双菌株发酵生产苏云金杆菌生物杀虫剂的研究

本文研究了苏云金杆菌双菌发酵生产生物杀虫剂的菌种和配方。大田实验表明，双菌株生物杀 虫剂对棉铃虫的杀虫率高达９２％。     

苏云金杆菌SD—5菌株晶体蛋白的研究

研究了ＳＤ－５菌株伴孢晶体结构多钛组成和抗原特性，分析了氨基酸组成并进行了糖蛋白的检测，结果表明：ＳＤ－５晶体蛋白主含Ｍｗ１３５０００、Ｍｗ６５０００两条多肽，另见有一Ｍｗ２４００００的弱带，不同方法处理的样品，电泳图谱有一定差异；ＳＤ－５晶体蛋白抗血清与其晶体抗原形成两条沉淀线，而与７２１６、ＨＤ－１形成一条沉淀线。     

苏云金芽孢杆菌cyt1Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究

将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。     

苏云金杆菌SD－5菌株晶体蛋白的研究

研究了ＳＤ－５菌株伴孢晶体结构多肽组成和抗原特性，分析了氨基酸组成并进行了糖蛋白的检测．结果表明：ＳＤ－５晶体蛋白主含Ｍｗ１３５０００、Ｍｗ６５０００两条多肽，另见有－Ｍｗ２４００００的弱带，不同方法处理的样品，电泳图谱有一定差异；ＳＤ－５晶体蛋白抗血清与其晶体抗原形成两条沉淀线，而与７２１６、ＨＤ－１形成一条沉淀线；ＳＤ－５晶体蛋白由１８种氨基酸组成，不含糖蛋白成分．     

苏云金杆菌H3-111菌株对刺蛾的毒效

苏云金杆菌H3-111菌株摇瓶培养液，室内测定48h对刺蛾幼虫毒力回归方程为Y=4.2900 1.9898x,y=0.9452，与标准品比较其生物效价为3300.621U.mg^-1；大田测试表明BtH3-111菌株防治刺蛾高峰期在药后72h-96h，稀释500-1000倍的防效达85.71%-89.10%，略高于DDVP。     

苏云金杆菌发酵培养基的研究

采用正交实验法研究了不同培养基对 Bt- HD1产毒能力的影响。优选出的培养基为 :发酵液芽孢数达 5.1× 1 0 9· m L-1,2 %发酵液 2 4 h致死 3龄小菜蛾幼虫 65% ,48h 达 89% ,72 h达1 0 0 %。普通培养基对应值分别为 6.0× 1 0 8· m L-1和 35% ,83% ,1 0 0 %。优选出培养基最佳碳氮比( C/N)为 2 .0 ,最佳含固量为 8%     

苏云金杆菌诱变筛选及杀虫效果的研究

苏云金杆菌经紫外线，硫酸二乙酯、亚硝基胍、快中子处理后，菌落小，芽孢数增加，生长周期增长，毒力增强，杀虫效果明显，在生产上有一定应用价值。     

苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis LSZ9408菌株发酵特性的研究

本文研究了苏云金芽孢杆菌 LSZ94 0 8菌株的发酵特性 ,2 4 h菌体浓度达最大 ,2 8- 40 h菌体浓度稳定 ,4 0 h后菌体浓度下降 ,发酵液 p H值先降后升 ,最高达 p H7.8,2 0 h达到碳氮源利用高峰 ,2 8h后氮含量回升 ,糖含量基本不变。     

Vc二步发酵伴生菌苏云金芽孢杆菌的选育

苏云金芽孢杆菌经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)及两者的复合诱变,获得1株高效伴生菌株UN-366.在pH 6.5~6.8的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌混合发酵,UN-366的平均糖酸转化率提高了6.32%,古龙酸的质量浓度达到了83.7 g/L,经连续5代转接发酵实验,性状稳定.     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

