四倍体鱼促性腺激素α亚基cDNA的克隆与序列分析

从四倍体鱼脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增并克隆了四倍体鱼GTH-α亚基4种不同的cD-NA,分别命名为GTH-α1、GTH-α2、GTH-α3和GTH-α4.其中,GTH-α1和GTH-α2的cDNA都由363个核苷酸组成,编码117个氨基酸;而GTH-α3和GTH-α4都由366个核苷酸组成,编码118个氨基酸.分析表明,四倍体鱼4种不同的GTH-α亚基之间的核苷酸和氨基酸的同源性非常高,均在96%以上;四倍体鱼和原始亲本红鲫和鲤鱼GTH-α亚基氨基酸序列之间的同源性也非常高,如四倍体鱼GTH-α1和原始母本红鲫GTH-α1氨基酸的同源性为99.2%,四倍体鱼GTH-α3和原始父本鲤鱼GTH-α1氨基酸的同源性达到了100%.     

鳙鱼(Hypophthalmichthys nobilis)促性腺激素β亚基的克隆、表达和序列分析

促性腺激素(Gonadotropin Hormone, GTH)是垂体合成和分泌的促进性腺发育成熟的一种重要的糖蛋白激素(Glycoprotein Hormones, GPHs).通过RT-PCR方法从鳙(Hypophthalmichthys nobilis)脑垂体中克隆出两种促性腺激素β亚基,分别是促黄体素亚基(Luteinizing Hormone, LH)和促滤泡激素亚基(Follicle-stimulating Hormone, FSH).鳙鱼FSHβ亚基全长645bp,开放阅读框396bp,编码131个氨基酸(GenBank序列登录号:EF552360);LHβ亚基全长559bp,开放阅读框444bp,编码147个氨基酸(GenBank序列登录号:EF565164).根据鳙鱼与草鱼等鱼类及其他脊椎动物FSHβ和LHβ亚基的氨基酸序列分析表明:在鱼类中LHβ亚基具有高度保守性,而FSHβ亚基分化更快.用β-actin内参法从鳙鱼的垂体、下丘脑、心脏、肝脏和性腺等不同的组织,提取总RNA,用RT-PCR技术分析得出鳙鱼FSHβ和LHβ基因仅在垂体中特异性表达.     

湘云鲫和湘云鲤的形态特征

采用常规测量法和解剖法测定了湘云鲫、湘云鲤的形态特征 .湘云鲫的主要性状为 :背鳍条 3,17～2 0 ,臀鳍条 3 ,6 ,胸鳍条 1,14,腹鳍条 1,8.侧线鳞式 2 9～ 32 66 -V.第一列鳃弓外列鳃耙数 5 0～ 5 2 .下咽齿一行 ,4～ 4,铲齿 .体长为体高的 ( 2 .79± 0 .38)倍 ,为头长的 ( 3.75± 0 .2 5 )倍 ,为尾柄长的 ( 5 .5 9± 0 .33)倍 .头长为吻长的 ( 3.6 8±0 .46 )倍 ,为头高的 ( 1.2 4± 0 .11)倍 .尾柄长为尾柄高的 ( 1.2 3± 0 .11)倍 .湘云鲤的主要性状为 :背鳍条 3,17～ 19,臀鳍条 3 ,6 ,胸鳍条 1,13～ 14,腹鳍条 1,7～ 8.侧线鳞式 32～ 345～ 65～ 6 -V.第一列鳃弓外列鳃耙数 31～ 32 .下咽齿二行 ,2 ,4～ 4,2 ,臼齿 .体长为体高的 ( 3.0 9± 0 .17)倍 ,为头长的 ( 3.71± 0 .19)倍 ,为尾柄长的 ( 5 .70± 0 .6 9)倍 .头长为吻长的 ( 3.0 3± 0 .36 )倍 ,为头高的 ( 1.2 7± 0 .0 8)倍 .尾柄长为尾柄高的 ( 1.2 2± 0 .17)倍 .     

