苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白.原子力显微镜观测,发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构;等电点法提取的得率高,不能检测到完整的晶体结构.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1~2倍.将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性,经统计分析,液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1.5~3倍.     

苏云金杆菌发酵监测的初步研究

跟踪检测了苏云金杆菌发酵过程中发酵液pH值、OD595 nm值、非极性物质、可溶性蛋白质含量等的变化，并比较了伴孢晶体不同状态下的OD值。在此基础上进行了探讨，并进一步提出了发酵过程的在线检测方案。     

杀蚊苏云金芽孢杆菌Cry4Aa和Cry4Ba晶体蛋白结构的计算机对比分析

运用生物信息学软件对苏云金芽孢杆菌毒素Cry4Aa和Cry4Ba的基本参数、一级结构、二级结构、三级结构和跨膜区进行了预测比较.它们在一级结构上有较大差异,但二级结构和跨膜区相似,三级结构中各毒素的结构域Ⅱ、Ⅲ之间基本相似,结构域Ⅰ之间差异较大.Cry4蛋白之间的结构相似性和差异性与其作用机理和杀虫特异性有关.为分析杀蚊蛋白作用的分子机制、定点突变及研究高效的Bt生物杀虫剂有效控制蚊虫提供参考.     

苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

免疫抑制因子A (Immune Inhibitor A, InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt 4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt 4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOF MS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前已开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA. InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.     

苏云金芽胞杆菌cry7Ab9基因的克隆与杀虫活性的测定

以辽宁省千山市的22株苏云金芽胞杆菌进行PCR cry型的cry7类基因鉴定,对cry7类基因进行克隆表达及生物活性测定,为cry基因储备奠定基础.菌株QZG121经比对后发现含有cry7Ab基因.克隆该基因全长序列为3 417 bp,编码1 138个氨基酸残基,相对分子质量为130 000,并在Gene Bank中登记,基因登录号为GU936713,由苏云金芽胞杆菌国际命名委员会正式命名为cry7Ab9.通过构建原核表达系统获得cry7Ab9基因表达蛋白,并进行暗黑鳃金龟幼虫杀虫活性的测定,7天校正死亡率10 mg.L-1为11.11%、100 mg.L-1为25.93%;两周校正死亡率10 mg.L-1为33.33%、100 mg.L-1为48.15%,LC50为289.99 mg.L-1.     

一种改进的提取苏云金杆菌质粒DNA的方法

为了建立一种提取苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis)质粒DNA的常规方法,介绍了一种改进的TritonX-100温和裂解法,与碱裂解法和SDS裂解法相比,具有简易、重复性好等优点,对采用该方法提取的质粒DNA进行电泳,取得了较理想的效果,说明这种方法较适用于苏云金杆菌质粒DNA的提取。     

苏云金杆菌4.0718菌株的发酵上清液中超氧化物歧化酶研究

将苏云金杆菌4.0718进行液体发酵培养，从发酵上清液中可以抽提得到SOD。经（NH4）2SO4分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和HPLC3步纯化得到均五性SOD，其比活力达1040U/mg。经检测该酶属Fe-SOD，分子量为39486D，由2个相同亚基组成，其N-末端氨基酸为丙氨酸，讨论了发酵上清液中SOD与晶体蛋白杀虫毒力的关系。     

高产超氧化物歧化酶芽孢杆菌C328菌株产酶培养基的研究

研究了芽孢杆菌(Bacillus cereus)C328 SOD(Superoxide dismutase)生产菌株在发酵培养过程中培养基种类、碳氮比以及补充碳氮源对产酶的影响．结果表明，C328菌株发酵产酶率与培养基种类、复配碳氮比有密切关系,培养基浓度为10％时，对菌株生长及产酶有明显的促进作用，超过13％则抑制SOD酶产生．筛选出最佳产酶发酵农副产品培养基和优化配比组合产酶培养基。