苏芸金杆菌代谢特性研究

采用12L玻璃发酵罐,测定了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis, B. t)发酵过程中的菌体浓度、总糖、还原糖、氨基氮、溶磷、溶氧、铵离子、核酸、ATP、pH、蛋白酶及粘度等参数。获得了B.t生长过程的代谢曲线,从中分析了各参数变化间的相互关系。这对于控制B.t发酵过程及提高发酵水平具有一定指导意义。     

对烟草粉螟高毒力Bt菌的伴孢晶体研究

采用液体双向分离法提纯对烟草粉螟高毒力苏云金杆菌B t33,B t53,B tHB伴孢晶体,其纯度分别达99.93%,99.9%,99.8%.扫描电镜和透射电镜观察发现,不同菌株的晶体形状和数量组成各不相同.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAFE)发现3个菌株的电泳图谱不同,烟草粉螟二龄幼虫室内生物毒力测定,9天后B t33,B t53菌株100,300倍防治效果超过80%,B tHB菌株100,300,600倍对烟草粉螟二龄幼虫防治效果超过80%.     

一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性，采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌，对分离菌株的个体形态，生理生化特点进行了分类研究，确定该菌株即为苏云金杆菌，采用改进的培养基培养伴胞晶体，证明该培养基可在48h内产生大量的伴胞晶体。     

透明颤菌血红蛋白基因在苏云金杆菌中的表达

采用大肠杆菌与枯草杆菌的穿梭质粒pMK4作为载体,构建了含有果聚糖酶基因(sacB)启动子和vgb基因的重组质粒pMK-SV.通过原生质体和电转化,将pMK-SV转入苏云金杆菌中,经影印筛选得到转化子Bt4.对Bt4诱导表达,与原菌株相比Bt4的生长量增加了20.2%.     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在毕赤酵母中的分泌表达

根据GenBank中aiiA基因设计引物,以苏云金芽孢杆菌基因组为模板扩增出aiiA基因后构建出pPIC9K-aiiA重组表达载体,线性化后转化毕赤酵母GS115,获得重组工程菌GS115/pPIC9K-aiiA,以体积分数为1%的甲醇进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blotting分析显示表达的蛋白具有较好的免疫特异性.抗病性实验显示表达的目的蛋白具有生物学活性和良好的抗病能力.     

苏云金芽孢杆菌噬菌体在电镜下的形态学研究

借用电子显微镜，对分离得到的８株苏云金芽孢杆菌噬菌体进行了形态学研究．发现这８株噬菌体的形态初步可分为５类，它们是“椭头长尾”型、“２０面体头长尾”型、“绣球状头长尾”型、“椭头短尾”型和“２０面体头钢尾”型．其中“绣球状头”型形态是不多见的一类结构，而“椭头短尾”型中尾部的穗状形态尚未见有报道     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因的克隆与结构分析

分别克隆了叶片、苔藓和土壤中分离的Bacillus thuringiensis的aiiA基因,并对其编码的蛋白AiiA-P28、AiiA-B19和AiiA-S2进行了理化特征分析、进化树分析和空间结构的研究.结果表明AiiA-P28、 AiiA-B19和AiiA-S2分子质量均为28 ku ;等电点分别为4.77、4.77、4.93;三者均为亲水性蛋白,具有很高的同源性.进化树分析结果表明叶片中分离的AiiA-P28与苔藓中分离的AiiA-B19进化距离较近, 而土壤中分离的AiiA-S2则与它们的进化距离较远.三维结构分析表明,AiiA蛋白具有典型的αβ/βα折叠的空间结构.     

苏云金芽孢杆菌MS7培养条件的优化

通过单因子试验对苏云金芽孢杆菌MS7菌株的培养条件进行优化．研究表明,该菌株的最佳培养基组成和发酵条件为：蔗糖10．0g／L、牛肉膏10．0g／L、K2HPO42．0g／L,初始发酵pH7．0,装液量25mL,培养温度35℃,培养时间36h,优化后细菌总数可达1．2×10^8CFU／mL．