日本白鲫生长激素-I基因编码区cDNA的克隆

从日本白鲫(carassius cuvieri)脑下垂体中提取总RNA，采用逆转录PCR法扩增出日本白鲫生长激素—Ⅰ cDNA编码区，克隆到Pucm-T载体上，序列测定表明日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的开放阅读框含有630bp，其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽，日本白鲫生长激素—Ⅰ基因的克隆成功为该基因的功能及应用研究奠定了基础。     

新型三倍体鲫鱼肌肉营养成分和氨基酸组成分析

运用生物化学方法对新型三倍体鲫鱼及其父本异源四倍体鲫鲤和母本金鱼肌肉中的营养成分和氨基酸含量进行了定量分析.结果表明:新型三倍体鲫鱼肌肉中[干样(mg/g)]氨基酸总含量为102.35,人体必需氨基酸(EAA)(Thr,Val,Met,Ile,Leu,Phe,Lys,Trp)含量为45.20,占氨基酸总含量的44.16%;两种人体半必需氨基酸(HEAA)(His,Arg)含量为11.68,占氨基酸总含量的11.41%;4种呈鲜、甜味氨基酸(Asp,Glu,Gly,Ala)的含量为31.56,占氨基酸总含量的30.84%.通过对比新型三倍体鲫鱼与其父本四倍体鲫鲤、母本金鱼及其他种类鱼的肌肉营养成分,发现4种呈味氨基酸含量远远高于其父母本中相应4种氨基酸含量,人体必需氨基酸含量也远远高于湘云鲫(鲤)等其他同类品种鱼类的含量.     

三倍体鲫鱼早期胚胎发育观察

以异源四倍体鲫鲤为父本,二倍体金鱼为母本通过倍间杂交形成三倍体鲫鱼.对三倍体鲫鱼早期胚胎发育过程进行了观察.三倍体鲫鱼成熟卵子呈黄色,圆形,有粘性,卵径为1.3~1.4 mm.水温为(20±1)℃情况下,卵子受精后1 h,卵裂开始.受精后在~3 h时间段内进行卵裂.受精后3.50 h逐渐进入早、中、晚囊胚期,受精后10 h进入原肠期,受精后15.50 h进入神经胚期,19.0 h后器官开始形成.受精后63~75 h,仔鱼孵化出膜.另外,对三倍体鲫鱼受精卵进行切片观察,结果表明:三倍体囊胚期细胞分裂旺盛,原肠期细胞表现出正常的细胞分裂、细胞变形和迁移行为.结合三倍体鲫鱼胚胎外观发育观察,说明三倍体鱼具有正常的早期胚胎发育过程,为三倍体鱼的大规模生产提供了胚胎发育的生物学依据.     

LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建

LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达.     

东北红豆杉细胞GGPPS基因cDNA的克隆

牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶是红豆杉细胞紫杉醇生物合成途径中的关键酶。试验采用RT-PCR技术从东北红豆杉中克隆GGPPS基因片段,将GGPPS基因片段与pMD20-Tvector连接,转化E.coli DH5α,对阳性克隆进行序列测定。生物信息学分析结果表明,获得GGPPS基因片段长度为371 bp,与GenBank中收录的GGPPS同源性达到99%。为从内生真菌紫杉醇生物合成途径中克隆关键酶基因和高产紫杉醇基因工程菌株的构建提供了借鉴。     

东北红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA克隆及其与紫杉醇产生菌基因组DNA的Southern杂交(英文)

为进一步研究紫杉二烯合成酶的作用机理和紫杉醇生物合成代谢调控机制,采用RT-PCR技术从东北红豆杉(Taxus cuspidata)树叶中获得了紫杉二烯合成酶基因片段,将该片段克隆在载体pGEMT-easy vector上,并转化到E.coliJM109中,经EcoRI酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,获得紫杉二烯合成酶基因片段长度为909 bp,编码303个氨基酸,与GenBank中收录的紫杉二烯合成酶的同源性达到98%;对获得的紫杉二烯合成酶基因和紫杉醇产生菌HQD33基因组DNA进行了Southern杂交。结果初步证实了紫杉二烯合成酶存在于通过内生真菌发酵生产紫杉醇的生物合成途径中。为利用分子生物学手段研究通过内生真菌发酵生产紫杉醇生物合成的代谢调控和构建高产紫杉醇基因工程菌株提供了强有力的理论指导。