴露组相比,胚胎死亡率和未孵化率明显增加(P0.01)。100μmol/L Res与20 mg/L Cd Cl2联合处理明显增加了胚胎总体ROS(P0.01)和线粒体内ROS(P0.01)的生成,降低了线粒体的膜电势(P0.05),胚胎细胞凋亡细胞数量明显增加。与Cd Cl2单独暴露组相比,Res联合处理明显下调了mt SSBP和OPA1的m RNA表达水平(P0.01)。由此可知,高浓度Res明显增强Cd Cl2所致的斑马鱼发育毒性,胚胎总体ROS和线粒体源ROS水平升高,线粒体膜电势下降,mt SSBP和OPA1表达下降,表明线粒体损害可能介导了Res对Cd Cl2育毒性的增敏作用。     

环境雌激素联合处理对雄性斑马鱼繁殖行为的影响

为探究环境雌激素(environmental estrogens, EES)联合处理在环境剂量下对雄性斑马鱼(Danio rerio)繁殖行为的影响,设置对照组(水体中无EES)、EE2-low组(水体中含5.55 ng·L^-1乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol, EE2))、EE2-high组(水体中含11.1 ng·L^-1EE2)和EES组(水体中含62.2 ng·L^-1壬基酚、250 ng·L^-1双酚A、4.56 ng·L^-1雌酮、5.53 ng·L^-1雌二醇和39.6 ng·L^-1雌三醇,上述所有EES质量浓度均为环境剂量),对雄性斑马鱼连续进行EES暴露处理60 d,然后引入未经EES暴露处理的雌性斑马鱼与之进行配对繁殖,最后对它们与繁殖行为相关的指标进行比较。结果显示：与对照组相比,EE2-low组雌、雄性斑马鱼单独和同时进入产卵区的时间及追逐频次均无统计学意义上的差异,EES-high组和EES组雌、...     

氨氮胁迫对斑马鱼繁殖行为的影响

【目的】探究氨氮胁迫对斑马鱼(Danio rerio)繁殖行为的影响。【方法】选取健康且规格一致的成年斑马鱼,分别在氨氮质量浓度为0(对照组),5,10和20 mg·L-1的水体中暴露96 h,而后配对并拍摄它们的繁殖行为,统计繁殖行为参数及产卵量。【结果】1) 氨氮质量浓度为20 mg·L-1的处理组中雄鱼对雌鱼的触碰次数减少,与对照组实验鱼的该项指标相比差异具有统计学意义((p<0.05),但所有处理组中斑马鱼的追逐次数没有统计学意义上的差异;2) 所有处理组的雌鱼和雄鱼单独进入产卵区的次数和停留时间均没有统计学意义上的差异;3) 氨氮质量浓度为10和20 mg·L-1的处理组中雌鱼和雄鱼同时进入产卵区的次数减少,与对照组实验鱼的该项指标相比具有统计学意义(p<0.05),但所有处理组中雌鱼和雄鱼同时停留在产卵区的时间没有统计学意义上的差异;4) 与对照组相比其他3个处理组实验鱼的产卵量有轻微下降,但不具有统计学意义上的差异。【结论】氨氮胁迫会抑制斑马鱼的繁殖行为,进而可能导致斑马鱼产卵量降低。     

一种确定斑马鱼胚胎接受的α粒子辐照剂量的方法

为探究斑马鱼胚胎接受α粒子辐照剂量的计算方法,以模式生物斑马鱼为研究对象,使用能量为5.41 MeV的²⁴¹Am为α粒子辐照源对受精后5 h脱绒毛膜的胚胎进行辐照处理,以12 μm厚的聚酯迈拉膜为固体核径迹探测器,利用正交实验筛选迈拉膜化学蚀刻的最优蚀刻条件,用显微镜观测迈拉膜上的粒子径迹数量,并通过计算胚胎相关参数,计算得到5hpf斑马鱼胚胎受到的最大辐照剂量值。结果分析表明,12 μm厚的聚酯迈拉膜化学蚀刻的最佳条件是蚀刻液KOH浓度6 mol/L,温度60 ℃,蚀刻时间3 h,此时粒子径迹轮廓清晰,大小适中。辐照5 min后,斑马鱼胚胎受到的最大剂量为约8.59 mGy,剂量率为约1.7 mGy/min。     

新西兰大耳白兔超排前后生殖内分泌激素变化的研究

使用HMG(尿促性腺激素)+hcG(绒毛膜促性腺激素)对30只新西兰母兔进行超排(超数排卵)处理,于超排前后不同时期采集血清标本,测定FSH(卵泡刺激素),LH(黄体生成素),P(孕激素),E2(雌激素)的浓度.结果显示:FSH水平在超排后96h达高峰水平1 83±1 32ng/mL,是超排前的6倍.LH水平在超排后15h达0 19±0 09ng/mL高峰.P浓度在受孕后逐步升高,在超排后96h,P水平达35 07±16 71ng/mL,是超排前的10倍.E2水平超排后也有升高.结果表明家兔超排后生殖内分泌激素有显著性变化,而受孕后可出现高浓度的孕酮.同时也为通过测定激素水平提供了排卵和受孕的早期诊断依据.